材料结构荧光分析法

1、 荧光分析法荧光分析法（fluorescence)教学目标：教学目标：掌握分子荧光产生机理掌握分子荧光产生机理掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱特征特征掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影 响因素响因素熟悉荧光定量分析方法及荧光分光光度计熟悉荧光定量分析方法及荧光分光光度计了解分子荧光分析法的应用了解分子荧光分析法的应用荧光棒发光原理荧光棒发光原理 荧光棒中的化学物质主要由三种物质组成：过氧荧光棒中的化学物质主要由三种物质组成：过氧化物、酯类化合物和荧光染料。简单地说，荧光棒发化物、酯类化合物和荧光染料。

2、简单地说，荧光棒发光的原理就是过氧化物和酯类化合物发生反应，将反光的原理就是过氧化物和酯类化合物发生反应，将反应后的能量传递给荧光染料，再由染料发出荧光。目应后的能量传递给荧光染料，再由染料发出荧光。目前市场上常见的荧光棒中通常放置了一个玻璃管夹层，前市场上常见的荧光棒中通常放置了一个玻璃管夹层，夹层内外隔离了过氧化物和酯类化合物，经过揉搓，夹层内外隔离了过氧化物和酯类化合物，经过揉搓，两种化合物反应使得荧光染料发光。两种化合物反应使得荧光染料发光。 荧光分析法荧光分析法荧光：荧光：物质分子接受光子能量被激发后，从第物质分子接受光子能量被激发后，从第一激发单重态的最低振动能级返回基态时发射一激

3、发单重态的最低振动能级返回基态时发射出的光。出的光。优点：优点：灵敏度高；选择性好；试样量少；方法灵敏度高；选择性好；试样量少；方法简单。简单。缺点：缺点：应用范围小。应用范围小。荧光分析法：荧光分析法：根据物质的荧光谱线位置及其强根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。度进行物质鉴定和含量测定的方法。第一节第一节 荧光分析法的基本原荧光分析法的基本原理理一、分子荧光一、分子荧光（一）分子荧光的产生（一）分子荧光的产生基态基态单重态单重态S三重态三重态TE isS12 sM单重态：单重态：s=0，M=1，分子所处的电子能态。分子所处的电子能态。分子的多重性：分子的多重性：总

4、自旋量子数：总自旋量子数：三重态：三重态：s=1，M=3，分子所处的电子能态。分子所处的电子能态。1.1.分子的电子能级与激发过程分子的电子能级与激发过程电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁过辐射跃迁( (发光发光) )和无辐射跃迁等方式失去能量。和无辐射跃迁等方式失去能量。2.2.荧光的产生荧光的产生传递途径传递途径辐射跃迁辐射跃迁荧光荧光振动弛豫振动弛豫无辐射跃迁无辐射跃迁磷光磷光系间跨越系间跨越内转换内转换外转换外转换S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越系间跨越内转换内转换振动弛豫振动弛豫能能量量l l

5、 2l l 1l l 3 外转换l l 2T2内转换内转换振动弛豫振动弛豫非辐射能量传递过程非辐射能量传递过程振动弛豫振动弛豫( (vibrational relexation) )：出于激发态各振出于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递给溶剂分子，其电子返回到同一电子能级的最量传递给溶剂分子，其电子返回到同一电子能级的最低振动能级间的过程；发生振动弛豫的时间低振动能级间的过程；发生振动弛豫的时间10 -12s s。内部能量转换内部能量转换( (internal conversion) )：当两个电子激当两个电子激发态之间

6、的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。能级的过程。S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越系间跨越内转换内转换振动弛豫振动弛豫能能量量l l 2l l 1l l 3 外转换l l 2T2内转换内转换振动弛豫振动弛豫 外部能量转换外部能量转换 （external conversion)：激发态激发态分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而失分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而失去能量的非辐射跃迁；外转换使荧光或磷光减去能量的

