中草药复方制剂对肉鸡禽流感免疫影响研究.docx

1、中草药复方制剂对肉鸡禽流感免疫影响研究孙永祥*李惠兰*李凤元*李永洲*于金玲2,李冰2,李铁2,刘刚2,刘孝刚2(1.辽宁省重大动物疫病应急中心，辽宁沈阳110161；2.辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001)中图分类号S816.75文献标识码A文章编号1672-9692(2010)11-0032-05f摘要将210只1日龄的肉仔鸡随机分成7组，每组30只，在H5N1Rc-5亚型和H9N2Re-2j：亚型免疫过程中按每千克体重添加0,2g中草药复方制剂.1、11、川组分别在免疫前5d、3d和|I免疫当天开始连续饲喂3d,IV、V、VI组分别在免疫前5、3d和免疫当天饲喂1d,对照组(V

2、II组)|j不喂药,分别于免疫前1d和免疫后14.21,28和40d翅下静脉采血检测禽流感抗体水平.结果表tI明，免疫后投药组抗体效价均高于对照组，抗体达到峰值时H5N1膈-5亚型和H9N2Re-2亚型分别:高于对照组个滴度和2祯-危个滴度，其中II组和III组与对照组差异显著(P<0.05),其他组I:与对照组差异不显著(P>0.05).t|关键词中草药；免疫;影响；禽流感;抗体；肉鸡I«»«.,.禽流行性感冒(Avianlafluenza,AI)简称为禽流感，是由A型流感病毒引起的烈性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，我国将禽流感

3、列为重大动物疫病和一类传染病川。禽流感发病率高、死亡率高，且无特效药治疗，一旦发病将造成巨大经济损失。目前主要依靠接种疫苗来预防发病，但由于部分疫苗免疫力不强、质量不稳定、免疫保护期短等原因，常常导致免疫失败；同时由于病毒变异等多方面原因导致病毒的毒力逐渐增强，这给防治带来了很大困难乳中草药可调整和提高机体的免疫功能，增强机体的防御机能，提高机体的抗病能力叫本试验研究中草约复方制剂-“热毒效”对肉鸡禽流感免疫效果的影响，为中草药复方制剂在肉鸡重大动物疫病防治工作方面提供可靠的理论依据。1材料与方法1.1试验材料1.1.1中草药复方制剂-“热毒效”购于郑州三叶集团，批准文号：兽药字(2006)1

4、60375144,主要成分：金银花、皂角刺、白芷、天花粉、当归等。主要功能：清热解毒、免疫增强。1.1.2禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗(H5N1Re-收稿II期12010-10-155+H9N2Re-2株)：青岛易邦生物工程有限公司生产，批准文号：兽药生字(2006)150132125号，产生批号：2010010,由辽宁省重大动物疫病应急中心提供。1. 1.3禽流感H5N1Re-5亚型血凝抑制试验抗原：哈尔滨维科生物技术开发公司生产，生产批号：201007c1.1.4禽流感H9N2Re-2亚型血凝抑制试验抗原：哈尔滨维科生物技术开发公司生产，生产批号：200907c1.2试验肉鸡由辽宁医学

5、院种鸡场提供。选用1日龄AA肉仔鸡210只，平均体重50g。按照体重随机分为7组，每组30只。IVI组为用药组，按不同剂量和程序，每千克体重拌料0.2g饲喂；训组为对照组，不喂药。1.3试验方法1.3.1免疫方法按照<2010年辽宁省动物疫病强制免疫实施方案和疫苗说明要求，7日龄用禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗进行首免，2周后二免，首次免疫颈部皮下注射0.15ml/只，第2次免疫肌肉注射0.3ml/只。1.3.2喂药剂量和程序“热毒效”按照说明书要求每千克体重0.2goI组首次免疫前5d开畜牧曾医畜牧曾医始使用中草药，连喂3d；II组首次免疫前3d开始使用中草药，连喂3d；m组首次免疫

