脂肪酸提取和检测的方案

1、固液比分别为1：6，1：7，1：8，1：9，1：10微波功率500W，提取时间5min，温度50称取250g的海带粉装入500ml的大圆底烧瓶，加入石油醚（乙醇、乙醚）用微波萃取法提取脂肪酸，500ml大圆底烧瓶称重海带粉碎成粉，过筛60称重滤液浓缩抽滤固液比分别为1：6，1：7，1：8，1：9，1：10微波功率500W，提取时间5：00，温度50集中收集，一起浓缩滤渣继续提取，提取3次16 / 16文档可自由编辑打印称100ml的空锥形瓶，称取5g的样品加入到100ml的锥形瓶中沸水加热1小时加10mL0.5mol/L 氢氧化钠乙醇溶液，在瓶口上插一小漏斗，漏斗上再盖一块玻璃反应完成后移去漏

2、斗，继续加热除去乙醇。再加人10mL 蒸馏水，加热，使皂化物溶解成混合液。加入10ml，0.5mol/L的硫酸，在瓶口上插一小漏斗，漏斗上再盖一块玻璃加人10mL 蒸馏水加热1小时加浓盐酸(约5mL)使之呈酸性加热，可见脂肪酸呈油状浮于上层时，用分液漏斗分开上下层油状物分层，用分液漏斗分开上下层，上次用热水重复洗涤三次，洗去甘油、硫酸等，静置澄清，上清液即为脂肪酸上层用热水重复洗涤三次，每次用水100m1，除去混杂于脂肪中的无机盐、甘油、盐酸等，静置澄清，上清液即为脂肪酸加入25ml,0.5mol/l的KOH-CH3OH,25ml石油醚加入甲醇7ml和3-4滴BF3-乙醚冷却加热60，处理30

3、min加入2g经预处理的样品1称量两个100ml圆底烧瓶中加入为处理的2g未经预处理的样品冷却后加入25ml饱和NaCl溶液至中性，取上层清夜，称重加入25ml,10：1的浓硫酸-CH3OH再加蒸馏水至瓶颈，取出上清，再用2ml石油醚洗多次，合并上清，放入小瓶中待测，称重加入2ml石油醚加热60，处理30min参考文献：1寇秀颖，于国萍. 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究. 食品研究与开发,2005, 26(2),起止页码2 闰玉霞, 李平林, 蔡扬鹏, 李八方. 利用G C 一M S 测定不同甲醋化条件下沙蜚脂肪酸组成. 中国海洋药物杂志，2010，第29卷第6期3 何勇，彭莺，黎军. 硫酸催化

4、甲酯化气相色谱法测肥皂产品中的脂肪酸分布及总脂肪物含量. 顺德职业技术学院学报,2011,7: 第9 卷第3 期4 曾虹燕,李昌珠,蒋丽娟. 用GC-MS分析不同方法提取的茶油脂肪酸.热带亚热带植物学报，2005,13(3):271-2745 蔡心尧, 尹建军. 海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法.无锡轻工大学学报，1999，9：第18卷第5期6 罗盛旭，梁振益，陈佩. 海带脂肪酸的提取及其成分分析.海南大学学报自然科学，2005，9：第23卷第3期7 冯小峻，邓舟，陆慧宁等.GN海带新品系脂肪酸的气相色谱一质谱联用分析. 中山大学学报，2010，11：第49卷第6期8 纪丽丽，宋文东，刘建秀.

5、红树林植物露兜中挥发油和脂肪酸的测定. 现代食品科技, 2008:V0124，No69 朱晓楠,魏士刚等. 微波辅助提取一气相色谱质谱联用测定肉桂中的挥发油. 高等学校化学学报，2009，7：V0130，No7，1300一13041.脂肪化学名甘油三酯，脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。 脂肪在多数有机溶剂中溶解，但不溶解于水。2.多不饱和脂肪酸指含有两个或两个以上双键且碳链长度为1822个碳原子的直链脂肪酸。通常分为omega3和omega6，在多不饱合脂肪酸分子中，距羧基最

6、远端的双键在倒数第3个碳原子上的称为omega3；在第六个碳原子上的，则称为omega63.单不饱和脂肪酸,在分子结构中仅有一个双键；多不饱和脂肪酸,在分子结构中含两个或两个以上双键脂肪转化为脂肪酸的方法：1.脂肪在碱性溶液底下水解生成脂肪酸钠，然后加入硫酸，溶于水，不溶于乙醇。无水物是白色晶体或粉末，浓缩把乙醇蒸出，得到脂肪酸脂肪酸提取：称200g的海带粉，加入固液比为1:5的乙醇在50,500W的条件下用微波法提取，抽滤，取滤液静置，滤渣再加入1:4的乙醇溶剂进行二次提取，提取条件为50,500W的条件下进行,提取后抽滤，静置至一段时候后,充分析出白色固体后抽滤进行浓缩,在浓缩前可适当加入

