黄芪多糖、当归多糖对鸡新城疫弱毒苗免疫增强作用

1、黄芪多糖、当归多糖对鸡新城疫弱毒苗免疫增强作用畜牧兽医杂志第30卷第4期2011年黄芪多糖,当归多糖对鸡新城疫弱毒苗免疫增强作用王福厚,张进隆,刘根新(甘肃畜牧工程职业技术学院甘肃武威733006)摘要:研究黄芪多糖,当归多糖对鸡新城疫疫苗的免疫促进作用,选择90只20日龄海兰鸡随机分成三组,每组3O羽,每只鸡注射ND-Lasota弱毒冻干苗0.5mL,试验组I,分别注射黄芪多糖,当归多糖,复合多糖(0.5mL/羽),在免疫后第10d,20d,30d,40d采血测定ND血凝抑制(HI)抗体.结果表明,黄芪多糖,复合多糖对NDHI抗体有明显的促进作用,与对照组差异极显着(P<0.0

2、1).结论:黄芪多糖,复合多糖可以明显提高鸡新城疫抗体水平.关键词:黄芪多糖;当归多糖;鸡新城疫中图分类号$852.52文献标识码A文章编号1004-6704(2011)04-0001-02ImmuneEnhancementofAstragalusandAngelicaPolysaccharideonNDVaccineImmunityWANGFuhou,ZHANGJinlong,LIUGenxin(GausuPolytechnicCollegeofAnimalHusbandry&Engineering,WuweiGansu733006,China)Abstract:Thisst

3、udyaimedtodeterminetheimmuneenhancementofastragaluspolysaccharideandangelicapolysaccharideonNDimmunity.Ninty20一doldHylandlayersweredividedintothreegroupswith30birdsineachgroup,0.5mLNDLasotaattenuatedvaccinewasinjectedtoeachbird.Astragaluspolysaccharide(APS),Angelicapolysaccharide,twopolysaecharidemi

4、xture(1:1)wereinjectedtogroupI,groupIIandgroupIII,respectively.Bloodsampleswerecollectedin10一d,20一d,30一dand40一d,re-spectivelytotestNDHIantibody.TheresultsshowedthatthereweresignificantimprovementofAPSandcompoundpolysaccharideonNDHIantibodycomparedtocontrolgroup(P<0.01).Therefore,APSandcompoun

5、dpolysaceharidecanimprovelayersNDHIantibodylevelremarkably.Keywords:astragaluspolysaccharide;angelicapolysaceharide;ND鸡群接种NIY疫苗后,如果疫苗保护率低,以及受到其它因素的影响,不能产生足够的免疫应答,同样会引起新城疫的发生.黄芪多糖(astragaluspoly.saccharide,APS)是中草药黄芪中最重要的天然有效活性成分,具有促进机体免疫功能,增加白细胞和淋巴细胞数,提高淋巴细胞转化率和巨噬细胞活性,诱生干扰素等作用.当归多糖(Angelicapolysacch

6、a.ride,APS)不仅能激活T,B淋巴细胞,巨噬细胞(M),自然杀伤细胞(NK),细胞毒细胞(CTL),淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK),树突状细胞(DC)等免疫细胞,还能促进细胞因子生成,激活补体系统,促进抗体产生,对免疫系统发挥多方面的调节作用.总之,它们都具有促进机体免疫功能,增加白细胞和收稿日期2011_04.28作者简介王福厚(1966一),男,甘肃人,硕士,副教授,主要从事动物传染病教学工作.淋巴细胞数,提高淋巴细胞转化率和巨噬细胞活性,诱生干扰素等作用.本研究利用黄芪多糖,当归多糖的免疫增强作用,与NDLasota疫苗在雏鸡群中同时应用,来探讨黄芪多糖,当归多糖对NDLaso

7、.ta疫苗的免疫增强作用,旨在研制出一种高效低成本的免疫增强剂,以提高鸡对ND的免疫力,同时也为今后高效复合免疫增强剂的研究提供依据.1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物7日龄健康海兰褐雏鸡,由甘肃畜牧工程职业技术学院种鸡场提供.1.1.2药品黄芪多糖注射液(0.1g/mL)(山西省芮城科龙兽药有限公司,批号:20070305),当归多糖(O.1g/mL)(山西省芮城科龙兽药有限公司,批号:2JournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicineVo1.30No.4201120070406),疫苗:NDLasota弱毒疫苗(黑龙江生物制品一厂,批号20070

