子宫内膜样腺癌中PTEN与CyclinE的表达及相互关系

1、子宫内膜样腺癌中PTEN与CyclinE的表达及相互关系【摘要】 目的 探讨子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN、CyclinE的蛋白表达及其与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化SP法检测正常子宫内膜、内膜增生、内膜不典型性增生和子宫内膜样腺癌组织中PTEN和CyclinE蛋白的表达。结果 PTEN和CyclinE蛋白在内膜不典型性增生组中阳性表达率分别为50.00%、60.00%；在子宫内膜样腺癌组中阳性表达率分别为45.45%和65.50%。两组中PTEN阳性表达均低于正常子宫内膜和子宫内膜增生组（P<0.01），而CyclinE阳性表达均高于正常子宫内膜

2、和子宫内膜增生组（P<0.01）。PTEN和CyclinE蛋白的表达在内膜不典型性增生和子宫内膜样腺癌组中的表达均呈负相关（r=-0.61、P<0.05，r=-0.49、P<0.01）。癌组中PTEN阳性表达的缺失与组织学分级、肌层浸润深度或伴有转移及临床分期有关（P<0.01或P<0.05）。CyclinE的阳性表达率与组织学分级有关（P<0.01）。癌组中肿瘤的复发与PTEN的表达缺失和CyclinE的过度表达均有关（P<0.01）。结论 PTEN表达缺失和CyclinE的过度表达涉及了子宫内

3、膜样腺癌的发生、发展过程并与肿瘤的复发密切相关，二者的联合检测可作为子宫内膜样腺癌的早期诊断、判断肿瘤生物学行为的参考指标。 【关键词】 癌，子宫内膜样；生物学标记；PTEN；CyclinEAbstract: Objective To investigate the PTEN and CyclinE protein expression in endometrioid adenocarcinoma and precancerous tissues and their relationships to clinical pathological features of endometrioid

4、adenocarcinoma. Methods An S-P immunohistochemistry technique was used to measure PTEN and CyclinE protein in normal endometrium, endometrial hyperplasia, atypical hyperplasia and endometrioid adenocarcinoma. Results PTEN- and CyclinE-positive in atypical hyperplasia group was 50.00% and 60.00%, res

5、pectively; and PTEN- and CyclinE-positive in endometrioid adenocarcinoma group was 45.45% and 65.50%, respectively. Both positive PTEN in these two groups were lower significantly than those in normal endometrium and endometrial hyperplasia groups(P<0.01), and positive CyclinE was also higher

6、 than those in in normal endometrium and endometrial hyperplasia groups(P<0.01).The expression of PTEN protein was inversely correlated with CyclinE protein expression in atypical hyperplasia and endometrioid adenocarcinoma groups (r=-0.61, P<0.05,r=-0.49, P<0.01). In endometrio

7、id adenocarcinoma, the expression loss of PTEN protein was positively associated with histological grade, muscles invasion or lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05 or P<0.01). The expression of CyclinE protein was positively correlated with histological stage (P<0.01)

8、. The recurrence in endometrioid adenocarcinoma group was associated with PTEN expression loss and overexpression of CyclinE(P<0.01). Conclusion The results suggest that the loss expression of PTEN and overexpression of CyclinE protein are closely related to the genesis, development and recur

9、rence of endometrioid adenocarcinoma. Combination detection of PTEN and CyclinE protein might be useful marker on early diagnosis, predicting the biological behavior and prognosis of endometrioid adenocarcinoma. Key words: carcinoma, endometrioid; biological markers; PTEN; CyclinE肿瘤的本质在于细胞周期调节机制失控，导

10、致细胞异常增殖所致，PTEN作为编码具有磷酸酶活性产物的抑癌基因对细胞周期G1期的负调控起着关键的作用，而CyclinE是细胞周期G1/S期转换中的正性调控因子。我们采用免疫组化技术检测子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN和CyclinE蛋白，旨在探讨PTEN和CyclinE二者表达异常在子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征之间的相互关系，为临床早期诊断、治疗和评价预后提供依据。1 资料与方法1.1 病例来源 选自广西柳州市妇幼保健院病理科1996年6月2002年6月的子宫内膜病变标本，全部病例均经病理诊断证实。病理诊断、分类参照WHO的分类标准1，其中子宫内膜增生组30例（1

