冻干粉针剂主产验证要点

1、五、冻干粉针剂主产验证要点 这里选择介绍冻干粉针剂生产验证要点，作为所有药物剂型生产工艺验证的典型剖析。 冻干粉针剂是环境及工艺控制条件要求很高的剂型。冻干的工艺需要验证，通过验证确定冻干的程序，以保证产品的成型、水分、其他物理化学指标，以及产品的贮存稳定性。除这些与具体产品品种相关的内容以外，还有一些共性的内容择要如下。 1、厂房与设施验证 （l）净化空调系统（HVAC系统） 验证要点说明：高效过滤器检漏、压差、换气次数等。 （2）生产厂房 验证要点说明：布局及气流方向合理、温湿度、洁净度达规范标准。 （3）充氮保护用氮气（N2）系统 验证要点说明：纯度符合工艺要求，微生物1个m3。 （4）

2、压缩空气系统 验证要点说明：微生物1个/m3。压力、无油性（对与产品直接质量相关的压缩空气的要求）。 （5）纯蒸汽系统验证要点说明：胶塞、无菌药液接受罐的灭菌应用纯蒸汽，其他可用经适当过滤的工业蒸汽。纯蒸汽的冷凝水应达注射用水标准 2、生产设备及工艺验证 （1）纯化水系统 验证要点说明：供水能力达设计标准，水质达中国药典标准。 （2）注射用水系统 验证要点说明：供水能力达设计标准，水质达中国药典标准并须做澄明度检查。 （3）洗瓶及灭菌设备 验证要点说明：洗瓶效果是使最终淋洗水样澄明度检查不溶性微粒及细菌内毒素符合中国药典要求（最终淋洗水样应在瓶内充分振摇，以使水样具代表性）；干热灭菌应不得检出

3、微生物，细菌内毒素下降3个对数单位。 （4）洗塞机及洗塞程序 验证要点说明：洗塞效果应使澄明度检查不溶性微粒、菌检、细菌内毒素符合标准。 （5）配制罐系统 验证要点说明：能力及功能上，如升降温速度、搅拌、喷淋清洁效果及称量准确度符合要求。 （6）灭菌器 验证要点说明：用于口罩、工作服、手套、过滤器、灌装机部件等的灭菌器应做灭菌程序是否达到设定标准的验证试验；胶塞如用工业蒸汽灭菌，须先装人可灭菌的塑料袋，参照中国药典灭菌法的要求。 （7）药液除菌过滤器验证要点说明：除菌能力应符合除菌过滤器的要求，如起泡点压力不低于0.31MPa。 （8）灌装机 验证要点说明：速度、充氮性能、不同灌装速度下装量达

4、到中国药典要求、灌装品密封的完好性（仪器监测试验或微生物浸泡试验）。 （9）冻干 验证要点说明：产品物理化学指标及稳定性达到标准。 （10）压盖 验证要点说明：完好性外观检查、手拧锅盖时，不得有松动现象。 （11）清洁验证 验证要点说明：冻干机如带在线清洁设备的，可以最终淋洗水达中国药典要求作为标准，一般可只测电导、热原、微生物或pH、氯化物、按盐。 配制系统可测首批残留物或总有机碳。通过验证应确定已清洁设备存放时限，即再次使用时，关键表面微生物仍能达标的最长存放时间。 （12）在线灭菌 验证要点说明：配制系统及冻干如带在线灭菌设备的，可按中国药典灭菌法要求验证。如冻干腔室只能靠消毒剂消毒的，

5、应通过验证确定偷音及消毒程序。验证合格的标准可参照我国GMP对100级洁净室（区）微生物的控制要求。 （13）培养基灌装试验 验证要点说明：按WHO的GMP（1992年版）要求。本试验为无菌保证能力的综合考察试验，每年2次，每次3批，每批灌装量不得低于3000支或正常生产批量，微生物污染概率不得超过0.1%（置信度95%）。 （14）贴签机 验证要点说明：条形码识别、标签计数功能。 3、人员方面 对无菌操作人员进行培训与考核。人员通过培养基灌装试验考核，3批培养基无菌灌封结果不达标时，人员不得上岗。 4、计量设备及仪表校准冻干粉针剂生产中所用的计量设备及仪表，如天平、地磅、压力表、温度计、pH

6、计等应按规定进行校准，并定期进行再校验。 第十二章卫生管理：清洁验证 我国GMP（1998年修订）第六章卫生有九条。其中第四十九条规定：“药品生产车”。工序、岗位均应按生产和空气洁净度级别的要求制定厂房、设备、容器等清洁规程，容应包括：清洁方法、程序、间隔时间，使用的清洁剂或消毒剂，清洁工具的清洁方法句存放地点。”GMP附录一第4点强调了“设备清洗”是药品生产过程验证必须包括的内容。 美国FDA1993年公布的清洁程序验证检查指南也只涉及对设备中化学残留物的清洁验证。“卫生”是一个广义的概念，包含的内容丰富。仅对药品生产而言，就有环境卫生、生产工艺卫生、人员卫生等，而对GMP要求而言，主要是药

7、品生产企业应有防治污染的卫生措施。厂房、设备、容器等都需要清洁，也都需要验证。特别是设备的清洗要足以防止因清洁不当而引起的交叉污染。污染包括交叉污染、降解物污染、微粒污染、微生物污染及热原污染等。药品生产历史上的教训，使得GMP对生产青霉素等高致敏性药品、- 内酷胶结构类药品、避孕药品、激素类、抗肿瘤类化学药品等特别警觉，即使不是上述几类化学药品，也必须对生产过化学药品的设备进行清洗。1988年美国发生考来烯胺消胆胺）药品被杀虫剂的中间体及其降解物污染的事件，究其原因就是考来烯胺生产过程中使用的回收溶剂的桶，曾经储存过杀虫剂生产过程中的回收溶剂，被污染的原料药考来烯肢被送至其他地方的工厂制成成