8、301),5%柠檬酸钠,0.9%的无菌生理盐水,鸡新城疫标准阳性血清,阴性血清及标准抗原:哈尔滨兽医研究所.0.5%的鸡红细胞悬液自制(用注射器吸取5%柠檬酸钠适量,对SPF鸡心脏采血,与5%柠檬酸钠(9-1)混合,反复离心并弃去上清液.根据红细胞体积加入生理盐水稀释至0.5%的浓度,并用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀).1.1.3仪器96孔U型微量反应板,MM一1型微量振荡器(江苏省泰县医疗器械厂),微量稀释棒,一次性灭菌注射器(1mL,5mL),灭菌过的清洁小玻璃瓶,微量移液枪,TGL一16B离心机(上海市机械研究所).1.2分组设计及试验方法1.2.1分组设计将试验用海兰褐7日龄

9、的雏鸡100羽随机分成五组,每组20羽.对照组和试验各组的鸡均胸部皮下注射NDLasota弱毒疫苗(0.5的鸡除胸部皮下注射NDLasota弱毒疫苗(0.5mlM羽)外,同时分别对试验组I用黄芪多糖注射液,对试验组用当归多糖注射液,对试验组用黄芪多糖,当归多糖混合液(按1:1混合)进行胸部肌肉注射(0.5mL/羽).1.2.2饲养管理平面饲养,试验组和对照组条件相同,每日定时饲喂干粉料4次,自由饮水,及时清理粪便,清洗饮水器,定期消毒,保持鸡舍环境卫生,光照时间根据雏鸡饲养标准执行.1.2.3抗体测定微量法HA/HI试验.1.2.4试验数据的处理所有试验数据采用SPSS软件进行分析.2试验结果

10、2.1试验前(7日龄)各组鸡NDHI抗体效价平均值:对照组3.32,试验组I3.41,试验组3.35,试验组3.42,试验组3.37,经t检验差异不显着(P>O.05),而免疫后第10d,20d,3Od,40d测定各mlM羽);试验组I,试验组,试验组和试验组组鸡NDHI抗体平均效价变化情况见表1.表1免疫后各组鸡NDHI抗体效价(1og2)注:表示差异不显着,表示差异显着,表示差异极显着3.17日龄采血检测NDHI抗体效价的结果显示,免疫前各组别间的差异不显着(P>0.05),对照组在免疫后第10d抽样检测NDHI抗体水平,明显地高于免疫前,差异极显着(P&

11、;lt;0.01).表明免疫前各组别间的试验基础是相同的,且免疫是有效的.3.2试验结果表明,对照组和试验组在免疫后第10d测定NDHI抗体效价,各组间的抗体水平都较高,试验组I和试验组与对照组差异极显着(P<0.01),;而试验组和试验组与对照组差异不显着(p>0.05).在免疫后第20d测定NDHI抗体效价,试验组I和试验组与对照组差异极显着(P<0.01);试验组与对照组差异不显着(P>0.05);试验组与对照组差异显着(0.01<P<0.05).第30d,40d测定NDHI效价,试验组与对照组相比,差异

12、极显着(P<0.01).免疫后第40d测定结果还显示,对照组的NDHI抗体效价降低程度明显高于试验组.从而说明了黄芪多糖,当归多糖不但对鸡新城疫疫苗诱导的体液免疫有显着的增强作用,还可使血清特异性抗体效价明显增高,且维持时间延长,这与张述斌等加人黄芪多糖,淫羊藿多糖能使鸡血清中HI抗体效价比对照鸡明显提高,而且维持时间延长的结果基本一致.因而对提高疫苗效价并延长免疫期具有实践意义.尤其在肉鸡生产上,肉鸡生长快,周期短,使用此免疫增强剂,可以减少鸡新城疫的免疫次数,还可以减免因注射疫苗引起的鸡的应激反应,更有利于鸡的生长.3.3从表1可以看到,抗体效价的峰值,试验组高于对照组;免疫

13、有效期,试验组长于对照组,这个结果与胡庭俊等加入黄芪多糖可显着升高鸡新城疫疫苗免疫后血清特异性抗体水平的结果一致.3.4以上试验结果说明用黄芪多糖或用黄芪多糖,当归多糖的混合液作为免疫增强剂与鸡新城疫IJasota弱毒冻干疫苗合用,都可以达到较好的免疫增(下转第6页)6JournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicineVo1.30No.42011命中止后很容易通过脱氨基作用产生NH,因此,疲劳肌肉组织中的氨含量将比正常肌肉组织中的NH含量增大,而干扰由微生物分解蛋白质所产生的NH指标的测定.鉴于以上原因,认为尽管NH含量的测定指标已被广泛应用,但不能作为判断

