脓汁和粪便标本中病原菌的检测

1、烦恼有何惧怕，既然躲不掉，就调好心态与它共存。心向阳光，何惧风霜。茫茫人海你我相遇就是缘分，欢迎下载！器材准备器材准备脓汁标本脓汁标本1 1支，粪便标本支，粪便标本1 1支；碘酒棉球支；碘酒棉球1 1瓶，酒精棉球瓶，酒精棉球1 1瓶，眼科镊子瓶，眼科镊子2 2把；伊红美兰平板把；伊红美兰平板2 2个，营养琼脂平板个，营养琼脂平板5 5个。个。自然界中的微生物v已经发现的微生物超过13万5千种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。它们存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹 。v空气、水、土壤、人体的体表以

2、及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。皮肤菌群示意图皮肤菌群示意图 存在于人类肠道的细菌细菌超过800种，数量可达100万亿（1014），菌体重量11.5公斤（next slide ）MICROBIAL LOCATOR MAP OF THE BODY人体谁当家作主？肠道菌群当家人做主？!医学微生物学实验综合性实验三 Comprehensive Experiment NO:3vEnvironmental flora and Normal Bacterial flora on Skin空气的细菌学检查P38手指皮肤的细菌学检查P41空气的细菌学检查 空气空气是人类赖以生存的环境之一，

3、也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶气溶胶胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。v环境：不利于微生物生长。v种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌的数量比较多。v作用：可迅速全球传播。v危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道传染病。 按照无菌操作的方法打开、盖上平皿盖。v实验方法(自然沉降法):根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），可了解空气的污染情况。v实验步骤：每组1个琼

4、脂平板，做标记。选择采样地点：实验室、卫生间或任选地点。严格无菌操作，将平板盖打开，移动放置在平皿边缘；平板暴露于空气中15分钟，反向盖上。37温箱培养24小时，观察结果。 CFU/m3 50000NAT86N(直径7cm平板）。 N：平板上的菌落数。 A：平板面积(平方厘米)。 T：采样时间(分钟)。空气的细菌学检查空气的细菌学检查 暴露法（暴露法（Exposure Method)Exposure Method)组号采样地点采样时间(min)菌落形成单位(CFU)1实验室152卫生间153门诊大厅154呼吸科走廊155呼吸科病房156呼吸科ICU157外科走廊158外科病房159外科ICU1

5、510外科治疗室15手指皮肤的细菌学检查v在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。经手传播的疾病，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手传播的疾病。v常住菌：常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。v暂住菌：暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。v实验设计：假设同一只手中间三个手指皮肤环境密切相关、细菌数量相当，分别作洗手、消毒前后细菌学检查。常规的

6、洗手方法常规的洗手方法（甲和丙操作）v将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。v反复搓揉双手，搓揉时间不少于 30秒。v用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。能有效地去除大多数暂住菌。医学微生物学教学实验室标准洗手方法标准洗手方法（乙丁操作）v用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。v分别搓擦分别搓擦10101515次。次。v保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。1.1.掌心对掌心搓擦掌心对掌心搓擦 2.2.手指交错掌心对手背搓擦手指交错掌心对手背搓擦 3.3.手指交错掌心对掌心搓擦手指交错掌心对掌心搓擦

7、4.4.两手互握互搓指背两手互握互搓指背 5.5.拇指在掌中转动搓擦拇指在掌中转动搓擦 6.6.指尖在掌心中搓擦指尖在掌心中搓擦v9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2022-3-22022-3-2Wednesday, March 02, 2022v10、低头要有勇气，抬头要有低气。2022-3-22022-3-22022-3-23/2/2022 11:48:22 PMv11、人总是珍惜为得到。2022-3-22022-3-22022-3-2Mar-222-Mar-22v12、人乱于心，不宽余请。2022-3-22022-3-22022-3-2Wednesday, March 02, 2

8、022v13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2022-3-22022-3-22022-3-22022-3-23/2/2022v14、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月2日星期三2022-3-22022-3-22022-3-2v15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。2022年3月2022-3-22022-3-22022-3-23/2/2022v16、业余生活要有意义，不要越轨。2022-3-22022-3-2March 2, 2022v17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2022-3-22022-3-22022-3-22022-3-2手指皮肤的细菌学检查甲和乙、丙和丁共用甲

9、和乙、丙和丁共用1 1个平板个平板上:甲、丙常规洗手下:乙、丁标准洗手第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 丙丁1 2 3 4丙丁1 2 3 4平板面朝下，三个手指分别在培养基表面触摸23厘米脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程培养基的制备细菌的分离培养细菌的纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验等细菌的血清学试验、结果分析实验论文撰写平板划线分离法平板划线分离法 Streak Plate MethodStreak Plate Methodv借助于划线，将混杂的多种多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各