8、品，这就导致了该厂流化床干燥袋被杀虫剂污染，并且依次导致了在该厂生产的各批产品的交叉污染。 另一个鲜明的例子是：1992年FDA对一个外国原料药生产厂发出严重警告：该厂用同一设备既生产强效类固醇产品又生产非类固醇产品。该公司是一家生产多种原料药的药厂，FDA认为交叉污染的可能性很大，而且这种潜在的交叉污染使公众的健康面临严重危险。在调查时，该公司刚开始了一项清洁验证项目，但FDA认为它还不合格。不合格力原因之一是该公司仅仅是寻找证据，证明上述化合物不存在，而在该公司清洁液的薄层三析检验中却找到了证据，证明有早先工艺过程中反应副产物和降解的残留物存在。清洁验证与其他程序验证一样，可能有许多种的验

9、证方式。清洁验证的中心是药物交叉污染及微生物污染是否达到可以接受的程度。但对任何验证的检验都取决于科学数据是否表明该系统能始终如一地按预期的那样运行，而且产生的结果能一贯地符合预定的标准。第一节清洁验证的概念与程序药品生产的每道工序完成之后，及时对设备进行清洗是防止药品污染和交叉污染的必要措施。我国GMP（1998年修订）第三十一条规定：“设备的设计、选型、安装应符合上产要求，易于清洗、消毒或灭菌，便于生产操作和维修、保养，并能防止差错和减少污染。” 清洁验证的概念 大部分的药物剂型的生产设备在完成生产后，总会残留若干原辅料，并有可能；被微生物污染特别是非无菌药品）。若不及时对这些与药物直接接

10、触的设备清洗，则可能使微生物在适宜的温湿度之下以残留物中的有机物为营养进行繁殖，并产生各种代谢物。若这些残留物和微生物进入下批生产过程，必然会对产品造成污染。 一、清洁的概念 在药品生产中，绝对意义上的、不含任何残留物的清洁状态是不存在的；相对意义上的清洁概念就是经过清洗后的设备中的残留物（包括微生物）量不影响下批产品定的疗效、质量和安全性的状态。 通过有效的清洗，可将上批生产残留在生产设备中的物质减少到不会影响下批产品疗效、质量和安全性的程度。在液体制剂生产中，清洁除去了微生物繁殖需要的有机物，从而创造了不利于微生物繁殖的客观条件，便于将设备中的微生物污染控制在一个低的污染水平。 设备的清洁

11、程度，取决于残留物性质、设备的结构材质、清洗的方法。对于确定的产品和确定的设备，清洁效果取决于清洗的方法。而确定的清洗方法，需要制定书面的清洁规程，它包括清洗方法的所有方面，如清洗前设备的拆卸、清洁剂的种类和浓度、清洗的次序和温度、压力、PH等各种参数。 清洁验证的概念 设备的清洗必须按照清洁规程进行，因为清洁规程是经过清洁验证而确认的。现行的各种版本的GMP都规定了对清洁规程进行验证。清洁验证目的旨在证明通过设定的清洗程序进行清洁后可以达到的“洁净”状态。 清洁验证就是通过科学的方法采集足够的数据，以证明按规定方法清洁后的设备，能始终如一地达到预定的清洁标准。 清洁验证通常以实际的材料和组分

12、进行清洁验证试验，并与设备性能确认试验或工艺验证结合起来进行。 二、设备清洁规程应遵循的原则 GMP要求设备易于清洗，因此，设备的在线清洗（CIP）自动化功能，将成为设备清洗技术的发展方向。在线清洗（CIP）是指系统或设备在原安装位置不作任何移动条件下的清洗工作。在线清洗也称为原位清洗。 设备的清洁规程应遵循以下原则： （1）有明确的清洗方法和清洗周期。 （2）有明确的关键设备的清洗验证方法。 （3）清洗过程及清洗后检查的有关数据要有记录并保存。 （4）无菌药品生产设备的清洗，尤其是直接接触药品的部位和部件必须灭菌，并标明灭菌日期，必要时要进行微生物学的验证。经灭菌的设备应在3天内使用。（5）

13、某些可移动的设备可移到清洗区进行清洗、消毒和灭鼠设备设计尽量采用自动化CIP。 （6）同一设备连续加工同一无菌产品时，每批之间要清洗灭菌；同一设备加工同一非菌产品时，至少每周或每生产3批后进行全面的清洗。后者批次问的清洗程序无需验证， 达到视觉清洁标准即可。 美国FDA在清洁程序验证检查指南（1993年）中提出的一般要求是： （1）有书面的标准操作程序，详细规定各种设备的清洁过程。 （2）有1个同品种不同批次间的清洁程序，也要有1个不同的换品种时的清洁程序。 （3）有清除水溶性残留物的程序，又有清除非水溶性残留物的程序，该书面规程应指出两者区别，并说明何时执行哪种程序。 （4）清洁程序本身产生

14、的任何残留物（洗涤剂、溶剂等）也应从设备中清除。 （5）具有指导如何验证的一般规程。此规程对验证负责人、验证批准人、合格标准以及何时需要再验证等作出规定。 （6）应预先准备好具体的书面的验证方案，以便对每个生产系统或每台设备进行研究。方案中应提出诸如取样过程、将使用的分析方法及方法的灵敏度等问题。 （7）应根据方案进行验证工作并记录验证结果。 （8）应有一份由管理部门批准的、阐述清洁程序是否有效的最终验证报告。数据应提共残留物已降低到一个“可接受水平”的结论。 三、清洁验证的程序 科学、合理、完整的清洁验证，一般可按以下几个工作阶段依次进行： （l）选定清洁方法，制定清洁规程； （2）制定验证

