常用试剂的配制

1、应阿至囱财反常用溶液的配制 信息来源：生物谷更新时间：2004-12-211:33:00 一、常规溶液 （一）1/15mol/LPBS（磷酸缓冲液 PhosphateBufferSolution,PBS） 甲液：1/15mol/LNa2HPO4溶液 Na2HPO49.465g 蒸储水加至 1000ml 乙液：l/15mol/LKH2P。4溶液 KH2P049.07g 蒸储水加至 1000m1 分装在棕色瓶内，于 4c 冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例 混合， 即可得所需 pH 的缓冲液 ，见卜表： PH 甲液ml 乙液 mI pH 甲液 ml 乙液 mI 5.29 2.5 97.5 6.

2、81 50.0 50.0 5.59 5.0 95.0 6.98 60.0 40.0 5.91 10.0 90.0 7.17 70.0 30.0 6.24 20.0 80.0 7.38 80.0 20.0 6.47 30.0 70.0 7.73 90.0 10.0 6.640.0 60.0 8.04 95.0 5.0 （二）0.3%台盼兰染液 称取台盼兰（Trypanblue）粉 0.3 克，溶于 100ml生理盐水中，加热 使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。 （三）0.5%酚红指示剂 酚红 0.5g 双蒸水 85ml 将 0.5 克酚红置研钵中，缓漫滴加 0.1NNaOH 溶液边

3、加边磨，并不 断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入 85ml双蒸水，颜 色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 （四）5.6%NaHCO3溶液 称 NaHCO35.6 克，溶于 100ml蒸储水中，室温保存即可（如需要也 可 10 磅 15 分钟高压灭菌，4c 冰箱保存） （五）10w父 ml秋水仙素 秋水仙素 lOmg 生理盐水 100ml 装入茶色瓶中，为贮备液，4c 冰箱中保存。甩时取贮备液 1ml加生 理盐水 9ml即可。 （六）0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液 将 0.4%KCl和 0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。 （七）2%柠檬酸钠 称取柠檬酸钠 2 克

4、，加 100ml双蒸水即可，室温保存。 （八）0.2%次甲基兰染液 称次甲基兰（Methyleneblue）0.2 克，加蒸储水 100ml,室温保存。 （九）0.5%醋酸洋红（AceioCarmine）染液 洋红 lg 醋酸 90ml 将 90ml醋酸加入 110ml蒸储水煮沸，然后将火焰移去，立即加入 1 克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。 （十）1%甲苯胺兰（Toluidineblue） 称取甲苯胺兰 1 克，加蒸储水 lOOml。 （H一）1/3000 中性红染液

5、 取中性红（Neutralred）0.1 克,加蒸储水 300ml。室温保存。 （十二）Giemsa 染液 1 .贮备液 Giemsa 粉 1g 纯甘油 66ml 甲醇 66ml 先将 Giemsa 粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入 56c 温箱中 2 小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。 2.工作液 临用时将贮备液与 pH6.8 的磷酸缓冲液按照 1:20 混合。 （十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液 苏木精 1.0g 乙醇 50ml 甘油 50ml 硫酸铝钾 5g 蒸储水 50ml 将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，

6、以加速其溶解。 当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸 铝钾需研磨并加热， 然后溶解于蒸储水中， 将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需 4 周左右，成熟的染液为深红色。 二、细胞化学和细胞组分分离溶液 （一）M 一缓冲液 眯口坐（Imidazole）3.404g KCI3.7g MgCl26H2O101.65mg ECTA380.35mg EDTA29.224mg 航基乙醇 0.07ml 甘油 297ml 蒸储水加至 1000ml 用 lNHCl调 pH 至 7.2 室温保存。 （二）2%Trito

7、nX100 溶液 量取 2mlTritonX 一 100（聚乙二醇辛基苯基醍）液，加 M 缓冲液 98ml 即可。 （三）0.2%考马斯亮兰 R-250 染液 甲醇 46.5ml 醋酸 7.0ml 考马斯亮兰 0.2g 蒸储水加至 100ml （四）A.0.1%碱性固绿染液（pH8.08.5） 1. 0.1%固绿水溶液 固绿（Fastgreen）0.1g 蒸储水 100ml 2. 0.05%Na2c03溶液 Na2c0350mg 蒸储水 100ml 用时按 1:1 体积混合即可。 B.0.1%酸性固绿染液（pH2.2） 1. 0.1%固绿水溶液。 2. mol/LX75 盐酸液 盐酸（比重 1