6、当天开始使用中草药连喂3d；IV组首次免疫前5d使用中草药1次；V组首次免疫前3d使用中草药1次；VI组首次免疫当天使用中草药1次；对照组不饲喂中草药。试验组和对照组常规饲养管理，统一使用大成饲料公司生产的肉鸡全价饲料。用药情况详见表1。表1中草药复方制剂使用方法n组V组U组对照组(M组)免疫前5d莲限3d切次常蔑免疫前3d连喂3d喂1次别养免疫当天连艰3d知次管建1.4血样采集于免疫前1d和首次免疫后的14、21、28和40d。对试验组和对照组分别翅下静脉采血1ml,每组每次随机抽取采10只，经离心取血清，4T保存，供AI抗体检测使用。1.5禽流感抗体检测用禽流感H5N1Re-5亚型血凝抑制

7、试验抗原和禽流感H9N2Re-2亚型血凝抑制试羚抗原分别检测H5和H9抗体水平,其操作和判定方法按照处010年辽宁省动物疫病强制免疫实施方案进行。1.6数据处理试验数据用SPSS6.0统计学分析软件进行分析处理。2试验结果检测结果详见表2,统计分析结果详见表3,抗体滴度消长曲线祥见图1、图2。表2禽流感抗体个体检测结果组别HI抗体滴度(2')免疫前免疫后14d免疫后21d免疫后28d免疫后40dH5N】H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2I组1091451278342581321267353190504889104380404710810525064

8、81066660704777956706034597898150404687992712038978100802248811II组129062599682270566877733903646967439042569675171324410910627054586447280436111281080503611117111091702586969102612269986ID组】582364863122723257778338163281079428063581046512254499676150235911797250431081091081714410610899080359310791005

9、122101210109N组14704348976206034389023570435887741603431096752613267867608131373687171401978982705348648929034410514100803549898V组1280304825424100603876833905691769449040389635290456856664803038354717140171071080803047456928021499611009041459VI组10100305576624100404755633100624839443101645660353805447

10、6886604066948718156687148270404710659090368847910190311968对照组10504047898231103031073432605041079641613341035552704242787617043478767260404780381713059506928030402571028040410766表3禽流感抗体每组平均检测结果组别H1抗体滴度（儿何平均数,2'）免疫前免疫后14d免疫后21d免疫后28d免疫后40dH5N1H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2H5N1H9N2I组1.407.200.303.702

11、.406.307.568.206.407.80II组1.807.400.203.703.806.007.808.707.107.80皿组1.706.300.703.803.506.407.809.306.807.80IV组1.707.100303.703.205.907.407.205.406.60V组2.208.500.103.801.304.107.566.225.676.00U组1.708.700.204.102.445.117.306.605.206.10对照组1.607.200.203.700.804.007.206.205.205.80图1H5N1Re-5抗体滴度消长曲线2.1从表

12、3可以看出，免疫前H5N1Re-5母源抗体滴度平均为2*8°,然后抗体滴度逐渐下降；免疫后14d时抗体滴度为。2070：免疫后21d抗体滴度明显升高，IVI组抗体滴度比对照组高2皿3.8个滴度；免疫后28d时投药组的抗体滴度高于对照组2如衣个滴度；免疫后40d时投药组的抗体滴度高于对照组2。2心个滴度，其中投药n组和m组抗体滴度优势更明显。2.2从表3可以看出，免疫前H9N2Re-2母源抗体滴度平均为23?随着日龄增加抗体滴度逐渐下降：免疫后14d时抗体滴度平均为2"。；免疫后21d抗体滴度明显升高，IVI组抗体滴度比对照组高2如。/个滴度；免疫后28d时投药组的抗体滴度高

13、于对照组2皿3。个滴度；免疫后40d时投药组的抗体滴度高于对照组2心8)个滴度，其中投药II组和m组抗体滴度优势更明显。2.3按照2010年辽宁省动物疫病强制免疫实施方粉中关于禽流感灭活疫苗免疫效果判定标准，当出抗体效价M2。判定为合格，根据表2数据显示,H5N1Re-5免疫后21d合格率为31.42%(22/70),免疫后28d合格率为88.24%(60/68)；H9N2Re-2免疫后21d合格率为84.06%(58/69),免疫后28d合格率为91.30%(63/69)。2.4从表2和表3中可以看出，投药组I、II、IU、IV、V、VI组H5N1Re-5和H9N2Re-2的抗体滴度在不同时

