覆盆子鉴别与含量测定方法学确认方案

1、覆盆子鉴别与含量测定方法学确认方案文件审批、t姓名签名日期起草人质量部XXX年 月曰审核人质量部XXX年 月曰批准人质量部XXX年 月曰1、目的本试验对覆盆子鉴别与含量测定检验方法进行确认，为了确保检验数据的科学 性、准确 性和可靠性，制定本确认方案，以确定建立的鉴别与含量测定检验方法能够 对该产品进行准 确的检验，为我司化验室以后的覆盆子检验方法提供依据。2、范围本方案适用于我公司覆盆子鉴别与含量测定检验方法确实认。3、职责职务冈位姓名职责组长质量部部长XXX1. 确认方案及报告的审核；确保方案及报告内容符合 GM及 检测要求。2. 组织实施确认工作，确保确认工作严格按照方案实施；3. 确认

2、过程中偏差和变更的审核，组织确认过程中发生 的偏 差的调查；小组成员QC主任XXX负责确认方案及确认报告的起草，确认实施记录的审核QCXXX按照确认方案进行确认工作，填与记录，并判疋是否符 合认 可标准要求4、确认依据文件?中国药典?2021年版5、确认程序5.1先决条件确实认仪器经过校准确认所需仪器经过校准并在有效期内，确认记录见附表01 05.1.2.人员培训确认确认小组人员参加了本方案的培训，以及仪器的操作、维护和保养培训、偏差处理、变更控制等SOP勺培训，确认记录见附表02。相关SOP确实认制定仪器操作、校验、维护和保养标准程序并批准，确认记录见附表03。药品确实认确认方案确认过程中使

3、用的药品符合规定，并在有效期内。确认记录见附表0405.2鉴别方法学确认专属性：供试品溶液制备取山柰酸-3-0-芸香糖苷含量测定项下供试品溶液，即得。对照品溶液制备取椴树苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。阴性溶液制备 照供试品溶液制备方法除取样品外，同法制成阴性溶液 测定 照?薄层色谱法标准操作规程?试验，吸取上述供试品溶液与阴性溶液各5卩I,及对照品溶液2卩I,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇冰-甲酸90 :4 : 4 : 0.5 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在105C加热5分钟，在紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应

4、的位置上,显相同颜色的荧光斑点；阴性液在相应位置上不显斑点见薄层色谱图05-1 。确认记录见附表05。5.3含量测定方法学确认鞣花酸含量测定检查方法：照?高效液相色谱法标准操作规程?测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85为流动相；检测波长为254nm理论板数按鞣花酸峰计算应不低 于3000。 对照品溶液的制备取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%?醇制成每1ml含5卩g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70

5、%?醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10卩l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按枯燥品计算，含鞣花酸G4fQ 不得少于0.20%。系统适用性确认5.3.1.2.1 色谱条件咼效液相色谱仪XXXXX色谱柱Aglile nt TC-C18(2) 250*4.6mm 5um流速1.0ml/min检测波长254nm UV检测器柱温25 r进样量10A1运行时间30mi n53122溶液配制名称配制方法流动相分别量取乙腈色谱纯与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85

6、的比例混合，用0.45水系微孔滤膜滤过，超声脱气10 min,即得。必 要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。空白溶剂样品处理用70%甲醇溶液。对照品溶液取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%?醇制成每1ml含5卩g的 溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末过四号筛约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%?醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再 称定重 量，用70%?醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取 续滤液1ml， 置5ml量瓶中，用70%?醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。53123试

7、验操作待仪器稳定后，按以下进样序列注入高效液相色谱仪， 记录色谱图，以鞣花酸峰 面积计 算5针对照品溶液1的RSD按外标法以对照品溶液1的鞣花酸峰面积计算对 照品溶液2的回 收率。序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液25253124系统适用性回收率RcR21Ar21 m RICriAR1 M R2CR2100%Ar22AriCR1R1CR2按以下公式计算对照品溶液2的回收率:RCr222第一针式中：Ar1、Ar21、Ar22 :分别为对照品溶液1连续5针的平均峰面积和对照品溶液和第二针的峰面积；M R2Mr1、Mr2:分别为对照品1、2的称样量；Cr1和