8、.19）0.109ml加蒸储水至 100ml 用时按 l:1 混合。 （五）甲基绿一哌咯宁染液 1.1mol/L 醋酸缓冲液（pH4.8）: （1）醋酸 17ml 13.5g 蒸储水加至 lOOml 用时分别取两液 40ml、60ml混匀即可。 2.甲基绿一哌咯宁(methylgreen-Pyrcnln) 5%哌咯宁水溶?取6ml 2%甲基绿水溶液 6ml 蒸储水 16ml lmol/L 醋酸缓冲液 16ml lmol/L 醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。 (六)Schiff 试剂 将碱性品红 0.5 克加入 lOOml沸水，持续煮沸 5 分钟，并随时搅拌，待冷却到 50c 时过滤到棕色瓶中，

9、力口 1NHC11O 毫升，冷却至 25c 时力口入 1 克 NaHSO3,此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加 0.25 克活性炭剧烈振荡 1 分钟。过滤后即得 Schiff 试齐 ij 避光低温保存。 (七)联苯胺混合液 联苯胺(4.4Diaminobenzidine)0.2g 95%乙醇 lOOml 3%过氧化氢 2 滴 此液临用时配制。 (八)l%番红水溶液 (2)醋酸水 番红(Safranin)1.0g（九）1%SDS（十二烷基硫酸钠 Sodiumdodecylsulfate,SDS） SDS10g 45%乙醇 100ml （十）1mol/LTris（三羟甲基氨基甲烷/

10、盐酸缓冲液 Trihydroxy methylaminomethaneTris/HCL）pH7.8 Tris12.114g 蒸储水 lOOml 先将 Tris 溶于少量蒸储水，用 HCI 调 pH 至 7.8,然后加水至 100ml （十一）RingerSolution 氯化钠（冷血动物用 0.65 克）0.9 克 氯化钾 0.042 克 氯化钙 0.025 克 蒸储水 100ml （十二）淀粉肉汤培养基 蛋白 2g 淀粉 6g 牛肉汤 100ml 用 10%NaHCO3调 pH 至 7.07.2 （十三）0.25mol/L 蔗糖一 0.003mol/L 氯化钙溶液 蔗糖 85.5g（十四）1

11、%詹纳斯绿 B 染液 取詹纳斯绿（JanusgreenB）1.0gRinge 氏?夜 100ml （十五）1%刚果红染液 刚果红 1g 蒸储水 100ml （十六）Gomori 硝酸铅作用液 0.05mol/L 醋酸缓冲液（pH5）lOOml 0.6 醋酸加蒸储水 200ml、取其 42ml 醋酸钠 1.36g 加蒸储水 200ml,取其 158ml 共 200ml B-甘油磷酸钠 2g 醋酸铅 2g 5%氯化镁 5ml 以上作用液在临用时配制，最终在 pH55.2,过滤使用。 （王世藩汇编） 三、细胞培养和细胞融合溶液 （一）0.01mol/LPBS（磷酸盐缓冲液 PhosphateBuff

12、erSaline PBS）pH7.2。 0.2mol/L 磷酸氢二钠液（甲液）： NaH2P0412H2O35.814g 双蒸水加至 500ml 0.2mol/L 磷酸二氢钠液（乙液）:NaH2P0412H2O15.601g 双蒸水加至 500ml 取甲液 36ml,乙液 14ml 和 NaCl8.2 克，加双蒸水至 1000ml。混 匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于 4C 冰箱备用。 （二）50%PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycolmwl500） 称取 0.5 克 PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量 37c 予热的 MEM 培养液，混匀，保温在 37c

13、水浴中待用。 （三）MEM 培养液（含 10%小牛血清） MEM 培养液（日本制药株式会社）9.4g 双蒸水 1000ml NaHCO31.5g 谷氨酰胺（L-glutamin）0.292g 56c 灭活 30 分钟的小牛血清 110ml MEM 粉末加水溶解后，用 NaHCO3调 pH 到 7.1（因在抽滤过程中 pH 升高 0.20.3）,然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解 后，立即用 G6抽滤除菌，分装，置 4c 冰箱保存备用。 （四）0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA 混合消化液 胰蛋白酶（Trypsin）粉 0.25g EDTA 粉 20.0mg 0.01mol/LPB

