SDS-PAGE原理及配方

1、SDS-PAGE1）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制 SDS-PAGE的分离胶（即下层胶）：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围6%胶50-150kD8%胶30-90kD10%胶20-80kD12%胶12-60kD15%胶10-40kD成分配制不冋体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）6%胶51015203050蒸馏水2.04.06.08.012.020.030%Acr-Bis(29:1)1.02.03.04.06.010.01M Tris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%

2、过硫酸铵0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0040.0080.0120.0160.0240.04成分配制不冋体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）8%胶51015203050蒸馏水1.73.35.06.710.016.730%Acr-Bis(29:1)1.32.74.05.38.013.31M Tris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%过硫酸铵0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0030.0060.0090.0120.0180.03成分配制不冋体积SDS-PAGE分离胶

3、所需各成分的体积（毫升）10%胶51015203050蒸馏水1.32.74.05.38.013.330%Acr-Bis(29:1)1.73.35.06.710.016.71M Tris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%过硫酸铵0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02成分配制不冋体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）12%胶51015203050蒸馏水1.02.03.04.06.010.030%Acr-Bis(29:1)2.04.06.08.

4、012.020.01M Tris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%过硫酸铵0.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02成分配制不冋体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积（毫升）15%胶51015203050蒸馏水0.51.01.52.03.05.030%Acr-Bis(29:1)2.55.07.510.015.025.01M Tris,pH8.81.93.85.77.611.419.010%SDS0.050.10.150.20.30.510%过硫酸铵0

5、.050.10.150.20.30.5TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性 PAGE胶。1） 按照如下表格配制 SDS-PAGE的浓缩胶（也称堆积胶、积层胶或上层胶 ）:成分配制不冋体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积（毫升）5%胶2346810蒸馏水1.42.12.74.15.56.830%Acr-Bis(29:1)0.330.50.671.01.31.71M Tris,pH8.80.250.380.50.751.01.2510%SDS0.020.030.040.060.080.110%

6、过硫酸铵0.020.030.040.060.080.1TEMED0.0020.0030.0040.0060.0080.01TBST缓冲液每2L体积中含:1MTrisHCL(pH7.5)100mLNacl16gKCL0.4g吐温1ml1）抗体去除液篥料位K每50mL抗体去除液中含:0.5MTrisHCL (pH6.8)6.25mL10%SDS10mLBeta-ME0.175mL水33.75mLSDS-PAG电泳的基本原理:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进 SDS（十二烷基硫酸钠），SDS 会与变性的多肽， 并使蛋白带负电荷， 由于多肽结合 SDS 的量几乎总是与多肽的分子

7、 量成正比而与其序列无关，因此 SDS 多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽 的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与 1.4g 去污剂结合。当分子量在 15KD 到 200KD 之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式： logMW=K-bX ， 式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移 率对分子量对数作图， 可获得一条标准曲线， 未知蛋白质在相同条件下进行电泳， 根据它的 电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电 泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；制胶缓冲液：浓缩胶选择 pH6.7 ，分离胶选择 pH8.9 ，选择 tris HCL 系统，具体作用 后面介绍；TEMED与AP :促凝作用，加速聚丙烯酰