猪去细胞主动脉瓣组织学及生物力学特点

1、猪去细胞主动脉瓣组织学及生物力学特点关键字：主动脉瓣生物力学摘要:目的观看猪主动脉瓣叶去细胞后的组织学和理化性能转变，探讨其作为以后“杂种”瓣膜支架的可能性.方式新鲜搜集的猪主动脉瓣叶经表面活性剂、核酸酶、渗透压转变作用，去除瓣叶组织的细胞成份，在光镜、电镜下观看组织学转变，测定瓣叶组织的含水量、可溶性蛋白含量、热皱缩温度、瓣叶厚度、描计了应力应变曲线.结果成功地去除猪主动脉瓣组织中的细胞成份；瓣叶去细胞后组织含水量明显增高L(p±%vs±%,PL可溶性蛋白含量明显降低3±%VS±%,P；热皱缩温度±VS±,P,瓣叶厚度士mmvs&#

2、177;mm,PI,断裂强度(646±133)g&#l2539;mm-2vs(650±105)g&#l2539;mm-2,P和断裂伸长率L(57±14)%vs(65±18)%,P均无明显不同.结论采纳表面活性剂、核酸酶结合渗透压转变的方式，能够成功地去除猪主动脉瓣组织的细胞成份，且不阻碍组织的理化性能，有可能作为纤维支架，用于构建“杂种”生物瓣膜.引言大量研究说明，异种生物瓣钙化与瓣膜中的细胞成份关系紧密.咱们将瓣膜组织中细胞成份去除，研究了其组织学转变，测定了力学强度，探讨其可否作为组织工程瓣膜的异种纤维支架，取得了初步的实验结果.1材

3、料和方式材料新鲜猪主动脉瓣与4hanks液中带回实验室，洗尽血液，轻轻擦去内皮，作为新鲜瓣(F组'n=25).去细胞瓣叶的制备1，2：瓣叶于10mL・・L-lTris缓冲液中(2()mL+PMSF100日L/片)，4下持续振荡24h;转入10mL・・L-lKCl溶液，一样作用24h;・L-lTrisCl溶液充分洗涤(20mL/片，振荡洗涤10minX6次)；转入lOOmLDNA酶、RNA酶工作液中，力口DNA酶2mL,RNA酶IOOrL,37°C水浴留宿；转入低渗Tr

4、itonX-100液中，4振荡24h,充分洗涤.为去细胞瓣(aF组n=25).方式新鲜瓣叶去细胞前后别离测定瓣叶可溶性蛋白含量、含水量、热皱缩温度、断裂强度、断裂伸长率.标本经固定后常规制作电镜、光镜标本，观看组织结构.统计学分析：结果以X±s表示，采纳t查验对所有数据进行统计学分析.2结果瓣叶去细胞后组织含水量明显增高?±%vs±%,P,可溶性蛋白含量明显降低3±%vs±%,P；热皱缩温度±vs±,P,瓣叶厚度±mmvs±mm,P,断裂强度(646±133)g&#l2539;mm-2v

5、s(650±104)g&#l2539;mm-2,P和断裂伸长率L(57±14)%vs(65±18)%,P均无明显不同.新鲜瓣(F组)瓣叶组织常规病理切片，HE染色，光镜下观看，见瓣叶表面内皮细胞绝大部份已被擦去，纤维层、松质层、室层三层结构完整，纤维细胞无自溶现象，纤维结构无损伤（Figia）.扫描电镜下，见表面无细胞成份残留，暴露出粗大的纤维，比较紊乱，深层纤维仍呈波浪状结构（Fig2a）.去细胞（肝组）瓣叶常常规切片染色，光镜下观看，见瓣叶组织中细胞成份完全消失，纤维层、松质层、室层三层结构在失去细胞后，单凭纤维网架亦可清楚辩认，纤维网之间的空白区，应

6、该是原先纤维细胞占据的位置（Figlb）;扫描电镜下见表面没有任何细胞成份残留，波浪状结构保留完好，排列规那么，连极细小的纤维都能保留（Bg2b）；透射电镜下见交织排列的胶原纤维的纵剖面和横断面，纤维横纹清楚，结构无破坏（Fig3a'3b）.3讨论咱们采纳了表面活性剂、渗透压改变结合核酸酶消化的方式'完全去除猪主动脉瓣组织中的细胞成份'取得了完整无细胞的纤维网状支架.此无细胞纤维支架与新鲜瓣叶相较在力学强度和稳固性上没有明显不同.经去细胞处置后，与新鲜瓣叶相较，组织含水量增加，可溶性蛋白含量下降，说明此去细胞进程，不但有效地去除新鲜瓣叶组织中的细胞成份，也去除大量的可溶

7、性物质.组织含水量的增加，说明瓣叶组织中疏水性的脂质也取得了去除，胶原纤维、弹力纤维组成的网架结构及附着在网状结构上的糖蛋白取得了保留，这些亲水性的物质，使水分在网状结构中聚集，从而引发含水量的明显增加1?Courtman等1报导采纳此方式去除牛心包组织中的细胞成份后，使组织厚度增加20%之多，他以为系含水量增加，组织肿胀所致.咱们采纳猪主动脉瓣组织，未发觉有厚度增加的现象，可能与猪主动脉瓣和牛心包组织结构不完全相同有关.猪主动脉瓣中含有大约55%的胶原，要紧成份为I,山型胶原，13%的弹力纤维，剩下的为富含粘多糖的基质2,而牛心包组织中胶原的含量达90%,主若是I型胶原，出型胶原含量很少，弹力纤维的含量少于1%3.猪主动脉瓣组织在复杂高压血流冲击下长成，其胶原、弹力纤维网状结构可能编织得更致密，更合理，专门是高含量的弹力纤维在猪主动脉瓣中呈蜂窝状结构，使胶原束在其网孔中穿过，有助于维持胶原纤维的形态.疏水性的弹力纤维11可能使水分不易在瓣叶组织中大量蓄积，厚度不致显著增加.热皱缩温度(shrinkagctcmpcrature,ST)一直被视为反映胶原材料交联度的良好指标，热皱缩温度高，说明交联度高，热稳固性好.新鲜瓣叶去细胞前后，ST值无明显不同，说明此细胞提取进程不阻碍瓣叶组织纤维网的结构.新鲜瓣叶去细胞前后