宿主因子ZFAT影响抗流感病毒固有免疫因子MxA表达的研究.docx

1、第42卷第12期2020年12月中国预防兽医学报ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineVol.42No.12Dec.2020doi:10.3969/j.issn.l008-0589.202002017宿主因子ZFAT影响抗流感病毒固有免疫因子MxA表达的研究黄海翔七宋洋铭七施建忠二赵东明杨孝朴1,陈化兰#（1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150069）摘要：黏病毒抵抗蛋白A（MxA）是哺乳动物体内对H5N1高致病性禽流感病毒

2、有着较高敏感度的固有免疫因子，本实验首先对BioGrid数据库的蛋白质互作组学信息进行分析，结果显示包含AT钩结构域锌指蛋白（ZFAT）可能影响MxA的表达活性。为了探究ZFAT对抗流感病毒因子MxA表达调节的分子机制，本实验利用siRNA干扰技术下调A549细胞中ZFAT蛋白的表达，再通过流感病毒滴定试验检测ZFAT沉默对流感病毒复制的影响，荧光定量PCR和蛋白免疫印迹试验检测ZFAT沉默对MxA和干扰素等其他固有免疫因子表达活性的影响。结果显示：下调ZFAT蛋白表达可以显著降低流感病毒的复制能力（小©05），且无论流感病毒感染与否，下调ZFAT蛋白表达均可以显著激活A549细胞中

3、MxA的转录与翻译活性（。）.（）1）；此外，对MxA表达具有严密调控作用的I型（IFNA1、IFNB1）和III型干扰素（IFNL1）以及下游信号分子的转录活性在6hpi也因ZFAT表达的下调而显著提升（/X0.05）。以上结果表明下调ZFAT蛋白的表达可以提高宿主细胞抗病毒因子的转录水平，并且激活抗流感病毒因子MxA的蛋白表达。本实验为探寻宿主固有免疫系统抵抗流感病毒侵入的分子机制提供了新的视角和依据。关键词：H5N1高致病性禽流感病毒；含AT钩结构域锌指蛋白；黏病毒抵抗蛋白；固有免疫调节中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1008-0589（2020）12-1201-07Z

4、FATregulatesexpressionofanti-influenzainnateimmunefactorMxAHUANGHai-xiang12,SONGYang-ming12,SHIJian-zhong2,ZHAODong-ming2,YANGXiao-pu',CHENHua-Ian1（1.GansuAgriculturalUniversity,CollegeofVeterinaryMedicine,Lanzhou730070,China;2.AnimalInfluenzaKeyLaboratoryoftheMinistryofAgricultureandRuralAffair

5、s,StateKeyLaboratoryofveterinaryBiotechnology,HarbinVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150069,China）Abstract:MammalianmyxovirusresistanceproteinA（MxA）isaninnateimmunefactorwithoutstandingsensitivitytoH5N1highly-pathogenicavianinfluenza（HPAI）virusinfection.Toexplor

6、ethemolecularmechanismofregulationofMxAexpressionduringinfluenzavirusinfection,weperformedproteininteractomepredictionbyutilizingthemappingdatafromBioGriddatabase,andfoundthatthezinc-fingerandAThookdomaincontainingprotein（ZFAT）mightaffecttheMxAexpression.Toverifythisfinding,ZFAT-specificsiRNAtreatme

7、ntwasappliedtodownregulatetheexpressionofZFATproteininA549cells,followedbyCorrespondingauthor收稿日期：2020-02-17基金项目：自然科学基金创新群体项目（31521005）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（1610302017001）作者简介：黄海翔（1993-）,男，甘肃兰州人，硕士研究生，主要从事流感病毒与宿主相互作用研究.*通信作者：E-mail：chenhualanH5N1HPAIvirusinfection.WefoundthatviralreplicationinA549cel

8、lswassignificantlysuppressed(/?<0.05)whenZFATproteinexpressionwasinhibited,andsignificantupregulation(pvO.Ol)ofMxAtranscriptionalandtranslationalactivityweredetectedbyusingqPCRandwesternblot,respectively.Moreover,suppressedZFATexpressionsignificantlyenhancedtranscriptionalactivityofmoleculesinIFN

