实验室常用缓冲液配置方案

1、实验室常用缓冲液配置方案(可编辑)实验室常用缓冲液配置方案实验室常用缓冲液配置方案1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度:1MTris-HCl配制量:1L配制方法:1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCl7.4约70ml7.6约60ml8.0约42ml4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10XTEBuffer

2、(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度:100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量:1L配制方法:1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris,HClBuffer(PH7.4，7.6，8.0)100ml500mMEDTA(PH8.0)20ml2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3)1.5MTris-HCl(pH8.8)组份浓度:1.5MTris-HCl配制量:1L配制方法:1. 称量181.7gTris置于1L烧杯中。2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容

3、至1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1,溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3M醋酸钠(pH5.2)组份浓度:3M醋酸钠配制量:100ml配制方法:NaAc?3H2贺于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2. 加入冰醋酸调节pH值至5.23. 加去离子水将溶液定容至100ml4. 高温高压灭菌后，室温保存。5)PBSBuffer组份浓度:137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量:1L配制方法:1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

4、。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mMCaCl2和0.5mMMgCl2。6)10M醋酸铵组份浓度:10M醋酸铵配制量:100ml配制方法:1. 称量77.1g醋酸铵置于100,200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100ml。3. 使用0.22mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意

5、:醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法:1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8)10,(W/V)SDS组份浓度:10,(W/V)SDS配制量:100ml配制方法:1.称量10g高纯度的SDSfi于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解2. 滴加浓盐酸调节pH值至7.23. 将溶

6、液定容至100ml后，室温保存。9)2NNaOH组份浓度:2NNaOH配制量:100ml配制方法:1 .量取80ml去离子水置于100,200ml塑料烧杯中(NaOH容解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2 .称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOHg全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10)2.5NHCl组份浓度:2.5NHCl配制量:100ml配制方法:1. 在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸(11.6N)，均匀混合。2. 室温保存。11)5MNaCl组份浓度:5MNaCl配制量:1L配制方

7、法:1. 称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。11)20,(W/V)Glucose组份浓度:20,(W/V)Glucose配制量:100ml配制方法:1. 称取20gGlucose置于100,200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100ml。3. 高温高压灭菌后，4保存。12)SolutionI(质粒提取用)组份浓度:25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L配制方法:1.量取下

8、列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HCl(PH8.0)25ml0.5MEDTA(PH8.0)20ml20,Glucose(1.11M)45mldH2O910ml2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。13)SolutionII(质粒提取用)组份浓度:200mMNaO，H1,(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10,SDS50ml2NNaOH50ml2 .加灭菌水定容至500ml,充分混匀3 .室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意:SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌1

9、4)SolutionIII(质粒提取用)组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。KOAc147g?CH3COOH57.5ml2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。15)0.5MEDTA(pH8.0)组份浓度:0.5MEDTA配制量:1L配制方法：称取186.1gNa2EDTA?2H20置于1L烧杯中。2. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOHS节pH值至8.0(约20gNaOH)。注意:pH值至8.0时，EDTAt能完全溶解。4. 加去离

10、子水将溶液定容至1L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16)1MDTT组份浓度:1MDTT配制量:20ml配制方法:1. 称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。2. 加20ml的0.01MNaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。17)10mMATP组份浓度:10mMATP配制量:20ml配制方法:1 .称取121mgNa2ATP?3H2O加入到50ml塑料离心管内。2 .加20ml的25mMTris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spe

11、rmidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):力口100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白)，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml

12、,然后分装成小份贮存于-20。1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制

13、等摩尔的Na2EDT/WNaOH§液(0.5mol/L),混合后形成EDTA勺三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA?2H2020g的NaOH并溶于水中，定容至1L。1mol/LHEPES:将23.8gHEPES§于约90ml的水中，用NaOHMpH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。1mol/LHCl:水中。25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-B-D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2?6H2OF足量的水中，定容至U100ml。100mmol/LPMSF溶解174mg的P

14、MSF笛甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase(无DNase)(DNase,freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA#于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA1失活。用1mol/L的Tris,HCl调pH至7.5,于-20贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌)，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10,SDS(十二烷基硫酸钠)：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于