陇东黄土高原农田土壤微生物量碳和颗粒有机碳剖面分布特征.docx

1、2014年2月ACTAACADEMIAEMEDICINAEQINGDAOUNIVERSITATISFebruary2014doi：10.13361/j.qdyxy201401001Ghrelin对大鼠胃排空和小肠传输功能的影响陈忠梅侦，徐珞I(1青岛大学医学院病理生理学教研室，山东青岛266021；2泰山市中心医院新生儿病房)摘要目的探讨Ghrelin对大鼠胃排空及小肠传输功能的作用。方法制备术后肠动力障碍大鼠模型，观察并比较99mTc-甲基纤维素灌胃后静脉注射Ghrelin.降钙素基因相关肽(CGRP)对胃排空和小肠传输功能的影响。结果99mTc-甲基纤维素灌胃后静脉注射Ghrelin(20

2、昭/kg),1560min胃内99mTc-甲基纤维素的残留量明显减少(F=248.13,q=5.152L60,PV0.01),且呈显著剂量依赖关系(q=3.159.64,PV0.05)。十二指肠给予99mTc-甲基纤维素，静脉注射Ghrelin15min后，大鼠回肠上1/3内99mTc-甲基纤维素的残留量明显下降(F=16.41,g=10.56,PV0.01),但回肠中1/3内99mTc-甲基纤维素的残留量却明显上升(q=11.44,PV0.01)。大鼠肠梗阻术后的胃内99mTc-甲基纤维素残留量明显高于假手术对照组，即胃排空率显著降低(z=2.78,PV0.05)。静脉注射Ghrelin(4

3、50Mg/kg)15min后，肠梗阻大鼠胃内99raTc-甲基纤维素的残留量较对照组显著减少，且呈显著量效依赖关系(。=3.046.22,PV0.05)。静脉注射CGRP50昭/kg,可明显改善梗阻后胃内99mTc-甲基纤维素的残留量(t=2.31,PV0.05),但该效应明显低于20昭/kgGhrelin对胃排空作用h=5.07,PV0.01)。结论Ghrelin可促进大鼠胃肠排空，改善术后肠梗阻的症状。关键词Ghrelin;胃排空；胃肠活动；大鼠，Wistar中图分类号R338文献标志码A文章编号1672-4488(2014)01000104THEEFFECTOFGHRELINONGAST

4、RICEMPTYINGANDINTESTINALTRANSITINRATSCHENZhongmei,XULuo(DepartmentofPathophysiology,QingdaoUniversityMedicalCollege,Qingdao266021；China)LABSTRACTObjectiveTostudytheeffectsofGhrelinongastricemptyingandsmallintestinaltransitinrats.MethodsAratmodelofpostoperativegastrointestinaldisfunctionwascreated.Th

5、eeffectsofintravenousinjectionofGhrelinorcalcitoningenerelatedpeptide(GCRP),afterintragastricadministrationof99mTc-methylcelluloseongastricemptyingandintestinaltransmissionwereobserved.ResultsAfterintragastricadministrationof99mTc-methylcellulosefollowedbyintravenousGhrelin(20ptg/kg)1560minlaterther

6、esidual99mTc-methylcellulosewassignificantlyreduced(F=248.13,q=5.1521.60,PV0.01),showingadose-dependentmanner(q=3.159.64,PV0.05).99mTc-methylcellulosewasadministratedintothesmallintes*tine,andfollowedbyintravenousinjectionofGhrelin,15minlater,theresidual99mTc-methylcelluloseinileum1wasnotablydecline

7、d(F=16.41,q=10.56,PV0.01),whereastheresidualofthatintheileum2wasmarkedlyincreased(q=11.44,PV0.01).Theresidual99mTc-methylcelluloseinthestomachaftersurgeryofintestinalobstructionwasmuchmorethanthatintheshamoperationgroup(=2.78,PV0.05).After15minofintravenousadministrationofghrlein(450pg/kg),theresidu

8、al99rnTc-methylcelluloseinthestomachwasmarkedlydecreased,appearingasdose-effectdependencies(Z=3046.22,PV0.05).IntravenousinjectionofCGRP(50ptg/kg)couldmarkedlyreduceresidual99mTc-methylcelluloseinthestomachofratsaftersurgeryforintestinalobstruction(z=2.31,PV0.05)butitseffectwasweakerthanthatof20/ig/