7、非辐射跃迁；外转换使荧光或磷光减弱或弱或“猝灭猝灭”。 体系间跨越体系间跨越(intersystem crossing)：处于激发态处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程；分子由激发单重态跨越到激发生变化的过程；分子由激发单重态跨越到激发三重态。三重态。非辐射能量传递过程非辐射能量传递过程S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越系间跨越内转换内转换振动弛豫振动弛豫能能量量l l 2l l 1l l 3 外转换l l 2T2内转换内转换振动弛豫振动弛豫辐射能量传递过程辐射能量传递过程荧光发射：荧光发射：激发分

8、子从激发分子从第一激发单重态的最低振第一激发单重态的最低振动能级动能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为射称为荧光荧光；荧光辐射能要比激发能量低，荧光；荧光辐射能要比激发能量低，荧光波长大于激发波长；荧光发射时间为波长大于激发波长；荧光发射时间为10-9-10-7s。磷光发射：磷光发射：激发分子由激发分子由第一激发三重态的最低振动第一激发三重态的最低振动能级能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为为磷光磷光；磷光辐射能要比荧光辐射能量低，磷光波磷光辐射能要比荧光辐射能量低，磷光波长大于荧光波长；磷光发射时

9、间为长大于荧光波长；磷光发射时间为10-4-10s。S2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越系间跨越内转换内转换振动弛豫振动弛豫能能量量l l 2l l 1l l 3 外转换外转换l l 2T2内转换内转换振动弛豫振动弛豫荧光分光光度计的主要部件：荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色器、光源、激发单色器、发射单色器、样品池、检测系统。发射单色器、样品池、检测系统。光源光源激发单色器激发单色器样品池样品池发射单色器发射单色器检测器检测器放大器放大器指示器指示器记录器记录器（二）荧光的激发光谱和发射光谱（二）荧光的激发光谱和发射光谱激发光谱激发光谱（excitation

10、 spectrum）：将激发光的光：将激发光的光源用激发单色器分光，使不同波长的入射光激发源用激发单色器分光，使不同波长的入射光激发荧光体，然后让所产生的荧光通过荧光体，然后让所产生的荧光通过固定波长的发固定波长的发射单色器射单色器而照到检测器上，测定不同波长光照射而照到检测器上，测定不同波长光照射下荧光强度的变化，以激发波长为横坐标，荧光下荧光强度的变化，以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标，可得荧光物质的激发光谱。强度为纵坐标，可得荧光物质的激发光谱。注意：注意：激发光谱与其吸收光谱极为相似，但激发光激发光谱与其吸收光谱极为相似，但激发光谱曲线是谱曲线是荧光强度与波长的关系曲线荧光强度与波

11、长的关系曲线，吸收曲线则，吸收曲线则是是吸光度与波长的关系曲线吸光度与波长的关系曲线，两者性质是不同的。，两者性质是不同的。荧光光谱（荧光光谱（fluorecence spectrum）：）：固定激发固定激发光波长为最大激发波长光波长为最大激发波长，而让荧光物质发射的，而让荧光物质发射的荧光通过发射单色器分光扫描并检测不同波长荧光通过发射单色器分光扫描并检测不同波长下的荧光强度，以发射波长为横坐标，荧光强下的荧光强度，以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，得到物质的荧光光谱。度为纵坐标作图，得到物质的荧光光谱。荧光物质的最大激发波长（荧光物质的最大激发波长（l lex）和最大）和最大发射波

12、长发射波长（l lem）是鉴定物质的根据；也是定是鉴定物质的根据；也是定量测定最为灵敏的条件。量测定最为灵敏的条件。荧光光谱的普遍特性荧光光谱的普遍特性1.斯托克斯位移斯托克斯位移(Stokes shift): 激发光谱与发射光谱之间的波长差值激发光谱与发射光谱之间的波长差值；荧光发；荧光发射波长总是大于激发光谱波长。射波长总是大于激发光谱波长。室温下菲的乙醇溶液荧光光谱室温下菲的乙醇溶液荧光光谱2.荧光光谱的形状与激发波长无关荧光光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量，产生不同吸收带，但均回到第一激发单的能量，产生不同吸收

