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文档简介

1、透射电镜送样须知1、 观察对象和检测周期：（1） 通过超薄切片方法观察细胞的细胞壁,细胞膜以及细胞器等细胞内部超微结构，分辨率1nm左右。 通常固定好的样品任选周四之前任意一个工作日的早上9点半开始制样，到下6点左右结束当天制样工作，我实验室技术人员负责后期的包埋、切片、染色的环节。从样品制备到观察需要两周的时间。（二）病毒、蛋白、细菌或者细胞器等亚细胞结构通过滴染到铜网上的方法直接进行观察，分辨率1nm左右。通常情况送检当天取得观察结果。2、 送检样品状态：（一）切片类样品 用化学固定这一常规方法制样时，初固定是保证样品结构最大程度接近初始状态的最关键的一步。初固定液的组分：与细胞环境相适应

2、的缓冲液以及醛类物质。通常样品缓冲液为0.1M，PH=7.27.4的PB缓冲液（对缓冲液有特殊要求的生物样品请酌情调配，如高盐，嗜酸，嗜碱，胚胎等富水组织等）。用此缓冲液将固定剂母液稀释到使用的浓度，其固定剂成分是终浓度为2.5%的戊二醛和2%的多聚甲醛的混合物。1） 微生物类单细胞样品的取样和固定A、 细胞量：低速离心细胞沉淀约20微升（尚未固定的细胞尽可能低速离心）。B、 固定：加入1ml体积固定液，将沉淀吹吸混匀，室温固定（保证每个细胞均被第一时间充分固定）2小时后放置4冰箱保存；特殊需求可低温固定。C、 针对对条件变化敏感的样品如厌氧菌等，可先固定后离心收集。2） 植物类样品的取样和固

3、定A、 取材：先将含目标组织在内的大块组织粗略剪裁到固定液中，快速切割下1mm3或者1*1mm2大小的目标组织块（尽可能取靠近边缘位置最先被固定液固定的样品）放入1毫升的固定液中，对切片方向有要求的样品请在取材时通过切取组织块的一个小角或者取材时通过样品块的长宽不同来作以区分 。以一个火柴为例，我们切片的方向是从火柴头切向火柴杆。B、叶片等含有气孔的组织需要真空抽气,让样品快速下沉，促进固定液的渗透。取材后放置在室温固定2小时后4冰箱保存，特殊需求的样品可低温固定。3） 动物类样品的取样和固定A、 培样细胞的固定参考微生物单细胞的固定；B、 组织的固定参考植物样品的固定，通常不需要真空抽气。C、 需要灌流固定的如脑、心脏等组织，先灌流固定后转入初固定液中固定。（2） 负染类样品 1） 细菌类样品建议平板培养；鞭毛类样品建议取对数生长期前、中、后期三个时期的固体平板各一个。需在特殊缓冲液中悬浮的样品请自带相应缓冲液。2） 颗粒状样品入病毒、蛋白等，请尽可能提纯清除杂质并注明样品浓度。需在特殊缓冲液中悬浮的样品请自带相应缓冲液。3、 送检说明1） 请尽可能提供参考文献一份，邮件方式简要介绍送检样品的情况，工作人员会在三个工作日内针对你的

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