2019精品教育51《DNA的粗提取与鉴定》活动单李百胜

1、DNA的粗提取和鉴定知识要点：1.DNA的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物细胞的哪些部位？思考2:提取生物大分子的一般思路是什么？.溶解度i、DNMmol/LNaCl溶液中溶解度最小/ii、DN*溶于溶液，而蛋白质等能够溶解/2、DNA定的原理：在的条件下,DNA遇会被染成o10.14mol/LNaCl浓度1、DNA的性质:在NaCl溶液中的溶解度对蛋白酶的耐受性对高温的耐受性对洗涤剂的耐受性DNA蛋白质DNA蛋白质的溶解性、对酶、高温和洗涤剂的耐受性DN提取的原理有些哪些？、DNA粗提取的主要步骤:1

2、、材料选择：适于作实验材的材料：选用的生物材料；如鸡（红）血，其适宜作为实验材料的原因：鸡血（红）细胞核的DNA含量丰富，材料易得；鸡血细胞极易吸水胀破。哺乳动物红细胞呢？2、主要实验步骤（以鸡血红细胞为例）；方法：将510mL鸡血细胞液加入20mL中；用玻棒同方向破碎细胞，释放DNA（核物质）搅拌5min;用34纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；收目的：破坏细胞，释放核物质L注意：搅拌不能用力过大，以防止打碎DNA分子;溶液，搅拌1min;过;DNA溶解于广方法：向滤液中加入2倍体积的mol/LNaCl:初蓄幕疝铉避滤获取:内dna仪目的：使与DNA结合的解聚，释放出高溶液NaCl溶液中i

3、注意：按同一方向搅拌广方法:沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸£留水，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA析出,%直到；可以在玻棒上收集到黏稠物（或过滤或离心收集黏:DNM稠物）L亚也；目的：降低NaCl溶液浓度达到mol/L左右，使DNA析出l注意：加入的蒸储水不能过多，使NaCl溶液浓度过低，DN«会广方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向搅拌3min,使DNA充分溶解；过滤，收集滤液；向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷冻的95%乙醇，并用玻棒按同一方向缓慢、均匀地搅拌，在玻棒上收集白色丝状物（DNA）I原理：DNA不溶于中，而蛋白质能溶于中。归纳：本实验中几

4、次过滤？过滤的目的是什么？过滤一：过滤二：过滤三：本实验中几次加入蒸储水的目的各是什么？第一次：向鸡血细胞液中加入蒸储水，目的：第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸储水，目的：拓展：1、以菜花为材料进行实验时，如何获得核物质？取材、剪碎加入洗涤剂、食盐r研磨、过滤加洗涤剂的目的:加入食盐的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。万案一r-万案一r-*万案二3、探究不同方法、洗涤剂、食盐用量对DNA粗提取量的影响（说说实验思路）三、DNA的鉴定：1、方法：取甲、乙两支试管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲试管中加入粗提取的DNA并搅拌使DNA溶解；向

5、两支试管中各加入4mL（等量）二苯胺试剂，混匀，沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两支试管的颜色（蓝色）变化。2、注意点：实验中需要对照，目的：证明四、实验结果分析与评价1、实验结果评价：是否提取到DNA观察提取的DN础色：如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定：出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。2、粗提取得到的丝状物为什么略带黄色？实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。3、影响丝状物总量的因素有哪些？实验材料种类和数量、溶解核DNA时的NaCl溶液浓度、实验方法、搅拌方法（搅拌不当可

6、能破坏DNA）五、案例：（快速阅读、理解步骤原理）以菜花为实验材料进行DNA勺粗提取【实验材料准备】将新鲜菜花和体积分数为95%的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24h【提取DNA的具体步骤】1、取材称取30g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。DNA。一般实验室提取教材中建议采用洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，使植物细胞膜破碎，释放DNA。学生可以设置对照实验，比较哪一种方法可以提取到纯度更高的局纯度的DNA都米用一种阳离子去污剂十六烷三甲基漠化俊分离缓冲液，使细胞膜破碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿一异丙醇混合液（体积比为24：1）

7、抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNA。3、过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中（有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000r/min的转速，离心25min,取上清液放入烧杯中）。在4C冰箱中放置几分钟后，再取上清液。4、沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液（玻璃棒不要直插到烧杯底部）。沉淀35min后，可见白色的DN腮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。六、训练题：1. 在DNAM提取的过程中，两次向烧杯中加入蒸储水的作用分别是A. 稀释血液；冲洗样品B.使血细胞破裂；降低氯化钠的浓度2

8、. C.使血细胞破裂；增大DNA的溶解度D.使血细胞破裂；冲洗样品下列实验中所用试剂错误的是A. 在观察植物细胞有丝分裂实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色B. 在提取叶绿体色素实验中，使用丙酮提取色素C. 在DNA的粗提取与鉴定实验中，使用氯化钠溶液析出DNA3. 在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹ID染液鉴定蛋白质NaCl的物质量为多少mol/L时，DNA勺溶解度最小4. A.0.12B.0.13C.0.14D.0.15在提取的细胞核物质的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A.溶解杂质B.溶解蛋白质C.析出DNAD.溶解DNA5.从细胞核中提取DNA所用的提取溶液是A.NaC

9、l溶液B.酒精C蒸储水D.柠檬酸钠6.提取含杂质较少的DNA所用的溶液A.NaCl溶液B.冷却90%勺酒精C.加热95%勺酒精D.冷却95%勺酒精7.DNAM二苯胺（沸水浴）时，会染成A.砖红色B.红色C.紫色D.蓝色8.可以鉴定DNA的物质是A.斐林试剂B.95%勺酒精C.甲基绿溶液D.二苯胺溶液9. 破译生物基因组DNA勺遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核DNA下列不适宜作为DNA提取的实验材料是10. A.鸡血细胞B.蛙的红细胞C.人的成熟红细胞D.菜花（多选）下表是关于DNAffi提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述.正确的是试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸储水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸储水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应11.（多选）下列关于DNAffi提取与鉴定的说法不正确的是B. A.洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNMNaCl溶液中的溶解度在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C. 常温下，DNAM二苯胺被染成蓝色D. 将滤液放在6075C的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA蛋白质对高温耐受性的不同12.如图所示是关于“DNA的粗提取和物理性状观察”实验：鸡全血，主要原