9、signalpathwayat6hourspostinfection(hpi),includingtypeI(IFNA1,IFNB1)andtypeIII(IFNL1)IFNswhichtightlyregulatetheexpressionofMxA.TheseresultsindicatethatdownregulatedZFATproteinexpressionledtoactivatedMxAproteinexpressionandenhancedmRNAtranscriptionactivityofcellularantiviralfactors.Ourstudyprovidesan

10、ovelperspectiveonthemolecularmechanismofinnateimmuneresponseagainstinfluenzavirusinfection.Keywords：H5N1highly-pathogenicavianinfluenzavirus;ZFAT;MxA;innateimmuneregulation世卫组织截止2020年1月20日的实验室监测数据显示，H5N1高致病性禽流感病毒(Highly-pathogenicavianinfluenza,HPAI)的累计致死率高达52.85%，而流感病毒在水禽和哺乳动物之间的跨物种传播能力则是这一疾病周期性在人群

11、中爆发的原因之一，长期的病原-宿主共进化使得不同物种体内表达的MxA均具有广谱抑制RNA病毒复制的能力，而哺乳动物体内表达的黏病毒抵抗蛋白(Myxo-virusresistanceproteinA,MxA)则对H5N1高致病性禽流感病毒(HPAIV)有较高的敏感性2、流感病毒的感染过程中通常存在病毒蛋白与宿主因子相互结合并拮抗或增强特定生物学功能的情况，例如流感病毒NS1与宿主DOK6蛋白的相互作用使得NS1蛋白抑制干扰素表达的功能受到拮抗w)因而这一过程中流感病毒密切参与并影响了宿主的蛋白互作网络”-气参照生物学通用互作库数据集(BioGrid,/)

12、,本实验利用组学映射数据筛选的方法取得了流感病毒感染进程相关的蛋白-蛋白互作(PH)结果，通过富集运算筛选了互作组因子以后重点分析了包含抗流感免疫因子的互作网络，发现包含AT钩结构域锌指蛋白(Zinc-fingerandAThookdomaincontainingprotein,ZFAT)可能调控MxA表达活性的信息。ZFAT最早由Shirasawa181等人在甲状腺自身免疫病模型中鉴定并发表，因其在造血干细胞分化调控和外周血淋巴细胞稳态机制中的基础性作用而受到关注，尽管目前未有详细阐明ZFAT参与抗流感免疫机制的报道，但是ZFAT与其他多个抗流感因子在PPI网络中的密切联系使得ZFAT极有可

13、能参与了抗流感免疫进程，本实验拟利用siRNA干扰技术下调ZFAT蛋白表达，检测ZFAT沉默对流感病毒复制的影响，并在流感病毒感染条件下检测ZFAT沉默对MxA和干扰素等其他固有免疫因子表达活性的影响。1材料与方法主要实验材料总RNA提取试剂盒(DP419)购自天根生化科技(北京)有限公司；反转录试剂HiS-criptIIIRTSuperMixforqPCR(+gDNAwiper)(R323)及qPCR试剂ChamQUniversalSYBRqPCRMasterMix(Q711)购自南京诺唯赞生物科技有限公司；PrimestarDNA聚合酶(RO45A)购自TaKaRa公司；转染试剂Lipof

14、ectamineLTXandPlusReagent(15338100)、Li-pofectamineRNAiMAXTransfectionReagent(13778)、HanTs.F12-K、Opti-MEM细胞培养基以及胎牛血清均购自赛默飞世尔科技公司；环乙酰亚胺(Cyclohexi-mide,CHX,GC17198)购自GlpBio公司;siRNA合成于上海吉玛制药技术有限公司；4x蛋白上样缓冲液(P1015)购自Solarbio；鼠抗ZFAT单克隆抗体(sc-398058)购自圣克鲁斯生物技术有限公司，兔抗MxA(37849S)、GAPDH(2118)多抗以及DyLight800近红外荧

15、光染料偶联二抗(5151,5257)购自CST公司。1.1 细胞系、病毒以及鸡胚A549以及HEK293T细胞系由本实验室保存；流感病毒A/Anhui/2/2005(AH05)(H5N1)由禽流感国家参考实验室鉴定及保存；1()日龄SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供ZFAT影响MxA表达的生物信息学预测利用BioGrid互作组学数据库获取ZFAT和MxA相关的一、二级映射网络，在Cytoscape软件中制作图谱，将合并网络依据CytoHubba插件计算得出的各节点degree值并分级排布，最后通过富集分析获取抗流感免疫的宿主因子名单，经融合后筛选MxA相关互作链条并将包