13、带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，从而荧光重态的最低振动能级再跃迁回到基态，从而荧光发射光谱只有一个发射带，而且荧光光谱的形状发射光谱只有一个发射带，而且荧光光谱的形状与激发波长无关。与激发波长无关。3.荧光光谱与激发光谱的镜像关系荧光光谱与激发光谱的镜像关系荧光光谱的普遍特性荧光光谱的普遍特性激发光谱与荧光光谱成对称镜像关系。激发光谱与荧光光谱成对称镜像关系。nm200280360440520020406080100Fab4b3b2b1b0c0c1c2c3c4蒽的激发光谱（虚线）蒽的激发光谱（虚线）荧光光谱（实线）荧光光谱（实线）二、荧光与分子结构二、荧光与分子结构（一

14、）荧光寿命和荧光效率（一）荧光寿命和荧光效率荧荧光光寿寿命命(fluorescence lift time)：当当除除去去激激发发光光源源后，后，分分子子的的荧荧光光强强度度降降低低到到最最大大荧荧光光强强度度的的1/e所所需需的的时时间，间，用用表表示。示。荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。一定程度时所用的时间。荧光效率：荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少荧光效率：荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。荧光效率是指荧光分子将吸收

15、的光能转变成荧光的地以其他形式释放。荧光效率是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。荧光效率百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。荧光效率= =发射荧光的光量发射荧光的光量分子数（荧光强度）分子数（荧光强度）/ /吸收光的光量子数（激发光强度），发射荧光的吸收光的光量子数（激发光强度），发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有最大

16、吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长最接近于某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长最接近于荧光分子的最大吸收峰波长，且测定光波长在接近于最大发射光波峰时，荧光分子的最大吸收峰波长，且测定光波长在接近于最大发射光波峰时，得到的荧光强度也最大。得到的荧光强度也最大。吸收激发光的光子数发射荧光的光子数 f荧荧光光效效率率（fluorescence efficiency):指指激激发发态态分分子子发发射射荧荧光光的的分分子子数数与与基基态态分分子子吸吸收收激激发发光光的的光光子子数数之之比，比，常常用用表表示。示。荧光效率与物质的分子结构和所处的化学环境荧光效率与物质的分子结构和所处的化

17、学环境条件有关。条件有关。（二）有机化合物分子结构与荧光的关系（二）有机化合物分子结构与荧光的关系物质产生荧光必须具备的条件：物质产生荧光必须具备的条件：（1）物质的）物质的分子必须具有能够吸收紫外和较短分子必须具有能够吸收紫外和较短波长可见光的结构波长可见光的结构（2）物质）物质必须具有较大的荧光效率必须具有较大的荧光效率1.1.长共轭结构（芳香族化合物）长共轭结构（芳香族化合物） 共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移205nm278nm286nm321nm356nm404nm0.110.290.362.2.分子的刚性分子的刚性分子刚性越强，分子振动少

18、，与其它分子碰分子刚性越强，分子振动少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高，荧撞失活的机率下降，荧光量子效率提高，荧光长移。光长移。3.3.取代基取代基给电子基团使荧光增强；荧光波长长移。给电子基团使荧光增强；荧光波长长移。吸电子基团会减弱甚至破坏荧光。吸电子基团会减弱甚至破坏荧光。同同 电子体系相互作用小的取代基对荧光影响电子体系相互作用小的取代基对荧光影响不明显。不明显。（三）荧光试剂（三）荧光试剂1.1.荧光胺荧光胺nm390275、 exlnmem455 lnm340 exl2.2.邻苯二甲醛邻苯二甲醛( (OPA) )nmem480 lnm365 exlnmem500 l

19、3.1-3.1-二甲氨基二甲氨基5 5氯化磺酰萘氯化磺酰萘4.4.测定无机离子的荧光试剂测定无机离子的荧光试剂三、影响荧光强度的外部因素三、影响荧光强度的外部因素温度增加，荧光效率和荧光强度下降。温度增加，荧光效率和荧光强度下降。1.温度温度2.溶剂溶剂*跃迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也跃迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也发生红移；溶剂粘度降低，荧光强度降低。发生红移；溶剂粘度降低，荧光强度降低。3.酸度酸度NH3+OH-H+NH2NH-OH-H+pH 34pH 67荧光猝灭：荧光猝灭：荧光物质分子与溶剂分子或其他荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现溶