15、方案，包括确定最难清除的物质和最难清洁的设备（部位），确立合格标准，制定取样和检验的方法； （3）按书面的验证方案开展试验，获取数据，评价结果，得出结论； （4）如验证的结果表明清洁程序无法确保设备清洁达到预定标准，则需修改程序并重新验证。清洁验证作为性能确认（即模拟生产）及工艺验证的内容，与设备性能确认或工艺验证一起实施。清洁验证列人本章的意义是从卫生角度来认识的。 第二节清洁规程的制定与实施 前已述，清洁验证的第一步是选定清洁方法、制定清洁规程。 一、选定清洁方式 首先是选择清洁方式。选择清洁方式的基本出发点是全面考虑设备的结构与材质、产品的性质以及设备的用途。工艺设备的清洁，通常采用手工

16、清洁、自动清洁的方式，或两中方式的结合。 1、手工清洁方式 手工清洁方式的特征是主要由人工持清洁工具清洗设备，常用的清洁工具一般有能喷面清洁剂和淋洗水的喷枪、刷子、尼龙清洁块等。 清洗前通常需要将设备拆卸到一定程度并转移到专门的清洗场所。很多固体剂的生产设备如制粒机、压片机等大多采用人工清洗方式。因为这些设备相对死角较多，生产的产品易粘结在设备表面、易结块等情况，则需要进行一定程度的拆卸，并用人工或专用设备清洗。 2、自动清洁方式 自动清洁方式的特点是由自动的专门设备按一定的程序自动完成清洁的过程。通常只要将清洗装置同待清洗的设备相连接，由清洗装置按预定的程序完成整个清洁过程。大容量注射剂的配

17、制系统多采用这种方式。因为这些设备体积较大（如配液罐）且内表面光滑无死角；生产使用的物料和产品易溶于水或一定的清洁剂，所以比较适合采用自动或半自动的在线清洗（CIP）方式。即，清洁剂和淋洗水在泵的驱动下以一定的压力、速度和流量流经待清洗设备的管道，或通过专门设计的喷淋头均匀喷洒在设备内表面，从而达到清洗的目的。 二、制定清洁规程 美国FDA清洁程序验证检查指南强调了要有“清洁程序的规程及文件”，还应检查被验证的清洁程序的细节与专一性以及所要求的文件（S3P、记录表格）。因为不管采用何种清洁方式，都必须制定一份详细的书面规程，规定每一台设备的清洗程序，从而保证每个操作人员都能以可重复的方式对其清

18、洗，并获得相同的清洁效果。这也是进行验证的前提。 所有清洁规程至少应对以下方面作出规定： （1）清洁开始前对设备必要的拆卸要求和清洁完成后的装配要求； （2）使用清洁剂溶液的浓度和数量（容量）； （3）清洁剂的名称、成分和规格； （4）配制清洁剂溶液的方法； （5）清洁剂溶液接触设备表面的时间、温度、流速等关键参数； （6）淋洗要求； （7）生产结束至开始清洁的最长时间； （8）连续生产的最长时间； （9）已清洁设备用于下次生产前的最长存放时间。 三、清洁规程的实虚 1、拆卸 应规定清洁一台设备需要拆卸的程度。大多数设备，如输液剂的灌装机在清洁前需要预先拆卸到一定程度；固体制剂的制粒机。压片机

19、接触产品的许多部件都要拆卸。应有书面的、内容清晰完整的拆卸指导，最好结合图表和示意图以使操作人员容易理解。 2、预洗及检查 预洗的目的是除去大量的可见的残余产品或原辅料，为此后的清洁创造一个基本一致的起始条件。由于清洁规程需要适用于生产多种产品及浓度规格的通用设备，为简化管理及操作，进行预洗是必要的。它可为按通用清洁规程进行的清洗作业提供一个相对一致的起始点，因而有助于提高随后各步的重要性。 预洗可使用饮用水或经加热过滤的饮用水，使用水管或手持高压喷枪以新鲜的流水冲洗设备以除去残留物。可用目测方法检查是否还有可见的残留物，持续喷淋直至可见残留物消失，以此作为预洗的终点。在规程中对判断预洗终点的

20、标准应简单明确，特别应强调需检查的部位。 3、清洗 此次清洗的目的是用清洁剂以一定的程序（如固定的方法、清洗时间等）除去设备上看不到的残留物。这种一致性是进行验证的基础。 在预洗后，此步即对设备或部件进行实际的清洗。如果清洁程序中要使用专用的清洁剂，应在此步使用。为减少偏差的发生、获得稳定的结果，必须明确规定清洁剂的名称、规格和使用的浓度，以及配制该清洁溶液的方法。应明确清洁剂的组成，以便验证时检查是否有残留的清洁剂。还要规定温度控制的范围、测量及控制温度的方法。因为清洗本身是溶剂对残留物的溶解过程，而溶解往往随温度的升高而加快，因此温度是这一过程的重要参数。为提高清洗效率，可采用多步清洗的方

21、式。在这种情况下两步清洗之间可加人淋洗操作。配制清洁溶液的水可根据需要采用饮用水或纯化水。 4、淋洗 淋洗的目的是以固定的方法和固定的淋洗时间，用水来淋洗设备表面，以除去设备上看不到的清洁剂。 清洗步骤虽然溶解了大部分残留物，但设备上残留的清洗液中仍会有残留物和清洁剂。淋洗时用水对其进行充分的淋洗使残留物的浓度降至预定限度以下，以不造成新的潜在的污染。为提高淋洗效率，宜采用多次淋洗的方法。此阶段的用水，应为纯化水或注射用水，淋洗最初阶段可用饮用水。若由微机按预定程序自动执行淋洗程序，其结果就比较安全可靠；应尽量避免人工对不同水质的切换。 由于淋洗的目的是除去已溶解的低浓度的残留物，并使残留在设