16、含ZFAT及中间节点的最简网络选出，单独绘图以方便后续验证及分析。1.2 qPCR引物设计与合成依据GenBank中人源ZFAT(57623)、MxA(4599)、IFNA1(3439)、IFNB1(3456)、IFNL1(282618)、IRF3(3661)、IRF7(3665)、IRF9(10379)mRNA序列，利用Primer-BLAST设计qPCR引物(表1),引物由吉林库美生物技术有限公司合成。表lqPCR引物Table1PrimersforqPCR引物Primer序列Sequence(5'-3')ZFAT-qPCR-FCAGCAGACACCTTATGAGCAAZF

17、AT-qPCR-RGCAGGCGAACTTCTCTCCAMXA-qPCR-FAGGACATCACTGCTCTCATGCMXA-qPCR-RAAAGCCTGGCAGCTCTCTACIFNAl-qPCR-FGATTTCCCCAGGAGGAGTTTGAIFNAl-qPCR-RTGCAGAATTTGTCTAGGAGGTCIFNBl-qPCR-FACGCCGCATTGACCATCTATIFNBl-qPCR-RTGCTCATGAGTTTTCCCCTGGIFNLl-qPCR-FGGAGGCATCTGTCACCTTCAIFNLl-qPCR-RGCCCTATGTCTCAGTCAGGGIRF3-qPCR-FGAG

18、TTCGAGGTGACAGCCTTIRF3-qPCR-RGCTCATCACTCCCCTGTCTGIRF7-qPCR-FCCAGCAGGTAGCATTCCCCAIRF7-qPCR-RGTACACCTTGCACTTGCCCATlRF9-qPCR-FAAAATCCTCGCACACACTGGIRF9-qPCR-RTAGAGTTGGGAGGTCAGGGAJAKl-qPCR-FCCACTACCGGATGAGGTTCTAJAKl-qPCR-RGGGTCTCGAATAGGAGCCAGSTATl-qPCR-FCAGCTTGACTCAAAATTCCTGGASTATl-qPCR-RTGAAGATTACGCTTGCT

19、TTTCCTGAPDH-qPCR-FCAAAAGCTTCGGGAACGTGGGAPDH-qPCR-RTACGCGTAGGGGTTTGACACZFATsiRNA的设计与筛选依据GenBank人源ZFAT(57623)mRNA序列设计3条独立的siRNA(表2),每条siRNA取20pmol加入50gLOpti-MEM培养基中，混匀后加入1.5|1LRNAiMAX试剂，滴状混匀，室温静置孵育15min,悬浮干扰A549细胞后37°C继续培养36ho试验设scrambledsiRNA干扰后的A549细胞为对照，通过qPCR和westernblot试验检测上述siRNA干扰对ZFAT的转录和

20、翻译的抑制效果并选取最佳siRNA用于后续实验。表2siRNA序列Table2siRNAsequencesiRNA正链Sense(5'-3')负链Antisence(5'-3')ZFATsiRNA-1GCAGGUGUCUCAGGUCAAATTUUUGACCUGAGACACCUGCTTZFATsiRNA-2GCCUCUGAGUACACUGAATTUUCAGGUGUACUCAGAGGCTTZFATsiRNA-3GCAGACACCUUAUGAGCAATTUUGCUCAUAAGGUGUCUGCTT收获经ZFATsiRNA和scrambledsiRNA干扰的A549细胞，

21、按照总RNA提取试剂盒说明提取RNA,测量样品浓度后每份样品取1|igRNA反转录，利用ChamQUniversalSYBRqPCRMasterMix进行qPCR检测，选取表1中ZFAT-qPCR-F/R引物对按照表3程序检测ZFAT的转录活性，GAPDH-qPCR-F/R引物对用于检测A549细胞内参基因GAPDH的转录活性，通过相对定量计算2何以值得到目的基因表达差异，利用GraphPadPrism7进行统计学分析。表3qPCR反应程序Table3qPCRprogram阶段(循环数)Phase(numberofcycles)龈(°C)Temperature时间(sec)Time变