20、质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。象称为荧光猝灭。荧光熄灭剂：荧光熄灭剂：能引起荧光强度降低的物质。能引起荧光强度降低的物质。4.荧光熄灭剂荧光熄灭剂碰撞猝灭碰撞猝灭 M+hvM*,M*+Q M+热热静态猝灭静态猝灭 M+Q MQ 非荧光物质非荧光物质转入三重态的猝灭转入三重态的猝灭 三重态三重态荧光物质的自猝灭荧光物质的自猝灭 荧光物质浓度较高荧光物质浓度较高导致荧光熄灭的原因：导致荧光熄灭的原因：荧光熄灭法荧光熄灭法: : 荧光物质加入某些猝灭剂后，其荧荧光物质加入某些猝灭剂后，其荧光强度的减少与荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，光强度的减少与荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，可用于

21、测定猝灭剂的含量，这种方法称为荧光熄可用于测定猝灭剂的含量，这种方法称为荧光熄灭法。灭法。5.5.散射光散射光瑞利光：瑞利光：光子与物质分子发生弹性碰撞，不发生光子与物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，运动方向改变；能量交换，运动方向改变；瑞利光瑞利光入射光入射光拉曼光：拉曼光：光子与物质分子发生非弹性碰撞，发光子与物质分子发生非弹性碰撞，发生生能量交换，运动方向改变；能量交换，运动方向改变；拉曼光拉曼光入射光入射光320360448激发激发 320nm硫酸奎宁硫酸奎宁350448激发激发 350nm硫酸奎宁硫酸奎宁320360激发激发 320nm0.1mol/L硫酸硫酸350400激发激发

22、 350nm0.1mol/L硫酸硫酸a.强度强度b.强度强度硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光（硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光（a）与拉曼光谱（）与拉曼光谱（b）溶剂溶剂激发光激发光(nm) 248 313 365 405 436水水乙乙 醇醇环己烷环己烷CCl4CHCl3271 350 416 469 511267 344 409 459 500267 344 408 458 499 320 375 418 450 346 410 461 502在不同波长激发光下主要溶剂的拉曼光波长在不同波长激发光下主要溶剂的拉曼光波长( (nm) )第二节第二节 荧光定量分析方法荧光定量分析方法一、荧光强度与

23、物质浓度的关系一、荧光强度与物质浓度的关系I0IF)(0IIKFEClII100)1 ()101 (3 . 200EClECleIKIKF)! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(! 1)3 . 2(1 (1 320 EClEClEClIKF! 3)3 . 2(! 2)3 . 2(3 . 2320EClEClEClIKKCEClIKFECl03 . 2,05. 0时当KCF ( (荧光定量分析法的依据荧光定量分析法的依据) )结论：结论：荧光强度和溶液浓度呈线性关系，只限荧光强度和溶液浓度呈线性关系，只限于极稀的溶液于极稀的溶液)。对于较浓溶液，会产。对于较浓溶液，会产生自熄灭现象。生自熄灭现

24、象。二、定量分析方法二、定量分析方法 优点优点 1.灵敏度高灵敏度高 比紫外比紫外-可见分光光度法高可见分光光度法高24个数量级；个数量级； 检测下限：检测下限：0.10.001 g/mL 2.选择性强选择性强 既可依据发射光谱特征，又可根据激发光谱特征；既可依据发射光谱特征，又可根据激发光谱特征； 3.试样量少和方法简单试样量少和方法简单 缺点缺点应用范围小应用范围小1.1.校正曲线法校正曲线法步骤：步骤：1.1.配制不同浓度的标准配制不同浓度的标准溶液溶液2.2.做做F FC C关系曲线关系曲线3.3.求得浓度求得浓度注意：固定仪器和测定条件；注意：固定仪器和测定条件； 试样浓度在线性范围