22、备上的水具有尽可能高的质量（最小的可溶性固体、最低的微生物污染水平），因此淋洗水的压力、流速、淋洗持续时间及水温等因素都是重要操作参数。 5、干燥 根据需要决定是否进行干燥。除去设备表面的残留水分可防止微生物生长，由于水膜有可能掩盖残留物，一定程度上有碍检查，因此对于需暴露保存的设备应进行干燥。但对于经过验证的清洁程序，若设备淋洗后要进行灭菌处理或采用高温的无菌的注射用水淋洗后并保持密闭的设备，则不一定进行干燥处理。 6、检查 经过验证的清洁程序应保证清洁后的设备不残留可见的残余物。但是也可能有异常情况，因此，目检应在规程中保留，若能及时发现应采取补救措施。 7、贮存规定已清洁设备和部件的贮存

23、条件和最长贮存时间，以防止再次污染。 8、装配应规定将被拆卸部件重新装配的各步操作，附以图表和示意图以利于操作者理解。此外，要注意装配期l司避免污染设备和部件。 四、清洁剂的选择 清洁剂应能有效溶解残留物，不腐蚀设备，且本身易被清除。随着环境保护标准的提高，还应要求清洁剂对环境尽量无害或可被无害化处理。清洁剂的选择原则如下： （1）根据上述标准，对于水溶性残留物，水是首选的清洁剂。 （2）不宜提倡采用一般家用清洁剂，因其成分复杂、生产过程中对微生物污染不加控制、质量波动较大且供应厂商不公布详细组成。使用这类清洁剂后，还会带来另一个问题，即如何证明清洁剂的残留达到了标准？（3）应尽量选择组成简单

24、、成分确切的清洁剂；尽量选择容易清洗的清洁剂。 （4）根据残留物和设备的性质，制药企业还可自行配制成分确切的清洁剂，如一定浓度的酸、碱溶液等。（5）企业应有足够灵敏的方法检测清洁剂的残留情况，并有能力回收或对废液进行无害化处理。第三节评价与验证清洁程序的几个问题 评价验证程序的目标应是这个活动的第一步。制药企业依照清洁程序进行抽样和检验，同时还应评价设备清洁步骤的效果。例如，一台设备或系统，清洁到什么程度才是洁净的？是否需要手工擦洗？比起单纯用溶剂清洗，手工擦洗能达到什么效果？手工清洁程序在批次之间，在各种产品之间有多大区别？因为需要确定程序的整体效果，这些问题的答案对于调查和评价清洁程序来讲

25、十分重要，同时也可以确认哪些步骤可以被更有效的措施所代替。 评价与验证清洁程序的过程中，有几个关键的技术问题需要弄清楚。因为这些问题都必须在验证方案中表现出来，也是验证方案中需要研究解决的问题。 一、最难清洁的物质 一般药品都由活性成分（原料药）和辅料组成。对于复方制剂，含有多种原料药。制剂完成之后，在设备中所有这些物质都必须清除。在清洁验证中是否要为所有残留物都制定限度标准，并一一检测呢？回答是，这种做法不切实际，并且没有必要。下面从3个方面讨论。 （l）由于相对于辅料而言，活性成分的残留物对下批产品的质量、疗效和安全性有更大的威胁，通常的做法是将残留物中的活性成分确定为最难清洁物质。 （2

26、）如果辅料的溶解度非常小，则应根据具体情况决定是否也应将该辅料列为最难清洁物质考察。 （3）如存在两种以上活性成分时，其中最难溶解的成分即可作为最难清洁物质论处。例如，复方18氨基酸注射液的18种活性成分中，胱氨酸最难溶解，仅微溶于热水，因此可将其作为最难清洁物质。这样一来，清洁验证的效果评价就找到了残留的“参照物”，而用不着为其他易溶解的组分担心。一句话，最难清洁的物质是最难溶解的物质。 二、最难清洁部位和取样点 溶解的化学动力学与流体力学的理论研究，以及药品(GMP验证学的研究。特别是制药企业的验证实践，使制药界对最难清洁部位和取样点有以下几点认识。 （1）凡是死角。清洁剂不易接触的部位，

27、应视为最难清洁部位。例如，带密封圈的管道连接处。 （2）压力、流速迅速变化的部位，也是最难清洁部位。例如，有歧管或岔管处、管径由小变大处。 （3）容易吸附残留物的部位，也是最难清洁部位。例如，内表面不光滑处。显然，取样点应包括各类最难清洁部位。 三、确空残留量限度 如何确定残留量限度是个相当复杂的问题，但却是验证方案必须解决的问题。 美国FDA精洁程序验证检查指献第五部分“确定限度”中指出：“FDA不打算为清洁验证设立一个通用方法或限度标准。那是不切实际的，因为原料和制剂生产企业使用的设备和生产的产品千差万别，确立残留物限度不仅必须对所有有关物质有足够的了解，而且所定的限度必须是现实的、能达到