9、kgofGhrelin(=5.07,PV0.01).ConclusionGhrelincanmotivategastricemptyinginratsandimprovetheirsymptomsofpost-operativeileus.KEYWORDS_Ghrelin；gastricemptying;gastrointestinalmotility；rats,Wistar近年来在小鼠、大鼠、狗以及人类的胃内发现了一种新肽，这种肽由胃黏膜内分泌细胞分泌。因这种肽可与垂体生长激素促分泌素受体交互作用,且可直接作用垂体释放生长激素口公，故称之为Gh-收稿日期2013-07-05|修订日期2013

10、-10-09基金项目国家自然科学基金资助项目(No.30470642,No.30670780,No.31071014,No.8U00260,No.81270460,No.8130028)；山东省科技攻关项目(NO.2008GG10002006)；山东省卫生厅资助项目No.2OO7HZO26)和青岛市科技局资助项目(No.l1-2-33-(2)-nsh,No.13-1-4-170-jch)作者简介陈忠梅(1977-),女，在职硕士研究生。通讯作者徐珞(1954-),女，博士，教授，博士生导师。relino现已知,Ghrelin具有刺激食欲、刺激胃酸分泌、促进体质量增加作用。研究显示,Ghre-l

11、in也可以刺激氨基甲酸乙酯麻醉大鼠胃的收缩“I,并可加速小鼠胃排空和小肠或结肠转运功能。本研究旨在探讨Ghrelin对大鼠术后肠动力障碍的调控作用。现将结果报告如下。1材料和方法1.1动物来源健康成年Wistar大鼠88只，雌雄兼备，体质量200-250g,由青岛市药物检验所提供。置于室温（25士2）C,12-12h昼夜循环光照条件下饲养，自由摄食、饮水。实验开始前禁食18h。1.2 实验试剂Ghrelin.胃动素、红霉素、降钙素基因相关肽（CGRP）均购自美国Sigma公司,99mTc购自加拿大Amersham公司。1.3 实验方法1.3.1胃排空实验将60只Wistar大鼠随机分为生理盐水

12、（NS）对照组（30只）和Ghrelin组（30只）。采用含有46.26mmol甲基纤维素和放射性计数为100000min199mTc蒸俺水1.5mL给清醒大鼠灌胃，各组大鼠分别在0、15、30、45、60min断头处死，每次6只。开腹并结扎胃贲门和幽门，取胃放于试管中，在计数器上进行放射性计数。另选Wistar大鼠28只，将其随机分为NS对照组（7只）和1、5、20昭/kg体质量Ghrelin组（每组7只）。分别使用1.5mL的含有46.26mmol甲基纤维素和放射性计数为100000min-1的少Tc溶液灌胃后，经颈静脉导管分别注射0.1mLGhrelin（K5和20g/kgGhrelin

13、溶于NS中）或0.1mL的NS,观察大鼠胃内甲基纤维素残留量。1.3.2 小肠和结肠传输实验大鼠腹腔注射0.6mol/L水合氯醛3mL/kg麻醉，开腹，将一小硅橡胶管插入十二指肠（幽门后1cm）或盲肠（回肠前1cm）,胶固定导管，导管经背部皮下引出，缝合腹部，同时将动物置于单独的笼内。硅橡胶管安置24h后，乙醍麻醉大鼠，行右颈静脉插管。2h后，经十二指肠或盲肠的硅橡胶管注射0.5mL的含有46.26mmol甲基纤维素和放射性计数100000min1的mTc溶液。经颈静脉导管给予0.1mLGhrelin（20/ig/kg）,以同等量的NS为对照组。实验结束后大鼠断头处死，开腹，胃和小肠分别用丝线

14、结扎分成胃、十二指肠、回肠1（上1/3）、回肠2（中1/3）、回肠3（下1/3）、盲肠、结肠1（近端1/2）、结肠2（远端1/2）等多段。分别将上述胃或各肠段置于试管中，并通过计数器进行放射性计数。观察给药后15min内粪便排出量，评估结肠运输功能。并同时观察给药后15min期间的粪便排泄情况。1.3.3 肠梗阻模型制备和分组选取7只大鼠为假手术组。另选取56只大鼠乙醍麻醉后开腹，将盲肠轻轻取出，放于浸有生理盐水的纱布间，用手轻轻拍打1min,将盲肠放同腹腔，缝合腹部创口。随机分为NS对照组（7只，0.1mL）、不同剂量的Ghrelin组（共28只，每组7只，4、10、20、50ptg/kgG

15、hrelin加0.1mL的NS）、胃动素组（7只，100Mg/kg胃动素加0.1mL的NS）、红霉素组（7只，200Mg/kg红霉素加0.1mL的NS）和CGRP组（7只，50昭/kgCGRP加0.1mL的NS）。5min后进行胃排空实验。以上各组分别用1.5mL的含有46.26mmol甲基纤维素的Tc灌胃后，经颈静脉导管分别给予上述药物后，观察大鼠胃内99mTc甲基纤维素残留量的改变。1.4统计学分析用PPMS1.5统计软件处理。组间比较用ANOVA及/检验，以PV0.05为差异有显著性。2结果2.1Ghrelin对正常大鼠胃排空的影响给药15min后，大鼠胃内99mTc-甲基纤维素的残留量