25、内试样浓度在线性范围内2.2.比例法比例法XSXSCCFFFF 00注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内步骤：步骤：1.1.配制标准溶液和试样溶液配制标准溶液和试样溶液2.2.测测F F3.3.求浓度求浓度3.3.联立方程式法联立方程式法两组分的荧光峰相互不干扰两组分的荧光峰相互不干扰, ,可直接测定可直接测定 分别在各自的分别在各自的l l荧荧波长处测定波长处测定, ,求出它们的含量求出它们的含量两组分的荧光峰相互干扰两组分的荧光峰相互干扰, ,但激发光谱有显著区但激发光谱有显著区 别别, ,在某一激发光下一个组分产生荧光峰在某一激发光下一个组

26、分产生荧光峰, ,另一组分另一组分不产生荧光不产生荧光; ;选用不同的激发光进行测定选用不同的激发光进行测定如如果果两两组组分分的的荧荧光光光光谱谱和和激激发发光光谱谱相相互互干干扰扰利利用用荧荧光光强强度度的的加加和和性性（F F= =F F1 1+ +F F2 2+ +F F3 3+ + ），），在在适适宜宜的的荧荧光光波波长长处处测测定，定，用用联联立立方方程程来来求求解解第三节第三节 荧光分光光度计和其他荧光分析技术荧光分光光度计和其他荧光分析技术用于测量荧光强度的仪器有：用于测量荧光强度的仪器有：1.1.滤光片荧光计滤光片荧光计2.2.滤光片单色器荧光计滤光片单色器荧光计3.3.荧光

27、分光光度计荧光分光光度计一、荧光分光光度计一、荧光分光光度计1.1.荧光分光光度计的主要部件：荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色光源、激发单色器、发射单色器、样品池、检测系统器、发射单色器、样品池、检测系统光源光源激发单色器激发单色器样品池样品池发射单色器发射单色器检测器检测器放大器放大器指示器指示器记录器记录器SK-2003A型荧光光谱仪型荧光光谱仪(国内首创）国内首创）RF-5400荧光光度计荧光光度计Hitachi(日立日立)F-2500荧光分光光度荧光分光光度荧光分光光度计澳大利亚荧光分光光度计澳大利亚2.2.仪器的校正仪器的校正灵敏度的校正灵敏度的校正 在选定波长及狭缝宽度的条

28、件下，用一种稳在选定波长及狭缝宽度的条件下，用一种稳定的荧光物质，配成浓度一致的对照品对仪器定的荧光物质，配成浓度一致的对照品对仪器进行校正，使每次测得的荧光强度调节到相同进行校正，使每次测得的荧光强度调节到相同数值（数值（5050或或100100）。）。 波长校正波长校正 汞灯的标准谱线对单色器波长刻度校正。汞灯的标准谱线对单色器波长刻度校正。激发光谱和荧光光谱的校正激发光谱和荧光光谱的校正1.单光束荧光光度计，可用仪器上附有的校正单光束荧光光度计，可用仪器上附有的校正装置将每一波长的光源强度调整到一致，然后装置将每一波长的光源强度调整到一致，然后以表观光谱上每一波长的强度除以检测器对每以表

29、观光谱上每一波长的强度除以检测器对每一波长的感应强度进行校正。一波长的感应强度进行校正。2.双光束荧光光度计，可用参比光束抵消光学双光束荧光光度计，可用参比光束抵消光学误差。误差。二、其他荧光分析技术简介二、其他荧光分析技术简介1.激光荧光分析激光荧光分析特点：激光作光源，一个单色器，用于分析超特点：激光作光源，一个单色器，用于分析超低浓度物质。低浓度物质。2.时间分辨荧光分析时间分辨荧光分析特点：利用不同物质的荧光寿命不同，在激发和检特点：利用不同物质的荧光寿命不同，在激发和检测之间延缓的时间不同，实现分别检测的目的。测之间延缓的时间不同，实现分别检测的目的。3.同步荧光分析同步荧光分析特点

