口蹄疫监测诊断作业指导书

1、ujixruj.SSbopcon好好学习天天向上中国3000万经理人首选培训网站更多免费资料下载请进：http:/好好学习社区口蹄疫监测诊断作业指导书修订日期修订单号修订内容摘要页次版次修订审核批准2011/03/30/系统文件新制定4A/0/批准：审核：编制：ujixruj.SSbopcon好好学习天天向上中国3000万经理人首选培训网站更多免费资料下载请进：http:/好好学习社区口蹄疫监测诊断作业指导书一、口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验1. 适用范围用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂

2、盒联合使用，可区分 口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。 检测猪血清应用猪口蹄疫病毒 VP1 结构 蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病 毒 VP1 结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。2. 检测试剂口蹄疫病毒 VP1 抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB 底物 A 液、TMB 底物 B 液、终止液(I.OMHZSO。)、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。3. 检测步骤3.1 使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30C以上的环境中。3.2 取出试剂盒中的样品稀释液。A1、B1 两孔作为阴性对

3、照，Cl、D1 两 孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。3.3 在稀释板的各孔中加 200 样品稀释液。在相应各孔中分别加入 10 此 对照血清或被检血清样品。用加样器重复吹吸数次。稀释每个样品时必须使用 不同的吸头。3.4 取出抗原包被板ujixruj.SSbopcon好好学习天天向上中国3000万经理人首选培训网站更多免费资料下载请进：http:/好好学习社区3.5 分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100 此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37 士 2C下孵育 60 士 5 分钟。3.6 洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作25倍稀释

4、3.7 用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔 300 吨，洗涤 6 次，拍干。3.8 酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100 倍稀释,现配现用。3.9 每孔加入 100 此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置 37i2 C下孵育 30 分钟。3.10 重复 3.7。3.11TMB 底物工作液配制：将 TMB 底物 B 液和 TMB 底物 A 液等量混合， 现配现用。3.12 每孔加入 100 此底物工作液， 加盖或封膜后， 置 37i2C下孵育 15 分钟。3.13 每孔加入 100 此终止液，并轻轻振荡混匀。3.14 在 15 分钟内，用酶联读数仪测定在 450nln 波长下的 0D

5、 值。结果判定 4.1 猪口蹄疫病毒 vPI 结构蛋白抗体检测结果判定：4.1.1 阴性对照孔平均 0D 值应续 0.15，每个阳性对照孔 0D 值应妻 0.5 , 且簇2.0。否则，试验无效。临界值=0.23x 阳性对照孔平均 0D 值。4.1.2 被检样品孔 0D 值临界值时、判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阴性。4.1.3 被检样品孔 0D 值临界值，判为阳性。4.1.4 对判定结果为阳性的样品，应用 2 个孔进行重复检测。重复检测后,ujixruj.SSbopcon好好学习天天向上中国3000万经理人首选培训网站更多免费资料下载请进：http:/好好学习社区若至少有一个孔为

6、阳性，则判为口蹄疫病毒 VPI 结构蛋白抗体阳性，若两孔均 为阴性，则判为口蹄疫病毒 VPI 结构蛋白抗体阴性。4.1.5 当猪口蹄疫病毒 vPI 结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下 列标准进行最终判定4.2 牛、羊口蹄疫病毒 VPI 结构蛋白抗体检测结果判定：4.2.1 阴性对照孔平均 0D 值应0.2， 每个阳性对照孔 0D 值应0.5， 且W2.0。否则，试验无效。临界值=0.23x 阳性对照孔平均 0D 值。4.2.2 被检样品孔 0D 值V临界值时，判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴性。4.2.3 被检样品孔 0D 值临界值，判为阳性。4.2.4 对判定结果为阳性的样品，应用 2 个孔进行重复检测。重复检测后, 若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒 VPI 结构蛋白抗体阳性，若两孔均 为阴性，则判为口蹄疫病毒 V