兔下颌角截骨后咬肌肌球蛋白重链mRNA表达的变化(一)

1、兔下颌角截骨后咬肌肌球蛋白重链mRNA 表达的变化 (一)摘要目的 :通过对兔下颌角弧形截骨后咬肌肌球蛋白重链（MHC）mRNA测定，研究咬肌在骨架缩短后的适应性变化规律。方法 :3 月龄雌性新西兰大白兔 25 只，行左侧下颌角弧形截骨，右侧不手术作自身对照。2、4、8、12 和 24 周分别处死 5 只动物，提取咬肌 MHC、MHC型和内参 GAPDH的 mRNA 进行 RT.PCR。结果 :手术侧较对侧 MHC型的 mRNA 转录降低， 12 周后正常。 MHCmRNA2周时先降低， 4 周后恢复正常。 2、4、8 周 MHC.MHC手术侧较对侧增加。结论 :下颌骨架缩短后咬肌发生适应性的

2、改建，咬肌组分的这种变化有利于建立口颌系统新的平衡和咀嚼功能的恢复。关键词下颌角截骨 ;咬肌 ;肌球蛋白重链 ;兔面部形态是软组织及骨组织相互作用和影响的最终产物，这种互动作用在面部轮廓形态中具有重要意义。最富有变化且体现个性特征的是面中、下 1.3，下颌骨和咬肌对于面下部形态起着重要作用。按照东方人的审美观， 以椭圆形或 “瓜子脸 ”为美，因此，下颌角截骨治疗方腮畸形的措施是目前颅颌面外科常行的美容手术之一。我们用兔模拟临床下颌角截骨，通过对咬肌肌球蛋白重链的两个亚型，即肌球蛋白重链（myo-sinheavychain，MHC）、型 mRNA 表达量的测定，研究咬肌的改建能力及功能的恢复特点

3、，为临床下颌骨架改变手术提供一定的理论依据。1 材料和方法1.1 材料雌性 3 月龄新西兰大白兔25 只（东南大学医学院实验动物中心提供） ，体重 220270g。左侧下颌角截骨，为手术侧，右侧为非手术侧，设为对照。以0.6%戊巴比妥钠静脉注射麻醉。于左侧下颌角处作一长23cm 切口，沿骨面分离咬肌和翼内肌附着部至下颌角前后切迹连线，以前后切迹沟连线作垂线与下颌角形成交点，该交点沿垂线上0.5cm取一定点，以前后切迹点和定点作一条弧线，用磨钻沿弧线打孔定位后截骨。肌肉放置原位，缝合切口。术后3d 用抗生素预防感染。分别于术后 2、4、8、12 和 24 周处死 5 只动物，于定点处取部分咬肌，

4、大小 0.8cm×0.5cm×0.5cm，迅速放入 -70冷冻保存。1.2RNA的提取与 RT.PCR（1）总 RNA的提取 :采用 Trizol 一步法提取组织的总mRNA。（2）总 RNA反转录为 cDNA:根据 RevertaidTMFirstStrandcDNASynthesisKit说明书，以总 mRNA 为模板合成相应的互补 cDNA。反应体系为 20l，反应条件为 70变性 5min，42反转录 1h，最后 705min 灭活反转录酶。（3）PCR:在同一管中扩增MHC、 MHC及 GAPDHmRNA的 cDNA 产物，反应体系为 50l，反应条件为 94预变

5、性 5min，95变性 40s，59退火 1min，72延伸 2min，共循环 29 次，最后 72再延伸 10min。（ 4）本实验所用的 PCR引 物为 MHC上 游5.GGATCCCTGGAGCAGGAGAA.3 、下游5.CTTG-CATTGAGGGCATTCAG.，3大 小173bp;MHC 上 游5.CCCTAAAGCGGGAGAATAAG.3 、下游5 .GCTCTG-CATCGACTCTACCAC，.3 大 小 307bp;GAPDH上 游5.GATCCATTCATTGACCTCCACTA.3、下游5.CACCACCT-TCTTGATGTCGTC，大.3小 703bp。1.3MHCmRNA转录量分析各组分别取8lPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。对经EB 染色后的目的条带和内参条带进行摄像，应用Imagemaster 图像分析仪进行扫描，TotalLab 图像分析软件分析图谱，计算目的 MHC 的相对含量。目的 mRNA 的相对含量 :某 mRNA 水平相对值 =目的条带光密度值 .内参GAPDH条带光密度值。2 结果2.1PCR产物的凝胶电泳见图 1。PCR产物经凝胶电泳鉴定， 扩增片断特图 1 不同时间 MHC、 MHC和 GAPDH的电泳条带2.2 统计结果见表 1。术后 2 周左侧咬肌 MHC和 MHC的 mRNA表达量较右侧显著下