生化实验_蛋白定量分析实验报告

1、蛋白定量分析实验 实验一双缩月尿法测定蛋白质含量 一.实验目的掌握双缩月尿法定量测定蛋白质含量的原理和标准曲线的绘制。二.实验原理在碱性溶液中，具有两个或两个以上肽键的化合物 （如蛋白质）可与Cu2+ 结合生成紫色化合物（双缩月尿反应），颜色深浅与蛋白质浓度成正比，故可用 比色法测定蛋白质的浓度。在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液 同时反应，并于520nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品 的蛋白质浓度。三.实验仪器及试剂容量瓶、试管、试管架、恒温水浴槽、吸量管、分光光度计、比色皿试剂：标准酪蛋白溶液10mg/ml双缩月尿试剂：溶解2.5g CuSO4 5H2O于100

2、ml水中，加热溶解，取洒石酸钠10g、碘化钾5g,溶于500ml水中，再加5mol/L NaOH溶液 300ml混合，倒入硫酸铜溶液，加水至1000ml小鼠肝脏蛋白原浆四.实验内容（1）取小试管7支，编号，按下表注入溶液试剂（ml）管号1234567标准蛋白质溶液0.10.30.50.70.9一原浆0.1生理盐水0.90.70.50.30.11.00.9双缩月尿试剂4.04.04.04.04.04.04.0(2)混匀后,于37c水浴中保温15min ,在520nm波长下比色,以第6管调零点，测得各管的吸光度值为纵坐标，蛋白质的克数为横坐标，绘成曲线。(3)按表中第七管的数据加入溶液，在37 c

3、水浴中放置15min ,测其吸光度，根据吸光度值查标准曲线即得出每100ml小鼠肝脏蛋白原浆溶液中蛋白质的克数。五.实验数据记录及结果分析管号123457吸光度0.0690.2380.3900.5280.6590.107绘制曲线如下：10.659y = 0.0741x + 0.0051 ,0.5280.50.3900.4由图可知 ， 当吸光度为 0.107 时， 相对应的蛋白质克数为 1.38 mg ， 则100ml 小鼠肝脏蛋白原浆液中蛋白质克数为 1.38 g 。实验二 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量一 实验目的掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法 ； 熟悉紫外分光光度计的使用 。二

4、 实验原理考马斯亮蓝在游离状态下呈红色当它与蛋白质结合后变为蓝色在一定白质浓度范围内,结合物在595 nm波长下有最大吸收峰,测其光的吸收量即可得结合蛋白质的量。三.实验仪器及试剂仪器：分光光度计，试管，吸量管，比色皿试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中,加入100ml 85%磷酸,用蒸储水稀释至1000 ml。标准蛋白溶液500卜g/ml50倍稀释后的小鼠肝脏蛋白原浆四.实验内容(1)取试管三支，按下表操作：试剂(ml)空白管标准管样品管生理盐水0.1-标准蛋白溶液-0.1-样品-0.1考马斯亮蓝试剂5.05.05.0(2)混匀，室温放置5min

5、 ,在波长595nm处调零，测定各管吸光度值五.实验数据记录及结果分析测得标准管与样品管的吸光度分别为0.418 , 0.222则 样品中蛋白质的含量 pg/ml=(0.222/0.418) X 500=265.6仙g/ml则 稀释前小鼠肝脏蛋白原4中蛋白质的含量为 13.3mg/ml。实验三紫外分光光度法测定蛋白质含量一.实验目的掌握紫外吸收法定量测定蛋白质含量的原理和方法；熟悉紫外分光光度计的使用。二.实验原理蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸，使蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸 收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值与其含量呈 正比关系，可用作定量测定。三.实验仪器与试

6、剂试剂：标准蛋白质溶液1mg/ml30倍稀释后的小鼠肝脏蛋白原浆仪器：紫外分光光度计，吸量管，试管，比色皿四.实验内容280nm的光吸收法(1)取试管7支，按下表操作：试剂(ml)管号1234567标准蛋白质溶液0.51.01.52.02.5-原浆1.0生理盐水3.53.02.52.01.54.03.0(2)混匀后，在石英比色皿中,用紫外分光光度计,以第6管调零，在280nm下测定各管吸光度，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线 五.实验数据记录及结果分析123457吸光度0.1490.2670.3230.4760.5700.236蛋白质浓度mg/ml绘制曲线如下：由图可知，当吸光度为0.236时，相对应的蛋白质浓度为0.243 mg/ml ,则6,5/,32 o o o o O 度