16、显著降低，与对照组比较，差异有显著意义（F=248.13,q=5.1521.60,PV0.01）。见表1。表1Ghrelin对正常大鼠胃内99mTc-甲基纤维素残留量的影响（X/%9Xs）与对照组比较，F=248.13,q=5.1521.6O,PVO.O5。组别n0min15min30min45min60min对照组695.11+4.2357.41士7.2330.018.7123.048.4119.124.01Ghrelin组696.22*8.713.248.343.117.632.93，给予1g/kgGhrelin的大鼠，15min后胃内99mTc-甲基纤维素的残留量

17、（42.18土11.02）%）与对照组（47.3317.12）%）比较无显著差异（P0.05）;但给予5jug/kgGhrelin的大鼠，15min后胃内99mTc-甲基纤维素的残留量（17.514.24）%）较对照组和1Mg/kgGhrelin组明显降低（F=18.23,q=6.21、7.51,PV0.01）,给予20g/kgGhrelin,15min后胃内99mTc-甲基纤维素的残留量（5.08士1.11）%）较对照组、1ptg/kgGhrelin组和5ptg/kgGhrelin组明显降低（q=3.159.64,PV0.05）。2.2Ghrelin对小肠传输功能的影响在近端十二指肠给予含有

18、放射性标记9侦丘的甲基纤维素液态饮食15min后，与对照组(46.14土17.10)%)相比，静脉注射Ghrelin后，大鼠回肠1内99mTc-甲基纤维素的残留量(14.17+5.04)%)明显下降(F=16.41,q=10.56,PV0.01),但在回肠2中，与对照组相比，静脉注射Ghrelin后99mTc-甲基纤维素的残留量(83.85士26.28)%)却明显上升(g=ll.44,PV0.01)。2.3 Ghrelin对结肠传输功能的影响在大鼠远端问肠给予含有放射性标记河氏的甲基纤维素液态饮食15min后，与对照组(93.5524.96)%)相比，静脉注射Ghrelin，盲肠中的。侦Tc-

19、甲基纤维素的残留量(86.23士17.50)%)无显著改变(F0.05)。在15min观察期间大鼠没有排便。2.4 Ghrelin对肠梗阻大鼠胃排空的影响给予大鼠盲肠经轻拍1min,再行胃内灌注含有放射性标记Tc的甲基纤维素液态饮食15min后，大鼠胃内99raTc-甲基纤维素的残留量(54.23士4.41)%)明显低于假手术组(81.55+3.02)%),差异有显著性h=2.78,PVOO5)。经颈静脉分别注射4、10、20、50fig/kgGhrelin15min后，大鼠胃内99mTc-甲基纤维素残留量分别为(67.8120.11)%、(63.12士18.32)%、(28.487.18)%

20、、(44.55士12.38)%,对照组为(80.2121.05)%,与对照组比较差异有显著意义，而且呈明显的量效依赖关系(Z=3.046.22,PV0.05)。静脉注射胃动素后，胃内99mTc-甲基纤维素的残留量(84.54+12.22)%)与对照组(80.2121.05)%)比较，无显著改变(P0.05)。静脉注射红霉素后，胃99mTc-甲基纤维素的残留量(82.3116.28)%)与对照组比较无明显改变(P0.05)。虽然静脉注射CGRP后，胃内99mTc-甲基纤维素的残留量(58.4114.02)%)明显降低(z=2.31,PV0.05),但该效应明显低于20Mg/kgGhrelin对胃

21、的排空作用h=5.07,PV0.01)o3讨论Ghrelin是一种肽，主要由胃黏膜细胞分泌，可调节生长激素分泌，促进摄食和体质量增长。本研究结果显示，Ghrelin可以显著加快正常清醒大鼠胃排空进程，也可有效改善肠梗阻的症状。Ghrelin可以加速小肠运输功能，但对结肠没有明显影响。MASUDA等山的研究结果显示，大鼠经氨基甲酸乙酯麻醉后，使用阿托品或行迷走神经切断术，均可阻断由Ghrelin诱导的胃收缩作用。ASAKA-WA等研究结果显示，经腹腔注射Ghrelin的小鼠，摄食12h后胃内食物残留量明显减少，提示Ghrelin可加速胃排空。本文结果显示，ghrellin可加速大鼠胃排空，但对麻