11、8例为单纯性、12例为复杂性），子宫内膜不典型性增生组20例，子宫内膜样腺癌组55例，癌组平均年龄50.3岁。另取30例正常子宫内膜标本为对照组。选择的对象均无术前激素替代治疗及放、化疗史。癌组术后组织学分级、分期按FIGO（1988）标准2。其中级27例，级20例，级8例。55例子宫内膜样腺癌中随访45例，至2007年6月，其中13例（28.89%）肿瘤复发。1.2 方法 免疫组化染色采用SP法。PTEN为多单克隆抗体，稀释度为150。CyclinE为单克隆抗体（即用型）。操作按说明书进行，切片均经EDTA（pH 9.0）作微波抗原修复，以PBS取替一抗作阴性对照，分别用已知正常子宫内膜PT

12、EN阳性和乳腺癌CyclinE阳性组织切片作阳性对照。1.3 结果判断 每张切片随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞。PTEN正常阳性表达定位于胞质，10%以上瘤细胞胞质出现棕黄色颗粒为阳性标记；<10%或无着色者为阴性。CyclinE正常阳性表达定位于胞核，5%以上瘤细胞胞核出现棕黄色颗粒为阳性标记；<5%或无着色者为阴性。1.4 统计方法 计数资料采用2检验，用SPSS 10.0统计软件包进行处理。2 结果2.1 PTEN和CyclinE蛋白在各组中的表达 PTEN和CyclinE蛋白在各组中的表达情况见表1。结果显示：PTEN蛋白在正常子宫内膜组

13、织中均为阳性表达而CyclinE蛋白均呈阴性表达，从正常子宫内膜子宫内膜增生不典型性增生子宫内膜样腺癌，PTEN的阳性表达率呈逐渐下降的趋势而CyclinE的阳性表达率则逐渐升高。经统计学处理，不典型性增生组和子宫内膜样腺癌组PTEN蛋白的表达均低于正常组和子宫内膜增生组，差异有高度显著性（P均<0.01）。不典型性增生组和子宫内膜样腺癌组CyclinE蛋白的表达均高于正常组和子宫内膜增生组，差异有高度显著性（P均<0.01）。不典型性增生组和子宫内膜样腺癌组之间PTEN、CyclinE蛋白的表达差异无显著性（P均>0.05）。表1 PTEN和Cycl

14、inE蛋白在各组中的表达情况（略）与正常子宫内膜组和子宫内膜增生组比较，P均<0.012.2 不典型性增生和子宫内膜样腺癌中PTEN和CyclinE表达的相互关系 在20例不典型性增生组和55例子宫内膜样腺癌组中，PTEN阳性/CyclinE阴性和PTEN阴性/CyclinE阳性分别为16例、41例，而PTEN阴性/CyclinE阴性和PTEN阳性/CyclinE阳性分别为4例、14例。PTEN和CyclinE蛋白在不典型性增生和子宫内膜样腺癌中的表达均呈负相关关系（r=-0.61，P<0.05；r=-0.49，P<0.01）。2.3 PTEN和Cyc

15、linE的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系 PTEN的表达随着子宫内膜样癌组织学从高分化向低分化进展，其阳性表达率逐渐下降，而CyclinE的表达则逐渐上升，PTEN的阳性表达缺失与组织学分级、子宫肌层浸润程度和淋巴结转移有关（P<0.01或P<0.05），在临床分期中，期与、期相比差异具有显著性（P<0.01）。而CyclinE阳性表达与组织学分级有关（P<0.01），与子宫肌层浸润程度和转移及临床分期无关（P>0.05）。在45例癌组随访病例中，肿瘤复发者均与PTEN蛋白的表达缺失和CyclinE蛋白的过表达密切相

16、关，见表2。表2 癌组中临床病理参数与PTEN、CyclinE表达的关系（略）3 讨论3.1 PTEN和CyclinE在细胞增殖中的作用机制 在细胞增殖信号传导中，活化的PI3K可将PIP2磷酸化成PIP3（磷脂酰肌醇3,4,5- 三磷酸），PIP3促使PKB/Akt磷酸化。PIP3本身或进一步激活整合素相连激酶（ILK），促使PKB/Akt磷酸化。PTEN作为磷脂酰肌醇（PI）三磷酸酶， 通过拮抗PI3K信号导致PIP3的肌醇环中D3位点的去磷酸化并由此灭活下游信号，从而抑制PIP3/Akt（PKB）信号传导途径。而在细胞粘连依赖信号中，PTEN通过其脂质磷酸酶活性调节FAK和Shc的磷酸化

