人类免疫缺陷病毒抗体检测ELISA-检验科免疫室作业指导书

1、【实用】检验科SOP文件人类免疫缺陷病毒抗体检测 ELISA原理在微孔条上预包被纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和II型（HIV-1HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白），采用双抗原夹心法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒抗体。样品加入包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的HIV-1HIV-2抗原，最终形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，洗涤除去未结合的游离 酶，加入显色剂后显色。标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血 2ml （可用EDT砒凝），室温

2、放置 不超过4小时，分离血清备用。标本储存：2-8 C保存不应超过48小时，-20 C不应超过3个月，-70 C长期保存，应避免反复冻融。标本运输：密封，室温运输。标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。试齐I6.1 试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：珠海丽珠试剂有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，HIV酶标记物，阳性对照血清，阴 性对照血清，浓缩洗涤液，底物 A,底物B,终止液，封口膜，密封 袋。试剂储存条件及有效期：2-8 C避光保存，有效期6个月。仪器设备仪器名称：自动酶标仪仪器厂家：Ray

3、to仪器型号：RT-2100C操作步骤平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25 C）,微孔板开封 后，余者及时以自封袋封存。配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将微孔条固定于支架，按序编号。加样：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品 50 l;空白孔不加任 何液体；阴性对照孔和阳性对照孔，每孔分别加入阴阳对照各 50 l, 标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置 37c温育30分钟。洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60 秒的浸泡时

4、间）。加酶：分别在每孔中加入酶标记物 50 l,轻拍混匀。温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置 37c温育30分钟。洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60 秒的浸泡时间）。8.10 显色：每孔加入底物 A、B各50 1,轻拍混匀，置37c暗处 20分钟。8.11 终止：每孔加终止液50 1,混匀。8.12 测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长450/630nm测定各孔 OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并 记录结果）。结果判断与分析临界值（C.O.）的计算：临界值=0.15+阴性对照平均OD值。结果判定：样品OD值S/C.O=1者为阳性

5、样品OD值S/C.O1者为阴性正常时，阴性对照OD值应=0.80,阴性对照若小于0.08以0.08计算。若阳性对照OD值超出正常范围或其孔间之差大于 30%,应重复试 验。初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认试验，确认 报告阴性者，血可以发放使用；凡确认实验阳性和可疑者，血不能发 放使用，统一送确认实验室处理。质量控制：每次测定均做双孔或以上复试；阴阳对照OD值应在要求范围内。参考范围：阴性12 .临床意义：在血清中HIV抗体的存在表明可能有人类免疫缺陷 病毒感染。13 .操作性能：灵敏度、特异性高。14 .方法局限性

6、14.1 只能用作HIV抗体检测的初筛试验。14.2 样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。15 .病危报警值的处理：初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试， 按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实 验室做确认试验；通知防保科和临床申请医生。16 .注意事项16.1 试剂的使用：整个检测工作必须符合全国艾滋病检测工作规 范中应严格防止交叉感染，操作时必须带手套，穿工作衣，严格健 全和执行消毒隔离制度。所有样品，洗弃液和各种废弃物都应按传染 物处理。16.2 HIV-/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。16.3 样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，

7、并经常校对其准确性。16.4 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗静。16.5 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。16.6 微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方 可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。16.7 用于检测的样品应保持新鲜。16.8 剩余样品及废弃物应经121摄氏度高压蒸汽灭菌30分钟，或 用5.0g/l次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。16.9 不同批号的试剂组分不可混用。16.10 本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室；使用人员必须是经过培训的指定人员。17 .当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判 读者，