7、甲醇,再经行浓缩现象:甲酯化：酸化甲酯化1.加入正己烷4 ml，浓度2 mol的氢氧化钾一甲醇溶液2 ml，剧烈振摇12 min，30度水浴反应20 min。加入三氟化硼-甲醇溶液，3 000 rmin离心10min。取上清液待测。其中三氟化硼法能利用快速皂化使脂肪酸盐直接转化成脂肪酸甲酯，减少酸化提取手续2.取13 g浸膏，加05mol·LKOH-CH3OH溶液25 mL，苯一正己烷(体积比为1：1)溶液25 mL，室温下振荡5min后，加热至60，处理20 min，冷却后，加入饱和NaCI溶液25 mL，静置分层后取上层清液进行GCMS分析。3.样品5 g ，于小烧杯中，加入乙醚

8、16.7mL，正己烷8.3mL，使脂肪完全溶解后转入250mL 容量瓶，加入甲醇25mL，再加入0.8mol/L 甲醇-KOH 溶液25mL，摇匀后静置10min。加蒸馏水至刻度，吸取上层溶液，待作GC-MS 分析。气相条件：进样口温度270，温100，以10/min升到170保持1min 后，以3/min 升到250，保持4min；流速：恒流模式2.4mL/min，分流进样分流比为50:1。测定方法：将沙棘油进行氢氧化钾- 甲醇室温酯化法处理后进样分析，进样量0 . 2L。按气相条件，用GC-MS 测定样品后得到色谱图。利用气质联用仪所带的标准图谱库的质谱数据进行自动检索，同时根据质谱图及相

9、关文献鉴定出主要色谱峰对应的物质名称，并使用数据处理系统对色谱峰进行面积归一化处理，从而计算出各物质相对含量。加入3-4滴BF3-乙醚溶液，将混合物放置在70的水浴中加热3分钟，冷却后，加入1ml正己烷，振摇使甲酯转入正己烷层4.称取20 mg提取出的茶籽油于小样品瓶中，加入15 mL正己烷溶解油样，摇匀，加入60“L乙酸甲酯，摇匀静置10 min。用移液枪往每个小瓶中加入100“L 27 mgmL甲醇钠甲醇溶液，在振荡器上振荡2 min，然后静置20 min以上使甲酯化完全，加入饱和草酸60¨L使甲酯化终止，摇匀静置于一24冰箱内20 min。取出，将样液通过无水硫酸钠微柱脱水，用

10、小瓶收集滤液约12 mL上机测定。5.取1ml样品,加2N的甲醇氢氧化钾溶液0.5ml,然后加10ml正庚烷在120度的温度下加热半小时就可以直接进样了.也可以用比较复杂的方法进行,样品大约20克,无水甲醇50ml左右,加浓硫酸5ml,在不低于95度的水浴中回流六小时以上,然后萃取甲酯.萃取后甲酯用无水乙醇以1:3或1;5比列稀释后进样即可.6.加入3ml的KOH甲醇溶液，70水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止35min，取上

11、层油样1ml于试样瓶中，进GC分析脂肪酸甲酯化方法的选择。在对食物样品中的反式脂肪酸含量进行分析测定前，需对其甲酯化处理。甲酯化的方法很多，常用的有氢氧化钾一甲醇法、浓硫酸一甲醇法、三氟化硼一甲醇法。氢氧化钾-甲醇法是一种在常温下进行的碱处理方法，其原理是将油脂降解为甘油和脂肪酸，脂肪酸与甲醇结合生成瞻肪酸甲酯。该方法无需冷凝回流，常温下酯化效果好，组分完全分离，适用范围广。可用于分析动植物油脂、食品中油脂、藻类、微生物类脂肪酸，目操作简单。省时省力。体积比1:15 浓硫酸-甲醇溶液配取0.5ml浓硫酸和2.5ml的,加入到上述样品中摇匀,组装回流装置称取1g样品加入到50ml的圆底烧瓶内,加入5ml的甲醇,摇匀,稍微加热至溶解酸化在60下水浴加热回流,回流时间为30min回流时加入搅拌子充分搅拌,避光回流冷却后,加入15ml的石油醚萃取,提出上层,下层重复前萃取步骤称量100ml空瓶子重量,合并上层溶液到100ml的圆底烧瓶内,在50下水浴浓缩至干,称重样品点板1mol/L的KOH-CH3OH加入0.4g的KOH固体2.5ml的甲醇内,搅拌,