30、特点:选择适宜的选择适宜的, ,同时扫描激发波长和发射同时扫描激发波长和发射波长，得到同步荧光光谱；减少光谱重叠，提高波长，得到同步荧光光谱；减少光谱重叠，提高分辨率；用于定量分析。分辨率；用于定量分析。4.4.胶束增敏荧光分析胶束增敏荧光分析特点：采用化学方法提高荧光效率；胶束溶特点：采用化学方法提高荧光效率；胶束溶液对荧光物质有增溶、增敏和增稳的作用。液对荧光物质有增溶、增敏和增稳的作用。无机物的荧光分析无机物的荧光分析很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成有荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定量分析。有荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定

31、量分析。常用的试剂：常用的试剂：1. 8羟基喹啉及其衍生物：羟基喹啉及其衍生物：用于用于Al、Ga、In、Sc、La、Mg、Zn、Cd等元素的荧光测定。等元素的荧光测定。2.2.黄酮类试剂：黄酮类试剂：桑色素、黄烷醇、槲皮素桑色素、黄烷醇、槲皮素用于用于、族元素的荧光测定族元素的荧光测定3.3.二氨基化合物：二氨基化合物：用于测定用于测定SeAl的测定方法：的测定方法：将大约将大约40 mL不含硝酸根的弱酸性试液，加入不含硝酸根的弱酸性试液，加入10mL 8羟基喹啉溶液振荡羟基喹啉溶液振荡2min，加入氨水调节，加入氨水调节到到pH811，再用力振荡，再用力振荡30s，水相以每次，水相以每次4

32、mL氯氯仿洗涤二次。合并萃取液并以氯仿稀释至仿洗涤二次。合并萃取液并以氯仿稀释至20mL, ,再加入再加入Na2SO4。然后在荧光分光光度计上测定，。然后在荧光分光光度计上测定，激发波长激发波长365nm、发射波长、发射波长560nm。有机物的荧光分析有机物的荧光分析芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照射下大多数能产生荧光，某些弱荧光物质可与荧光射下大多数能产生荧光，某些弱荧光物质可与荧光剂作用生成强荧光物质。剂作用生成强荧光物质。1.1.油脂苯并（油脂苯并（a a）芘测定：）芘测定：油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定，油样经提取、浓缩、纯化后

33、进行荧光测定，l lex 386nm、l lem406nm。2.2.尿中尿中N N1 1甲基尼克酰胺的测定：甲基尼克酰胺的测定：尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的衍生物，在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色衍生物，在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色荧光的物质荧光的物质, ,l lex 355nm、l lem430nm 。 3.1-2-3.1-2-甲氨基甲氨基5 5氯化磺酰萘氯化磺酰萘(Dansyl-Cl ,DNS-ce 丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：DNS-Cl是一种荧光试剂，是一种荧光试剂，DNS-C1能与

34、所有的氨能与所有的氨基酸生成具荧光的衍生物，在碱性条件下与氨基基酸生成具荧光的衍生物，在碱性条件下与氨基酸酸( (肽或蛋白质肽或蛋白质) )的氨基结合成带有荧光的的氨基结合成带有荧光的DNS- -氨基酸氨基酸( (DNS- -肽或肽或DNS- -蛋白质蛋白质) ) ，DNS- -氨基酸氨基酸在紫外光照射下呈现黄色荧光在紫外光照射下呈现黄色荧光 。核酸分子荧光探针核酸分子荧光探针遗传物质的脱氧核糖酸遗传物质的脱氧核糖酸 (DNA), 自身的荧光效率很低，自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到一般条件下几乎检测不到DNA的荧光，因此，常选用的荧光，因此，常选用某些某些荧光分子作为探针荧光分子作

35、为探针，通过探针标记分子的荧光变，通过探针标记分子的荧光变化来研究化来研究 DNA 与小分子及药物的作用机理，从而探与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前, ,典典型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光染料荧光染料作为标作为标记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染生的污染, ,价格昂贵及难保存等的不足。价格昂贵及难保存等的不足。DNA序列分析中的荧光染料：序列分析中的荧光染料：在电泳分离荧光法在电泳分离荧光法检测检测DNA序列分析中，通常分四组（序列分析中，通常分四组（A,C,G,T体体系）进行，如果用四种不同的荧光染料为探针系）进行，如果用四种不同的荧光染料为探针, ,标标记一个共同的引物，分别用在记