17、而影响细胞的粘连和迁移，抑制肿瘤细胞的浸润和转移。目前认为在肿瘤细胞形成的6项基本要素：逃逸凋亡、足够的自生生长信号、对抗生长信号不敏感、促进血管生长、浸润和转移和持续复制电位中，PIP3信号至少涉及此6项中前5种信号的调节3。CyclinE是G1中期的细胞增殖信号因子，其过度表达可导致细胞增殖失控癌变发生。P27是负调节因子，有研究表明，从正常、增生、不典型性增生到子宫内膜样腺癌，P27与CyclinE蛋白二者之间的表达显示一个反向表达的过程4。PTEN可促使P27与CyclinE-CDK2复合物结合，从而显著抑制CDK2的活性并下调RB蛋白磷酸化水平而介导G1期负调控细胞增殖5,6。此调节

18、机制表明PTEN表达缺失或下降、CyclinE的过度表达，则与细胞异常增殖、癌变的发生和肿瘤的转移和浸润密切相关。3.2 PTEN在良恶性细胞组织中的表达 本组研究结果证实，随着正常、内膜增生、不典型性增生到子宫内膜样腺癌病变演变过程的进展，PTEN蛋白的阳性表达率逐渐下降，差异有显著性（P<0.01），与刘琴等7的研究结果相符。在癌前病变不典型性增生组中PTEN的阳性表达均低于正常组和增生组（P<0.01），这与增生内膜内膜不典型性增生子宫内膜样腺癌，即与从良性进展到癌前病变进而发展到恶性这样一个疾病的自然进展演变过程相一致，这种表达模式提示PTEN 的正常表达是

19、内膜腺上皮细胞正常分化调控中的关键调控因子之一，在子宫内膜样腺癌发生过程中PTEN蛋白表达的缺失是一个早期的事件并可在癌前病变中被检测出。癌组中PTEN蛋白的表达水平与组织学分级及浸润程度、转移和临床分期密切相关，提示PTEN的表达下降使得PTEN功能的丧失将促使内膜腺上皮细胞向肿瘤细胞转化，PTEN对细胞生长的负调控及对细胞凋亡、黏附和移动的控制减弱，进而促进细胞癌变的发生和肿瘤组织具有的侵袭和转移的能力8,9。3.3 Cyclin在良恶性细胞组织中的表达 与PTEN的表达相反，随着正常到内膜增生到内膜非典型性增生到子宫内膜样腺癌病变演变过程的进展，CyclinE蛋白的阳性表达率逐渐上升（P

20、<0.01）。这种表达模式提示CyclinE的正常表达是子宫内膜腺上皮细胞正常分化调控中的关键调控因子之一，在子宫内膜样腺癌中的发生过程中CyclinE蛋白的过度表达是一个早期的事件并可在癌前病变中被检测出。同时随着组织学分级从高分化向低分化的进展，CyclinE蛋白的表达水平亦呈逐渐升高（P<0.01），表明CyclinE的过度表达与子宫内膜样腺癌分化程度有关。3.4 癌变中PTEN和CyclinE表达的相关关系 肿瘤的发生涉及多基因突变和协同作用，从正常到内膜增生到内膜不典型性增生到子宫内膜样腺癌，PTEN与CyclinE蛋白二者之间的表达显示一个反向表达的过程

21、，统计学分析显示在不典型性增生组和子宫内膜样腺癌组中，二者的阳性表达均呈负相关，这一现象表明在子宫内膜样腺癌和癌前发生阶段既存在着PTEN表达的缺失，也存在CyclinE蛋白的异常高表达。此外，PTEN蛋白的表达缺失和CyclinE蛋白的过表达与肿瘤的复发密切相关，我们认为，二者表达的负相关模式涉及了子宫内膜样腺癌的启动和发展过程。鉴于目前研究已证实PTEN是子宫内膜样腺癌中突变率最高的基因且在高雌激素水平的状态下， PTEN具有抑制子宫内膜上皮过度增生进而抑制癌变发生的作用，在子宫内膜癌前病变和子宫内膜样腺癌中联合检测PTEN和CyclinE蛋白，可作为临床早期判断子宫内膜不典型性增生病变的

22、发展趋势，评价肿瘤预后的免疫学指标，并为今后临床开展PTEN靶向免疫、基因治疗提供帮助。【参考文献】 1 曹泽毅.中华妇产科学M.北京:人民卫生出版社,2004:2121-2124.2 顾美皎.临床妇产科学M.北京:人民卫生出版社,2001:911.3 Leslie NR, Downess CP. PTEN function：how normal cells control it and tumour cells lose it J. Biochem J,2004,38（2）：1-11.4 佘远萍，史玉霞，吕忠士.p27kipl和cyclinEd在子宫内膜癌中的表达及其意义J.肿瘤防治研究，2002，29(3):170-172.5 Cheney IW, Neutboom ST, Vaillancourt MT, et al. Adeno