14、肉类新鲜度的绝对指标,只能作为综合性判别的参考指标.3.3pH指标测定动物生前肌肉的pH为7.17.2,宰后24h肌肉中的pH可下降到5.66.2.腐败时肌肉中的pH又逐渐升高.因此,pH检验的判定标准为:新鲜肉:pH5.86.2;次新鲜肉:pH6.36.6;变质肉:pH6.7以上.在被测的20个样品中,新鲜肉为10份;次鲜肉为7份;变质肉为3份,与国际TBVN比较,新鲜肉检出率下降,次鲜肉检出率上升,另外在变质肉的检出率中也有较大误差.虽然pH指标的测定在市场检验中简单,易行,快速,作为大体良质肉与变质肉的判定是可行的,但作为新鲜度检验的可靠判定标准尚缺乏准确性,在实际检验中往往与肉的新鲜度

15、不呈对应的关系,故pH测定指标仅可作为参考指标.3.4其他项目的检验球蛋白沉淀试验,硫化氢检验和过氧化物酶反应均为定性试验,虽不能定量,但其结果与挥发性盐基氮测定的结果基本一致,故这几项的测定指标也可作为参考指标.3.5菌落总数指标的测定根据菌落总数测定指标的分析,新鲜肉与次鲜肉之间,次鲜肉与变质肉之间,差异均极显着.故认为用菌落总数测定肉品的卫生质量对于评价肉品的新鲜度起着较可靠的差别作用.我国现行的食品卫生标准中尚未制定鲜羊肉的细菌学指标,据报道,鲜猪肉的菌落总数指标范围为:新鲜肉1万个/g以下;次鲜肉1100万个/g;变质肉100万个/g以上.而本次测试结果与TVBN相对照,在被测的20

16、份样品中,新鲜肉细菌总数范围为0.793.9万个/g,次鲜肉为6.427.8万个/g,变质肉为40.257.3万-'-/g,与原报道差异较大,菌落总数的测定具有一定的准确性和可行性,但其操作过程繁琐,且需要培养24h以上.随着气候的变化,菌落总数的测定指标也将有较大的变动范围,故国际中尚未确定鲜肉的细菌学指标的测定指数,菌落总数指标的应用仍在试验探讨之中.3.6大肠菌群数测定大肠菌群数的测定指标主要是了解肉品的污染程度.根据测定结果,新鲜肉与次鲜肉,次鲜肉与变质肉之间的差异非常显着,故作为新鲜度指标检验可靠性较强,本次测试中,大肠菌群数的范围为:新鲜肉450个/100g以下;次鲜肉65

17、0个/100g以下;变质肉950个/100g以上.有关资料曾报道过鲜猪肉大肠菌群数的测定指数(建议参照其测定结果),关于鲜羊肉大肠菌群数的测定指数目前尚未见有关资料报道,根据本次测试结果,建议鲜羊肉大肠菌群MPN数参考数据为:新鲜肉450爪/100g以下;次鲜肉450650个/100g之间;变质肉950个/100g以上.参考文献:1张彦明,佘锐萍.动物性食品卫生学M.北京:中国农业出版社,2002:310-311.2王雪敏.动物性食品卫生检验M.北京:中国农业出版社,2002:211215.3曲祖乙.兽医卫生检验M.北京:中国农业出版社,2006:269275.4刘继荣,王晓兰,孙方中,等.猪肉鲜几项卫生指标的检测J.中国兽医杂志,2004,40(4):44_46.(上接第2页)强效果,从抗体的平均效价来看,后者优于前者.而当归多糖作为鸡新城疫Lasota弱毒冻干疫苗免疫增强剂的性能不稳定.其导致的原因有待进一步探讨研究.3.5根据四个试验组在免疫后30d和40d两次抗体效价与对照组利用t检验比较,发现均表现为差异极显着,说明在使用免疫增强剂之后,具有使鸡新城疫Lasota弱毒冻干疫苗免疫期明显延长.在l0d,20d,30d和40d四次试验中,试验组的抗体效价平均值