28、和可被验证的。”也就是说，鉴于生产设备和产品性质的多样性，由药品监督管理部门设立统一的限度标准和检验方法是不现实的。企业应当根据其生产设备和产品的实际情况，制定科学合理的、能实现的且能通过适当的方法检验的限度标准。作为标准，一般需具备几个基本条件，一是它的安全性。二是现实性，三是可验证性。目前国际上尚没有适用于任何产品及工艺的统一标准，然而从上述三项原则出发 ，在实践中已形成了一定的共识。FDA在上述说法之后紧接着说：“为了制定合理的制度，确定分析方法的灵敏度很重要。在文献记载中或专题报告中，工业代表们提出了某些限度，包括分析检测浓度如 10PPm；生物活性浓度如正常治疗剂量的 11000；有

29、机微粒浓度如没有可见残留无。”下面对这些点进行讨论。 1、残留物浓度限度10PPm 残留物浓度限度为 10ppm，也即为 l100 000，10mJkg，是客观上分析方法能达到的能力，从控制微生物污染及热源污染的角度上看，也比较安全，也是国际企业界普遍接受的限度标准，在实际清洁中可以达到。其要求是规定由上一批产品残留在设备中的物质全部溶解到下一批产品中所致的浓度不得高于10ndkg。对液体制剂而言，也就是进入下批各瓶产品的残留物浓度。一般地，除非是高活性、高敏感性的药品，该限度的安全性是足够的。企业可进一步将其简化成：最终淋洗水样品中的有关物质的浓度限度为10mg/kg验证时一般采用收集清洁程

30、序最后一步淋洗结束时的水样，或淋洗完成后在设备中加入一定量的水（小于最小生产批次量），使其在系统内循环后取样，测定相关物质的浓度。实验室通常配备的仪器如高效液相色谱仪（HPLC）、紫外一可见分光光度计、薄层色谱仪等的灵敏度一般都能达到 10mgkg以上，因此该限度标准不难被检验。 从残留物浓度限度可以推导出设备内表面的单位面积残留物限度（表面残留物限度），这是假设残留物均匀分布在设备内表面上的。在实际生产中，残留物并不是均匀分布的，也可能存在某些特殊表面，例如灌封头，残留物溶解后并不均匀分散到整个批中，而是全部进入1瓶或少数瓶中。在这种情况下，上述限度就不适用了，必须为这些特殊部制定特殊的限度

31、。制定特殊表面限度的依据，就是以最低日治疗剂量（MTDD)为基础的生物学活性的限度。 2、生物学活性限度最低日治疗剂量（MTDD）的l1000 依据药物的生物学活性数据最低日治疗剂量确定残留物限度是制药企业普遍采用的方法。一般取最低日治疗剂量的11000为残留物限度。可以认为即使存在很大的个体差异，这个残留量也不会使人体产生药理反应。因此高活性、敏感性的药物宜使用本法确定残留物限度。最低日治疗剂量数据来自大量临床与动物试验的统计资料，显然是制药企业应当掌握的。 3、肉眼观察限度：不得有可见的残留物有文献称若设备内表面抛光良好，残留物与设备表面有较大反差，目检能发现低至1g/cm2的残留物。虽然

32、这是非常经验化的数据，与个人的视力、照明、设备的尺寸形状和观察的角度等许多因素有关，不可能作为定量、半定量的依据，也无法验证，但目检方法最简单，并且能直观、定性地评估清洁的程度，有助于发现已验证的清洁程序在执行过程中发生的偏差，对于日常监控是有价值的。因此，清洁规程中都要求在清洁完成或某些步骤完成后，检查不得有可见的残留物。 4、特殊情况下限度的制定 上述各种限度制定方法的注意力都集中在产品中的活性成分或最难清洁的物质上。其共同的特点是都要求其残留量低于规定的限度，而对活性成分的化学稳定性未加考虑。从微观上看，清洁后的残留物在设备表面形成一层薄膜，因此有非常大的比表面积而清洗过程中及清洗结束后

33、，残留物充分暴露在水分、氧气和通常较高的温度下（如需离温清洗和灭菌），因此不难设想如果活性成分的化学性质不很稳定，或者在清洁和随后的贮存条件下不稳定，生成了其他物质，就可能使为检测微量活性物质而建立的检验方法无法真实地反映实际的情况。因为验证的目的是证实有关物质被“清洗掉”，而不是通过化学反应使目标物转变为其他物质而“消失了”。另一方面，有些药物的活性成分经转化后成为药品中的杂质，如该杂质对人体有更大的毒性，则需限制其在成品中的含量。这种情况下，制定残留物的限度必须考虑这类杂质对下批产品带来的不利影响。例如阿司匹林片，其活性成分乙酷水杨酸很容易水解为游离水杨酸。中国药典规定水杨酸相对于乙酰水杨

34、酸的含量应低于0.3通过有关数据（如乙酰水杨酸最低 H治疗剂量为 900ms）及公式计算，并假设所有残留下的乙酰水杨酸全部水解为游离水杨酸，则允许由上批产品残留的乙酸水杨酸总量为 10000g,乙酰水杨酸的表面残留限度为 0.2g/cm2.该限度大大低于根据MTDD计算得到的限度。因此，如果制定限度标准仅以MTDD为依据，就会在实际生产中遇到很大的质量风险。这就需要全面综合地考虑有关因素，客观实际地来制定限度标准。 四、微主物舍置限度 微生物含量限度的制定应满足生产和质量控制的要求。欧盟、美国等国家GMP一般明确要求控制生产各步的微生物污染水平，尤其对无菌制剂，产品最终灭菌或除菌过滤前的微生物

35、污染水平必须严格控制。如果设备清洁后立即投入下批生产，则设备中的微生物、染水平必须足够低，以免产品配制完成后微生物项目超标。微生物的特点是在一定环境条件下会迅速繁殖，数量急剧增加。而阻空气中存在的微生物能通过各种途径污染已清洁的设备。设备清洗存放的时间越长，被微生物污染的机率越大。因此，企业应综合考虑其生产实际情况和需求，自行制定微生物污染水平应控制的限度，以及清洗后到下次生产的最长贮存期限。 第四节取样与分析方法 美同 FDA清洁程序验证检查指南第四部分“清洁验证的评价”中对“取样”与“分析方法”进行阐述。指南对两种可行的取样方法进行了评价：“最好的方法是在设备表面直接取样；另一种方法则使用