22、温速度(°C/s)Rateoftemperaturechange预变性(IX)95ikPredenaturationOUi.VPCR扩增(40X)95101.6PCRampl由cation59301.6溶解曲线(IX)os1c1ADissolutioncurve1D1.060601.695151.5收获经ZFATsiRNA和scrambledsiRNA干扰的A549细胞，制备westernblot检测样品，经电泳、转膜、5%脱脂乳封闭后，以稀释的鼠抗ZFAT和GAP-DH抗体(11(XX)4°C过夜孵育，次日经室温孵育近红外荧光染料偶联二抗(1500)15h后，wester

23、nblot检测ZFAT和GAPDH的条带亮度，采用ImageJ软件进行相对灰度值分析。1.3 流感病毒复制的滴定试验流感病毒原液经倍比稀释后以MOI().001感染经ZFATsiRNA和scram-bledsiRNA干扰的A549细胞,37°C孵育1h后吸净上清并用PBS洗涤细胞，加入1mLOpti-MEM培养基置于37°C孵育，24hpi>48hpi分别收获培养基上清并接种于1。日龄SPF鸡胚中测定EID*流感病毒同步感染试验与ZFAT沉默后对MxA和干扰素等其他固有免疫因子表达活性的检测流感病毒以MOI1感染CHX处理后的ZFATsiRNA和scrambledsi

24、RNA干扰A549细胞，4°C孵育1h吸净上清并用PBS洗涤细胞，加入1mLOpti-MEM培养基置于37°C孵育,分别于6hpi、12hpi收获细胞样品，将scrambledsiRNA干扰设为对照，选取表1中除ZFAT-qPCR-F/R以外的所有引物对，GAPDH-qPCR-F/R用于检测细胞内参基因，参考1.5所示方法，收获流感病毒感染前后的A549细胞样品，利用表3所示程序通过qPCR检测抑制ZFAT表达在流感病毒感染前后对MxA、IFNA1>IFNB1>IFNL1、IRF3、IRF7、IRF9、JAK1以及STAT1转录活性的影响，同时参照1.5所示we

25、sternblot方法，利用兔抗MxA一抗检验下调ZFAT表达后对MxA翻译的影响。结果显示ZFAT在ZFATsiRNA-3干扰的A549细胞中出现表达抑制现象，ZFAT条带的相对灰度值相比对照下调了77.10%(图3),表明通过ZFATsiRNA-3干扰A549细胞可以有效降低ZFAT的转录和翻译活性。2结果2.1生物信息学预测BioGrid互作组学数据经融合和富集算法处理后，在Cytoscape软件中利用Cyto-Hubba插件将节点分级排列，选取以MxA和ZFAT为中心的一级和二级网络单独绘图(图1),图示中ZFAT与MxA处于同一个互作关系网，节点颜色表示与该节点蛋白存在直接互作的蛋白

26、数量，红色越深则表示该节点参与的互作关系越复杂，其中热休克蛋白Bl(HSPB1)及与之直接互作的干扰素刺激基因15(ISG15)、三联基序蛋白25(TO425)均有参与抗流感免疫的报道°-，因而该网络可以被简单划分为相对独立的两个部分，即以MxA表达调节为核心功能的PPI网络和以ZFAT为中心的PPI网络，其中HSPB1是与ZFAT存在直接互作的3个蛋白之一，在连接两个网络的同时也体现出ZFAT具有参与固有免疫进程的潜在可能，考虑到MxA通常是受到固有免疫信号调控的下游效应分子，推测ZFAT可能对MxA的表达或功能具有调控作用。%(UOEaldx。Hddvo01poz=c3luou)

27、U9ssodxoVN*E1501000*:p<0.01图2ZFAT影响MxA表达的生物信息学预测结果Fig.2BioinformaticalpredictionforZFATinfluencingMxAexpressionScrambledsiRNAZFATsiRNA-3Anti-ZFATScrambledsiRNAZFATsiRNA-3图3ZFATsiRNA-3干扰抑制ZFAT蛋白表达Fig.3ZFATproteinexpressioninhibitedbyZFATsiRNA-3interferenceAnti-GAPDH%(HadvD2POZMEJOU)一xsoOn-PAARIOOA

28、MONFig.1BioinformaticalpredictionforZFATinfluencingMxAexpression2.2ZFATsiRNA-3干扰后ZFAT蛋白表达的检测结果ZFATsiRNA和scrambledsiRNA干扰后的A549细胞经37°C孵育36h后收获细胞样品，将scrambledsiRNA设为条件对照,通过qPCR及westernblot试验检测ZFATsiRNA-1、ZFATsiRNA-2>ZFATsiRNA-3在A549细胞上的干扰效果。qPCR结果显示，siRNA干扰A549细胞中ZFAT的2即值相比对照细胞分别下调了2.97%、73.73