14、期高于对照组。根据重复测量方差分析结果显示，H5N1Re-5抗体滴度II组和皿组与对照组差异显著(P<0.05),H9N2Re-2抗体滴度fl组和皿组与对照组差异显著(PvO.05),从以上数据可以看出n组和m组免疫效果最好。3讨论3.1关于免疫合格率7日龄首次免疫，免疫21d后H5N1Re-5合格率为31.42%,H9N2Re-2合格率为84.06%,根据<2010年辽宁省动物疫病强制免疫实施方莉的判定标准，H5N1Re-5合格率低于辽宁省标准，主要由母源抗体水平较低所致，因此，临床上应增加H5N1Re-5亚型的免疫密度，以确保雏鸡的保护率。而免疫28d后H5N1Re-5和H9N

15、2Re-2的合格率分别为88.24%和91.30%,免疫合格率均符合辽宁省要求。总体上，该免疫程序比较科学，免疫合格率符合国家标准，也证实国家推荐的免疫程序科学合理，适用于目前我国禽流感的防控工作。3.2关于中草药对含流感免疫效果的影响3.2.1中草药可以提高机体的免疫力、增强疫苗的免疫效果。目前，已发现许多中草药的药效成分，如多糖、皂昔、生物碱、有机酸等具有诱导B淋巴胞分化、促进抗体产生、预防某些病毒感染及抵抗免疫抑制因子等免疫学活性*习。从表2和表3中可以看出，H5N1Re-5免疫后21d,投药组抗体滴度比对照组高2商个滴度，H9N2Re-2免疫后21d,投药组抗体滴度比对照组高2皿24个

16、滴度。说明热毒效中的金银花、皂角刺、白芷、天花粉、当归等成分也具有免疫增强作用，可促使机体迅速产生抗体，关于作用机理有待于进一步研究。3.2.2从表2和表3中可以看出，H5N1Re-5免疫后2id,I、n、ni组抗体水平比对照组高2-3.。个滴度，而免疫后21d,IV、V、VI组抗体水平比对照组仅高2虾24个滴度；H9N2Re-2免疫后21d,I、口、in组抗体水平比对照组高2254个滴度，而免疫后21d,IV、V、VI组抗体水平比对照组仅高2如彩个滴度。这说明禽流感抗体水平与中草药使用剂量有关，在本次试验条件下，增加给药剂量和次数，可以提高抗体水平。3.2.3从图1和图2可以看出，免疫后28

17、d时，禽流感HI抗体滴度达到峰值，然后逐渐下降，其中，u、m组抗体水平均高于对照组，而且下降的速度比对照组缓慢。说明热毒效具有免£1S£1S疫增强作用，同时延缓抗体下降的速度。3.2.4虽然投药组在不同时期抗体水平都比对照组高，但通过重复测量方差分析结果显示，n组和U【组与对照组抗体滴度差异显著(P<0.05)o证明按ii组和m组的喂药程序使用效果最好，不但抗体滴度高，而且产生的也比较快，说明使用“热毒效”3d后，机体处于最佳免疫状态，是免疫的最佳时机。.本试验结果证实，添加中草药复方制剂-“热毒效”对禽流感抗体水平影响显著，可以明显提高抗体滴度，提高机体的特异性免疫

18、能力，说明“热毒效”作为禽流感免疫增强剂是有效的。参考文献1J李倦增.禽流感防制与研究进展J.内蒙古畜牧科学,2001,22(4):15-18.2 陈样，高崔.家禽的免疫抑制与免疫失败J.畜牧兽医杂志，2002,21(2):18-20.3 王自然.中药免疫增强剂在猪瘟疫苗免疫中的免疫调节作用的研究J.中兽医医药杂志,2006,(2):15-17.4 司红彬，刘志昌，陈朝喜，等.免疫增强剂的研究应用(下)J.兽药市场指南,2007,(4):11-12.5 朱志盈，缪德年,姜法铭，等.囊素对猪口蹄疫灭活疫苗的免疫增强作用J.中国兽医科学,2007,37(2):150-154.StudyontheE

19、ffectofChineseHerbComplexonChickenAvianInfluenzaVaccineImmunitySunyongxiang1,LihuilanLifengyuan1,Liyongzhou',YujinIing2,Libing2,Litie2,Liugang2,Liuxiaogang2(1.CenterofEmergencyAnimalPlagueHandlingofLiaoningProvince,LiaoningShenyang110161;2. CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,LiaoningMedicalUniversity,LiaoningJinzhou121001)AbstractAtotalof210oneday-oldbroilerswererandomlydivide