36、冲洗液。” 一、最终淋洗水取样及分析方法 1、最终淋洗水取样的优缺点 最终淋洗水取样为大面积取样方法、其优点有二：一是取样面积较大；二是对不便拆卸或不易经常拆卸的设备也能取样。因此，其适用擦拭取样不宜接触到的表面，尤其适用于设备表面平坦、管道多且液体制剂的生产设备。淋洗水取样的缺点是残留物或污染物也许不能溶解，或者本身被阻塞在设备中，淋洗水就难以反映真是的情况。对这种设备可以比拟叫做“脏罐子”。在评价一个脏罐子的水是否干净，而要看罐子本身是否干净。当用淋洗过设备的水的检验结果验证清洁程序时，应查看对淋洗所做残留物和污染物的直接测试结果。如果简单的检测淋洗水的水质，看其是否符合法定的检验标准而不

37、检查潜在的污染物，这时不能接受的。 2、取样方法 根据淋洗水流经设备的线路，选怦淋洗路线相对最下游的一个或几个排水口为取样口。分别按照化学检验样品和微生物检验样品的取样规程收集清洁程序最后一步淋洗水即将结束时的水样；也可淋洗完成后在设备中加入一定量的工艺用水，用量必须小于最小生产批量，使其在系统内循环后在相应位置取样。如在验证试验中采用后一方法，其结果的可靠性要好一些，这是可以预见的。 3、分析项目及方法 对淋洗水样一般检查残留物浓度和微生物污染水平如生产有澄明度与不溶性微粒要求的制剂，通常要求淋洗水符合相关剂型不溶性微粒和澄明度的标准。 分析方法应采用药典方法，或经验证的分析方法确定用来测定

38、残留物或污染物的分析方法的专属性和灵魂度，能监测出来自生产和清洁过程的低含量残留物如果污染物或残留物的水平未被完全测定出来，并个意味着清洁后不存在残留污染，而只说叫在样品中的污染物浓度尚达不到分析方法的灵敏度或在监测的限度之外。生产厂家应结合取样方法来评判分析方法，该取样方法常用来表明污染物是否能从设备表面回收以及回收的程度，即问收5、90%等。根据样品结果，才能作出结论。一项检验的阴性结果，可能就缘于不适当的取样技术。 二、擦拭取样及分析市法 1、擦拭取样的优缺点擦拭取样的优点，是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洗部位的残留物水平评价整套生产设备的清洁状况。通过选择适当的擦

39、拭溶剂、擦拭方法，可将清洗过程中未溶解的、己“干结”在设备表面或溶解度很小的物质擦拭下来，能有效地弥补淋洗水取样的缺点。检验的结果能自接已应出各取样点的清洁状况，为优化清洁规程提供依据。 擦拭取样的缺点，是很多情况下须拆卸设备后才能接触到取样部位。 2、擦拭工具和溶剂 进行擦拭取样时应注意擦拭工具和溶剂对检验的干扰。常用的擦拭工具为药签，在一定长度的尼龙或塑料棒的一端缠有不掉纤维的织物，药签应耐一般有机溶剂的溶解。棉签容易脱落纤维，故在使用前应用取样用溶剂预先清洗，以免纤维遗留在取样表面。溶剂用于擦拭时溶解残留物并将吸附在擦拭工具上的残留物萃取出来以便检测。用于擦拭和萃取的溶剂可以相同也可不同

40、。一般为水。有机溶剂或两首的混合物，也可含有表面活性剂等以帮助残留物质溶解。 选择溶剂的原则： （l）溶剂不得在设备上遗留有毒物质。 （2）应使擦拭取样有较高的回收率。 （3）不得对随后的检测产生干扰。 药签的选择原则： （1）能被擦拭溶剂良好地润湿。 （2）有一定的机械强度和韧性，足以对设备表面施加一定的压力和摩擦力，并不易脱、落纤维。 （3）能同擦拭和萃取溶剂相兼容，不对检测产生干扰。 3、擦拭取样操作规程 （l）计算所要擦拭表面的面积。每个擦拭部位擦拭的面积应以获取的残留物的量检测方法的线性范围内为原则。通常可取25cm2或100cm2。 （2）用适宜的溶剂润湿药签，并将其靠在溶剂瓶卜挤

41、压以除去多余的溶剂。 （3）将药签头接在取样表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面。在向前移动的同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整个表面。翻转药签，让药签的另一面也进行擦拭。但与前次移动方向垂直，见图12l。 （4）擦拭完成后，将药签放人试管，并用螺旋盖旋紧密封。 （5）按照下述方法制备对照样品：按步骤（2）湿润药签，将药签直接放入试管并旋紧密封。将该样品与其他样品一起送至实验室。 （6）取样完成后应在试管上注明有关取样信息。擦拭取样也用于微生物取样。应使用无菌的擦拭棒，按取表面微生物样的要求取样。 4、检验方法 检验方法应经过验证。检验方法对待检测物质应有足够的专属性和灵敏