29、%(/X0.01)禾091.33%(/X0.01),其中ZFATsiRNA-3干扰效果最佳(图2)。Westernblot下调ZFAT蛋白表达对流感病毒复制影响结果将流感病毒以MOI0.001感染ZFATsiRNA-3和scrambledsiRNA干扰后的A549细胞，24hpi>48hpi分别收获无血清培养基上清，通过接种鸡胚测定EID5co结果显示病毒滴度在24hpi和48hpi相比对照分别降低了2.61倍(冲05)和8.25倍(p<().()l)(图4),表明ZFAT沉默可以显著抑制流感病毒复制。2.3 下调ZFAT蛋白表达对MxA的转录和翻译活性影响结果将ZFATsiRNA

30、-3和scrambledsiRNA干扰后的A549细胞进行流感病毒同步感染后6hpi、12hpi分别收集细胞样品，将scrambledsiRNA干扰设为条件对照，通过qPCR和westernblot检测ZFAT表达抑制在流感病毒感染前后对MxA转录和翻译的影响。qPCR结果显示：在ZFAT表达受到抑制的情况下，MxA的2"值在未感染、6hpi以及12hpi的A549细胞中相比对照分别上调了3.32倍（/xO.Ol）、1.68倍QxO.01）以及1.42倍（p<0.01）（图5）,westernblot结果显示，ZFAT沉默后的MxA蛋白表达在未感染、6hpi以及12hpi的A5

31、49细胞中相比对照出现上调，MxA条带的相对灰度值分别上调了1.90倍、1.15倍和1.19倍（图6）o表明抑制ZFAT的表达可以显著扰设为对照，通过qPCR检验ZFAT的表达抑制在流感病毒感染前后对干扰素及下游信号因子转录活性的影响。qPCR结果显示，ZFAT沉默使得A549细胞在6hpi相比对照表现出I型、III干型扰素以及下游信号分子IRF3、IRF7、IRF9转录活性的显著上调，其中IFNA1、IFNB1和IFNL1的值分别相比对照上升了提升A549细胞中MxA的表达。*C2)ScrambledsiRNAn也ZFATsiRNA-32.02倍、1.84倍以及1.42倍（/X0.05）；I

32、RF9、JAK1、STAT1的2心。值在12hpi相比对照呈现显著抑制，分别降低了0.52倍、0.29倍以及0.37倍（p<0.01）（图7）。表明下调ZFAT蛋白表达可以广泛影响干扰素及其干扰素受体下游信号分子的转录活性。024hpi48hpi*:p<0.05;*:p<0.01图4ZFAT表达沉默抑制流感病毒的复制Fig.4SilencingofZFATexpressionleadstotheinhibitionofinfluenzavirusreplication(uoSSEdxx£sPUZWLEOU)u.2ssaldx。VNNE(UO参？dx。HddVD0一P

33、OZ=puuou)uo一ssaldx。vnnlu104、4、4、不4不不不不4不不不不券4皿不，不不不4“4-，：，：4、4Control由ZFATsiRNA-3曲ScrambledsiRNA(uossgdxHddVD9PE-mEOU)u.2ssaldx。VN8E(u.2ssajdx。Hadvcclpoz=Tnuou)u.2ssrudx。VNcdE*11in护不不不不不不不不6hpi12hpi*:p<0.01(uossgdxHad<Do-E=mEOU)uoSSEdx。<n*lu5050LLo.01puz二CUEOU)u.2ssaldx。vnheA549细胞中上调MxA转录活性

34、(uo号d封Hudvoo-wfluEou)u.2ssadxa>VNcsiLU(uowdxQHadv。u.2ssaldxoVNoiLUA/Anhui/2/2005(AH05)(H5N1)图5ZFATsiRNA-3干扰在流感病毒感染前后的Fig.5MxAtranscriptionactivityinA549cellsupregulatedbyZFATsiRNA-3interferencebeforeorafterinfluenzavirusinfectionZFATsiRNA-3ScrambledsiRNAA/Anhui/2/2()O5(AHO5)(H5Nl)Control6hpi12hpi