10、自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。Colony:在固体培养基表面或基内，由单个单个细菌在局部位置不断增值，形成肉眼可见的细菌集团，称为单菌落单菌落。 Colony Forming Units:由单个或多个菌体，同种或不同种细菌，在固体培基上生长繁殖堆积形成肉眼可见的细菌集落，称为菌落形成单位菌落形成单位。 Lawn:在固体培养基表面，由许多菌落融合在一起形成一片密集的的细菌群落,称为菌苔菌苔 。v方法:见下一张幻灯片。v充分利用平板面积，不能划破琼脂。划线示意图分离结果接种环烧灼灭菌。取标本36ul。握持平板，当看到平板表面像镜面有折光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，

11、以便控制划线。 接种环与平板呈3040度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。甲、乙烧掉接种环上多余的标本。 转动平板，通过第一区57次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划第二区。转动平板，接种环通过第二区1次，划第三区。 转动平板，接种环通过第三区1次，划第四区。 划第五区。 每区划线不少于30条，整个平板划线不少于150条线。上下两条线重叠不影响分离结果。第一区划线不得超过1/5平板， Flame loop, cool.Pick up 1 loopful of specimen under sterile preca

12、ution .Hold the agar plate in such a way that the surface reflects the light like mirror, and while streaking, the lines are clearly visible. Start streaking. One should make as many separate lines as possible without overlapping . Streak at least 30 lines in each area. Flame loop, cool. Turn plate,

13、 and continue streaking Turn plate, continue streakingTurn plate, continue streaking Turn plate, continue streakingStreak at least 150 lines each plate, flame loop before keeping it back.第一区占1/2平板，划线稀疏，没有典型单菌落。第一区划线正确。第二区? 第三五区？划线分离失败！划线分离成功平板上有许多典型平板上有许多典型单菌落可供挑选。单菌落可供挑选。 线段划得越密集，细菌线段划得越密集，细菌分布前区密集

14、后区稀疏，分布前区密集后区稀疏，获得典型菌落越多。获得典型菌落越多。 甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 讲 台左右v甲脓汁标本(pus specimen)营养琼脂平板(nutrient agar plate)v乙脓汁标本(pus specimen) 营养琼脂平板(nutrient agar plate）v丙粪便标本(stool specimen)伊红美蓝(eosin methylene blue plate）v丁粪便标本(stool specimen) 伊红美蓝平板

15、(EMB plate）小组实验分工杆1214cm环直径24mm绝缘柄10cm接种环接种环 inoculatinginoculating looploop杆1214cm针长46cm接种针接种针 inoculatinginoculating needleneedleInstruments used to inoculate media: standard loop, needle, cotton-tipped swab, and pipette with safety bulb. 绝缘柄10cm接种环（白金铒）烧灼灭菌方法 Flame Loopv使用前，将白金铒（白金丝、镍铬丝制成）直立直立火焰中

16、，烧红烧红灭菌（35秒钟冷却）。v使用后，先在火焰背面背面将接种环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆裂四溅，污染环境。v金属杆旋转旋转通过火焰23次，杀灭表面微生物。酒精灯无菌操作区外焰外焰: :又称氧化焰又称氧化焰, ,火火焰呈淡紫色焰呈淡紫色, ,温度较高。温度较高。无菌操作区无菌操作区: :火焰周火焰周围围101020cm20cm范围内。范围内。环面水平水平离开液面：快速6ul,慢速2ul。环面垂直垂直离开液面：快速3ul,慢速1ul。接种环取液体标本的方法接种环取液体标本的方法环直径环直径3mm3mm无菌取材基本步骤无菌取材基本步骤Transfer of Bacteria: As

17、eptic TechniqueTransfer of Bacteria: Aseptic Technique 在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之夹持之（棉塞下端不得接触到管口外任何物体）管口迅速通过火焰3次取标本取标本管口通过火焰三次，塞棉塞。Inoculating procedures接种环和平板的握持方法接种环和平板的握持方法How to hold agar plate and inoculation loopv接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快，50um在0.4s内扩散开，5um通过呼吸道直接到达肺

18、泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。v实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。生物安全警告BIOHAZARD三级生物安全防护思考题v为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?v为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?v为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害?v做细菌培养时，平板为什么要倒置?v培养细菌的常用方法有哪些?v从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项? 实验内容v空气的细菌学检查P38营养琼脂平板(1组1个）v手指皮肤的细菌学检查P41营养琼脂平板(2人1个 划分8格）v平板划线分离法P8 甲脓汁标本营养琼脂平板乙脓汁标本营养琼脂平板丙粪便标本伊红美蓝平板丁粪便标本伊红美蓝平板power socket test tube rack Alcohol burner kidney basintest tube rack