42、度。方法验证还包括精密度，线性范围，回收率试验。对用于清洁验证的检验万法是定量要求不必像成品质量检验那样严格。一般要求线性范围应达到残留物限度的50至150。代表精密度的RSD（相对标准偏差）小于10即可。方法的回收率可与取样的回收率结合进行。 5、取样验证 取样过程需经过验证。通过回收率试验验证取样过程的回收率和重现性。要求包括取样回收率和检验方法回收率在内的综合回收率不低于50，体现重现性的多次取样回收率的 RSD不大于 20。 取样过程的验证实际上是对药签、溶剂的选择、取样人员操作、残留物转移到药签、样品溶出（萃取）过程的全面考察。 验证方法： （1）准备一块 500mm *500mm的

43、平整光洁的不锈钢板。（2）在钢板上用钢锥划出 400mm * 400mm的区域，每隔100mm划线，形成16块100mm *100rum的方块。（3）配制含待检测物浓度为0.016的溶液，定量装人喷雾器。 （4）将纳10nil溶液尽量均匀地喷在400mm*400mm的区域队 （5）根据实际喷出的溶液体积计算单位面积的物质质量（约1g/cm2) （6）自然干燥或用电吹风温和地吹于不锈钢板。 （7）用选定的擦拭溶剂润湿擦拭工具，按前述擦拭取样操作规程擦拭钢板，每擦一个方块（100cm2）换一根擦拭棒，共擦610个方块。 （8）将擦拭棒分别放入试管中，盖上试管盖，加人预定溶剂10ml，加塞，轻摇试管

44、。并放置10min，使物质溶出。 （9）用预定的检验方法检验，计算回收率和回收率的RSD。取样员的取样方式是产生较大相对标准偏差（RSD）的主要原因。应尽可能采用固定的力度、擦拭速度和线路。取样员司根据擦拭棒弯曲的程度估算加在擦拭表面的压力。 第五节清洁方法的优化与参照产品的选择 一、清洁方法的优化 制药企业的生产实践中，一台（组）设备通常用于多种产品的生产，而多种产品及其生产的原辅料在理化性质L又有很大的差异。不同产品的生产工艺规程是不同的（尽管同一剂型的不同产品可以制定通则），那么是否为每个产品分别制定清洁规程呢？回答是，为一台（组）设备制定多个不同产品的清洁规程并不可取，这是因为对每个清

45、洁规程进行验证的工作量过于庞大，更主要的是对操作者来说要在多个规程中选择适当的清洁方法很容易造成差错。那么，更好的可行的办法是什么呢？ 比较可行的方法是： （l）在所有涉及的产品中，选择最难清洁的产品为参照产品，以所有产品（原料）允许残留量最低的限度为标准（最差条件），优化设计足以清除该产品（原料）以达到残留量限度的清洁程序。验证就以该程序为对象，只要证明其能达到预定的要求，则该程序能适用于所有产品的清洁。 （2）从环保和节约费用的角度考虑，如果实践证明上述清洁程序对大多数产品而言过于浪费，也可再选择一个典型的产品进行清洁规程的制定及验正工作。同时在规程中必须非常明确地规定该方法适用于哪些产品

46、，还必须明确为防止选择时发生错误需要采取的必要措施。 二、参照产品的选择原则 （1）将所有产品列表（表121） （2）确定产品的若干物理、化学性质为评价项目：如主要活性成分的溶解度、粘度、吸附性等，其中最主要的性质为溶解度。（3）对每个产品的评价项目打分。例如，将溶解度分为1、2、3、4级，依次表示难溶、微溶、可溶、易溶。（4）根据产品性质和经验，拟定适当的清洁剂种类。（5）计算各产品的最大允许残留限度计算方法可参考有关资料，如根据MTDD的1/1000确定各产品的生物活性限度）。（6）将表格按照溶解度由小到大排列，选择溶解度最小的产品作为参照产品。（7）如果表格中使用的清洁剂可分为以水或水溶

47、性清洁剂（包括酸、碱溶液）和有机溶剂的两类，应分别选择一种参照产品。（8）将表中允许残留限度最小的数值确定为验证方案的允许残留物限度标准。（9）将与参照产品对应的清洁剂确定为清洁方法使用的清洁剂。 从表121中可见，产品丙、丁、乙、戊，可用水溶性清洁剂清洁，应选最难溶的产品丙为参照产品，清洁剂为 1 NaOH热水溶液，但允许残留限度定为 lg/cm2；而产品甲、己用乙醇为清洁剂，可另算一类，应选择产品甲为代表产品，清洁剂为95乙醇，允许残留限度定为2.5g/cm2 三、清洗方法设计及验证根据设备的情况、已确定的清洁剂和残留限度，设计清洗方法。在生产后依法清洗并验证。清洁验证试验至少进行3次。每

48、批生产后按清洁规程清洁，按验证方案检查清洁效果、取样并化验。重复上述过程3次。3次试验的结果均应符合预定标准。如果出现个别化验结果超标的情况，必须详细调查原因。如果有证据表明结果超标是因为取样、化验失误等原因造成，可将此数据从统计中删除。否则应判验证失败。不得采用重新取样再化验直至合格的做法。验证失败意味着清洁规程存在缺陷，应当根据化验结果提供的线索修改清洁规程，随后开展新一轮的验证试验。 四、清洁规程的再验证 在发生下列情况之一时，须进行清洁规程的再验证：（l）清洁剂改变或清洁程序作重要修改；（2）增加生产相对更难清洁的产品；（3）设备有重大变更；（4）清洁规程有定期再验证的要求。 第三节灭

49、菌方法验证的有关参数 中国药典（2000年版）在通则附录XVII中收载了灭菌法。所有的灭菌方法（主要有湿热法、干热法、过滤法、辐射法、环氧乙烷法）都是通过一个共同的手段来进行常规验证。首先是选择具有能抵抗灭菌工艺的生物指示剂。其次要考虑各种变量对灭菌生物指示剂的耐受力的影响。例如，生物指示剂的繁殖，指示剂与被灭菌产品间的相互影响。第三，要建立指示剂在灭菌过程中被破坏的定量性质。最后，对一特定工艺，要测定所需灭菌物质实现无菌的可能性。更简明地说，灭菌方法的验证是包括对证明该方法的可靠性和可预见性的一系列研究。本节重点讨论生物指示剂与指示剂去除的定量测定。一、生物指示剂生物指示剂（biologic