35、Control6hpi12hpiMxAGAPDHHZFATsiRNA-3G3ScrambledsiRNA次(HadvDEpoz=c3eou)vxsoonaAmmy-500*15010050不不不4；4：4；i.II.1.Ii.II1.1I 1.1.!彳4、44；不不4以不不不4-11-1-*小小不4、不不4-<彳彳冰出牡4、XT.A4、吊不4不不不4.I4414.4出十lltii不r不不不4、尸个小小不4不不不.仰不仆尸4不不不44；不不祠杯不个4、小4、不不Control6hpi图6ZFATsiRNA-3干扰在流感病毒感染前后的A549细胞中激活MxA蛋白表达Fig.6

36、MxAproteinexpressioninA549cellsinducedbyZFATsiRNA-3beforeorafterinfluenzavirusinfection流感病毒在宿主体内的复制过程始终受到固有免疫系统的监控和抗病毒免疫机制的抑制l，3d41,病原-宿主共进化使得病原不断获得有效的免疫逃逸机制来完成自身的复制"。相比于其他亚型的流感病毒，哺乳动物表达的MxA对H5N1禽流感病毒具有更强的特异性和敏感度，同时MxA表达活性受到1型、III型干扰素的严密调控四，MxA通过抑制病毒vRNP复合体2.5下调ZFAT表达对干扰素及下游信号分子的转录活性影响结果将ZFATsi

37、RNA-3和scrambledsiR-NA干扰后的A549细胞进行流感病毒同步感染后分别收集6hpi、12hpi的细胞样品，将scrambledsiRNA干的入核进程与聚合酶功能达到抑制病毒复制的作用。宿主与病原长期斗争的历史使得双方不断发生适应性的进化，然而生物复杂的进化历史又使得任何适应性背后的分子机制无法成为绝对独立的单元，蛋白互作组学使得研究者有机会通过分子之间的共轴结合辨析一个复杂系统中特定因子可能发挥的作用胴。本实验通过蛋白互作组预测ZFAT可能参与了固有免疫因子MxA的表达调控，而验证实验表明下调ZFAT蛋白表达可以显著提高MxA的转录与翻译活性，并抑制H5N1HPAIV在A54

38、9细胞中的复制，在细胞受到感染以前，下调ZFAT表达促使A549细胞提前进入“抵抗状态”，所以当感染发生时活跃的MxA表达及其抗病毒效应将持续抑制病毒在宿主细胞内的复制；H5N1HPAIV感染后，下调ZFAT表达使得细胞在显著提升干扰素及其下游信号分子转录活性的同时具有了更强的MxA表达活性与抗病毒能力。MxA的表达激活是固有免疫信号通路末端效应的一部分，正常细胞受到病毒感染以后诱导表达大量的I型和III型干扰素，。干扰素受体发出的下游信号使得大量信号转导和转录激活因子（STAT）以二聚体磷酸化形式入核并发挥转录调节功能，大幅提升干扰素应答元件（ISRE）中包括MxA在内的所有效应分子的转录活

39、性，以此使得细胞产生了强大的抗病毒能力吓，固有免疫应答产生的大量I型和III型干扰素是诱导MxA表达的必要条件凹。然而本研究中ZFAT沉默却可以抑制未被流感病毒感染的A549细胞中I型干扰素的转录活性，效应分子MxA与干扰素表达活性在ZFAT表达下调后表现出的分化提示ZFAT可能在正常生理条件下参与了两类固有免疫因子的转录调节，即在维持I型干扰素转录水平的同时，抑制III型干扰素以及MxA等干扰素效应分子的转录活性，当病毒感染发生时，能够协助流感病毒逃避宿主免疫系统攻击的NS1蛋白等病毒因子可能会与ZFAT通过相互作用强化对MxA等固有免疫效应分子的转录抑制作用；而在ZFAT表达下调的情况下，

40、这一免疫逃逸机制受到抑制并使得MxA的表达高于对照细胞，进而影响流感病毒的复制，后续实验可以验证ZFAT与H5N1HPAIV的相互作用并尝试找到ZFAT锌指结构域的核酸结合位点，进一步证实ZFAT在流感病毒感染进程中发挥的作用，相信随着固有免疫研究的深入，更多的真相将会被一步步揭示出来。参考文献：1CumulativenumberofconfirmedhumancasesofavianinfluenzaA（H5NI）reportedtoWHOEB/OLJ.2020.2ZIMMERMANNP,MANZB,HALLER0,etal.TheviralnucleoproteindeterminesMx

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