14、S 100ml 先用少量 PBS 溶解胰蛋白酶，然后将 EDTA 粉末和剩下的液体加 入混合，置 37c 水浴中 1 小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止）,用G5抽滤，分装置 4c 冰箱中保存 （五）Hanks 液 1.原液甲 NaCl160g KCl8g MgSO47H2O2g MgCI26H2O2g 溶于 800ml储水中。 CaCl2（无水）2.8g 溶于 100ml蒸储水中 将两种液体混合后，加水至 1000ml用滤纸滤过，再加 2ml氯仿防 腐，置 4c 冰箱备用。 原液乙 Na2HPO412H2O3.04g KH2PO41.2g 葡萄糖 20.0g 水至 1000ml,最后加入

15、2ml氯仿防腐，置 4c 冰箱备用 2.使用液 甲乙两液各 1 份，双蒸水 18 份，混匀分装包扎好瓶口，经 10 磅 15 分钟高压灭菌后置 4c 冰箱中保存。使用时用 5.6%NaHCO3调 pH 溶于 800ml蒸储水中, 用滤纸过滤，然后加 0.5%酚红 80ml,再加 值到所需要求。 （六）1640 培养液（含 10%小牛血清） RPMI-1640 粉 10.39g 双蒸水加至 1000ml 通入适量的 C02气体，边通入 CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全 溶解。用 NaHCO31.5 克调 pH 值至（J7.2。 双抗 1 万 u/ml10ml 灭活小牛血清 110ml 混匀上

16、述液体，立即用 G6抽滤除菌分装，置 4c 冰箱备用。 （七）青、链霉素溶液 青霉素钠盐（40 万u/瓶）5 瓶 链霉素（100 万u/瓶）2 瓶 将两者溶于 200ml0.9%的无菌生理盐水，分装小瓶，-30C 保存。双抗在培养基中的终浓度为各 lOOu 为宜。 （八）二甲基亚碉诱导 HL-60 细胞分化使用的终浓度为 1。4%。 （九）BrdU 溶液（200ug/m1） 用无菌青霉素瓶，在室温下称取 1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生 理盐水 9.0ml,溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。 最好用时现配。 （十）2）SSC 溶液 用分析天平称取氯化钠 17.53 克，柠檬酸钠

17、8.82 克溶于蒸储水中，加 蒸储水至 1000 毫升。 （十一）3%琼脂： 取琼脂粉 3 克，加入双蒸水到 100 毫升，搅匀，高压消毒后（15 磅 20 分钟），冷藏备用，使用前重新加热煮沸（贮存时间不宜过长）。 四、制备电镜标本的溶液 （一）2.5%戊二醛溶液 25%戊二醛 lOml 0.1mol/L 二甲碎酸钠缓冲液 装入茶色瓶中，保存于 4c 冰箱备用。 （二）0.1mol/L 二甲碎酸钠缓冲液 二甲碑酸钠 10.70g 蒸储水 500ml 将二甲碑酸钠置于 500ml容量瓶中，先加水约 400ml,震荡使其溶 解，用 HCl 调 pH 到 7.4,加入剩余蒸储水，4c 冰箱保存。

18、（三）包埋剂 环氧树脂 Epon81256.30g DDSA（十二烷基琥珀酸酊 Dodecenylsuccinic anhydride,DDSA）14.60g MNA（甲基内次甲基邻苯二甲酸酊 MethylNadic） 混合上述三种包埋剂成分，搅拌 30 分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6 一三（二甲氨基甲基）苯酚（2,4,6-tridimethyl aminomethylphenol,DMP-30） 1.5ml,继续搅拌 30 分钟， 置于干燥罐中 （室温）备用。 （四）2%单宁酸 单宁酸 2g 双蒸水 100ml 溶解后过滤装茶色瓶中，4c 冰箱保存。 （五）高镒酸钾固定剂 柠檬酸三钠 60mmol/L 氯化钾 25mmol/L 氯化镁 35mmol/L 高镒酸钾 125mmol/L pH 为 7.4-7.8,装茶色瓶中，4c 冰箱中保存，有效期 2 个月左右。 （六）1%OsO4溶液 OsO40.5g 0.1mol/L 二甲碑酸钠缓冲液。50ml OsO4一般为 0.5 或 1 克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡 412 小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸储水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在