50、al indicators）定义为：一种直接由被灭菌或适宜载体携带的菌芽炮制剂，用其破坏来证明曾给被火苗物施加过规定的化学和物理条件。对于不同的灭菌方法的验证，要选用不同的生物指示剂，也就是说，选用一种特定的微生物菌株，用来测试灭菌工艺的有效性，常根据对具体的灭菌方法的耐受性而选择。 生物指示剂用于监测灭菌效果，应是一个标准的对灭菌条件稳定的微生物。选择生物指示剂有如下的要求：（l）实验用菌种要稳定。 （2）热耐受性强，即：实验用菌种的耐受性应大于产品可能被污染的微生物的耐受性。（3）实验用菌种应无致病性。（4）实验用菌种在现定条件下保存，菌种不得变异，重现性好。 各灭菌方法验证用生物指示剂，

51、可以用任何方式放置于指定的位置。但应避免接触到破灭菌的物质。中国药典（2000年版）现定各灭菌方法验证用生物指示剂一般有下列各种：（1）用于湿热灭菌法的生物指示剂 嗜热脂肪芽孢杆菌（B.stearthermoplilus）孢子如 NCTC 10007、NCIMB8157、 ATCC 7953。 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）孢于如 NCTC 8594。NCIMB 8053、ATCC7955。（2）用于干热灭菌法的生物指示利枯草芽孢杆菌孢子（spore of Bacillus）如 NCIMB 8058。ATCC9372本方法 D的定义与湿热灭菌类似，但Z20，如应用于去

52、热原计算时，则Z取54 。（3）用于滤过人的法的生物指示： 黏质沙雷菌（ Serralin marcescens)如ATCC 14756 缺陷假单孢菌（P.diminuta）（4）用于辐射灭菌法的生物指示剂短小芽孢杆菌孢子（Spores of Bacillus pumilus如NCTC 1O327、NCIMB 1O692 ATCC 27142。活孢子数在1O7108的生物指示剂，置于放射剂量25kGv（千戈瑞）条件下，D值约3kGy。本方法的D值表示在计算系统（lg system）下的吸收剂量。（5）用于环氧乙烷灭菌法的生物指示剂枯草芽孢杆菌孢子（Spores of Bacillus subt

53、ilis）如NCTC10073,ATCC 9372。本方法D值表示在特定杀菌条件下的时间（min）。上述生物指示剂的菌种己规定为来自中国医学菌种保藏中心（CMCC）、美同菌种保藏中心（ATCC）等菌种保藏机构。 任何灭菌方法的主要功能是杀灭或除去微生物。当然，这个主要功能是利用一种作为生物指示剂的特殊微生物的行为的研究来验证的。中国药典（2OOO年版）规定了每一种灭菌方法使用的特定的细菌芽抱，但所有的指示剂都具有如下的一些特征（包含了上述对生物指示剂的要求）：（1）对灭菌方法固有的耐受性对灭菌方法固有的耐受性是生物指示剂的一个重要特征。与其他细菌相比较，若该生物指示剂很容易被所采用的灭菌方法所

54、破坏或除去，那么用它来鉴定灭菌方法，就意义不（2）对设定条件下的灭菌方法具有稳定的和重复的耐受性灭菌方法的有效性是用它能除去指示剂微生物的能力来表示的。若指示剂耐受性的可变化很大，那么它无论在鉴定新的灭菌方法或是监控现有的灭菌方法上的用途就很有限了。所以，生物指示剂必须有一致的耐受性。由此验证得到的结果才可以精确地预测常规操作中灭菌方法的有效性。（3）灭菌方法处理后的有效回收率从典型的角度看，灭菌研究是将一种指示剂暴露在多种灭菌条件下，这些条件的有效性是用指示剂的存活率来表示的。若一种试验菌因为某些原因，但不是受灭菌条件的影响而变得不能繁殖，那么这些条件的效率就估计过高了。换句话说，任何指示剂

55、暴露在灭菌条件后，它的存活部分必须经过培养来检验。（4）非致病性不仅是生物指示剂的基本要求，也是生物指示剂的基本特征 所使用的生物指示剂应该对接触它的操作人员不存在感染的危险，并且操作人员要受过微生物学特别的培训。非致病性是生物指示剂的必要条件，也是最基本的特征。（5）用于灭菌验证的生物指示剂种类所具有的耐受性，应该比实际灭菌工艺中必须除去微生物的耐受性更高。虽然待灭菌产品中微生物负荷变化很大，但总还是存在一些需要除去的常见微生物种类。“微生物负荷”这一术语用于描述物料中微生物的量，包括存在的微生物的种类和数量用于灭菌验证的生物指示剂种类应该具有比实际灭菌工艺中必须除去的微生物更高的耐受性。美国药典XX版就指出：“为了监控灭菌工艺过程而有效使用生物指示剂，必须在灭菌前对破灭菌产品及其组成部件（材料和包装）以及产品中构成微生物负荷的微生物种类和数量有充分的了解。”例如，用于生产制造中的原材料存在固有的微生物菌群；生产设施中的空气和生产中的操作人员也有独特的微生物菌群。当然，这些构成微生物负荷的微生物种类的数量，不能高于生物指示剂的数量，更主要地是由这些数量的微生物所表现出的耐受性。（6）常规使用的