22、醉大鼠无显著影响。由于与胃动素前体序列具有同源性，TOMA-SETTO等8定义Ghrelin为胃动素相关肽。本实验结果显示,Ghrelin可以缓解肠梗阻的症状，但胃动素或胃动素受体拟似剂红霉素并不能缓解肠梗阻的症状,提示Ghrelin对受体的作用不同于胃动素。这些实验结果可能与构效关系研究结果相吻合，表明胃动素的生物活性依赖于其第4个氨基酸序列，而Ghrelin的生物活性则依赖于其第7个氨基酸序列胡。此外，这两种肽类N末端片段的差异性非常大，这同样说明了它们有各自不同的受体，并且受体之间不存在交叉作用。近年来,Ghrelin对术后肠梗阻的作用引起了医学界广泛关注。众所周知，腹部手术能抑制胃排空

23、并影响消化功能。腹部手术病人，术后消化功能会受到较大影响，但通过有效对症治疗会得到缓解。因此，通过缩短术后肠梗阻时间，可减少病人住院时间。但目前术后肠梗阻原因仍不清楚，当今的治疗方案也是医生根据以往经验决定，疗效不甚理想。目前也有应用促胃动力药直接刺激胃平滑肌或借助传出神经通路刺激胃排空的方法，但以上方法也不能令人满意【。近来有研究表明，传入神经功能抑制可能与术后肠梗阻的起因有关。而Ghrelin可以减少胃迷走神经传入放电。本文的研究结果显示,Ghrelin较CGRP更具有加速胃排空的作用。总之,Ghrelin是一种较强的促胃动力肽，但其在体内作用机制还有待于进一步探讨。参考文献1 KOJIM

24、AM,MOSODAH,DATEY,etal.Ghrelinisagrowth-hormone-releasingacylatedpeptidefromslomachJNature*1999402：656-660.2 WRENAM,SMALLCJ,WARDHL,etal.ThenovelhypothalamicpeptideGhrelinstimulatesfoodintakeandgrowthhormonesecretion_JJ.Endocrinology.2000,141:4325-4328.3 ASAKAWAA,INUIA,KAGAT,etal.Ghrelinisanappetite-s

25、timulatorysignalfromstomachwithstructuralresemblancetomotilinEJj.Gastroenterology20019120:337-345.4 MASUDAY,TANAKAT,INOM/lTAN,etal.Ghrelinstimulatesgastricacidsecretionandmotilityinrats_JJ.BiochemBiophysResCommun2000,276：905-908.(下转第6页)乏TrkB受体的表达，因此DHF对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用，不是通过激活TrkB受体而可能与其抗氧化作用有关。

26、DHF分子结构中具有邻位二羟基，可作为电子受体而直接清除自由基*气另外，CHEN等研究显示，在缺乏TrkB受体的海马HT-22细胞系，DHF可通过清除细胞内自由基及提高谷胱甘肽(GSH)水平而对抗谷氨酸诱导的细胞损伤。因此，DHF的神经保护作用至少存在依赖TrkB和不依赖TrkB受体两条途径。PI3K/Akt是细胞内非常重要的信号传导通路,其可参与细胞的增殖、分化、凋亡等多种功能。PI3K通过催化底物磷脂酰肌醇而使下游Akt磷酸化。激活后的Akt具有对抗细胞凋亡、促进细胞存活等多种效应。6-OHDA处理的PC12细胞，Akt磷酸化水平出现明显下调mi。本文研究结果显示，PI3K抑制剂能部分阻断

27、DHF的保护作用，提示该作用与PI3K/Akt信号通路有关。综上所述，DHF对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用，该作用可能以PI3K/Akt信号通路为中介。参考文献口THOMASB,BEALMF.ParkinsonsdiseaseJ.HumMolGenet,2007,2：R183-194._2HALLIWELLB.Oxidativestressandneurodegeneration:wherearewenowJ?JNeurochem,2006,97:1634-1658.3 吕占云，姜宏，徐华敏，等.高铁饮食致C57BL/6小鼠黑质多巴胺能神经元选择性损伤的研究口.青岛大学

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29、Neuropsychopharmacology2012,37(2)：434-444.6 周晓彬，张健.医学统计软件系统PPMS1.5的应用举例口.齐鲁医学杂志，2011,26(6):502-505.7 POUGETC,LAUTIHERF,SIMONA,etal.Flavonoids：structuralrequirementsforantiproliferativeactivityonbreastcancercellsJ.BioorgMedChemLett,2001,11(24)：3095-3097.8PANDEYKB,RIZVISI.Plantpolyphenolsasdietaryanti

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