8、心2:分别为对照品1、2中鞣花酸的含量；Rc.21和Rc.22：分别为对照品溶液2第1针和第2针的回收率；可接受标准5针对照品溶液1鞣花酸主峰的保存时间的 RSD匀不大于2.0% ,鞣花酸主峰面积 的 RSD匀应不大于1.0% ;对照品溶液2的回收率应在98.0%? 102.0%。理论板数按鞣 花酸 峰计算应不低于3000。注：假设系统适用性不符合标准应立即停止进样，排查原因后再重做系统适用性，系统适用性合格前方可进行如下试验。确认记录见附表06。含量测定5.3.1.3.1 操作系统适用性合格后，接看系统适用性进样序列取供试品溶液1、2,用0.45um 尼龙66 一次性针式过滤头弃去5ml后取

9、续滤液，进样，进样序列如下序号 4、5、6序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2524供试品溶液1525供试品溶液2526对照品溶液152注：在对照品溶液1运行完成后一般间隔10针以时间最短的计后，应重新插入2针对照品溶液1,作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。5.3.1.3.2 计算综合前面 5 针对照品溶液 1 和后面 2 针对照品溶液 1 计算鞣花酸峰面积的 RSD 当含量%供试品重量 1水分% 稀释倍数RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量:注：综合供试品溶液的前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面 积的RSD不符合

10、规定时，应排查原因后，再按项重新测定。53133可接受标准：按枯燥品计算，含鞣花酸C4HQ 不得少于0.20%。确认记录见附表06。山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定检查方法：照?高效液相色谱法标准操作规程?测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶 液15 : 85为流动相；检测波长为 344nm理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖 苷峰计算应 不低于3000。对照品溶液的制备取山奈酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%?醇分别制成每1ml含80卩g的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%

11、甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%?醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取 3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁 醇振 摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10卩I,注入液相色谱仪，测定，即得。本品按枯燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷QHOh 不得少于0.03%。系统适用性确认色谱条件咼效液相色谱仪XXX色谱柱Aglile nt TC-C18(2

12、) 250*4.6mm 5um流速1.0ml/min检测波长344nm UV检测器柱温25 r进样量10A1运行时间35min5.322.2溶液配制名称配制方法流动相分别量取乙腈色谱纯与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85 的比例混合，用0.45水系微孔滤膜滤过，超声脱气10 min,即得。必 要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。空白溶剂样品处理用70%甲醇溶液。对照品溶液取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加 70%?醇分别制 成每1ml含80卩g的溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末过四号筛约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精

13、密 参加70%?醇50ml,称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重 量，用70%?醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量 取续滤液25ml， 蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提 取3次，每次20ml， 弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。5.322.3试验操作待仪器稳定后，按以下进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算5针对照品溶液1的RSD按外标法以对照品溶液1的山 柰酸-3-0-

14、芸香糖苷峰面积计算对照品溶液 2的回收率。序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液252下载可编辑5.322.4 系统适用性回收率按以下公式计算对照品溶液2的回收率:RCr22RcAr21 m riCR1Ari m R2CR2100%Ar22AriM R1M R2CR1CR2式中：Ari、Ar21、Ar22 :分别为对照品溶液1连续5针的平均峰面积和对照品溶液 2第一针和第二针的峰面积；Mr1、Mr2:分别为对照品1、2的称样量；CR1和心2:分别为对照品1、2中山柰酸-3-0-芸香糖苷的含量；RC.21和RC.22：分别为对照品溶液2第1针和第2针的回收率

15、；可接受标准5针对照品溶液1山柰酸-3-0-芸香糖苷主峰的保存时间的 RSD匀不大于2.0%,山柰酸 -3-0-芸香糖苷主峰面积的RS%应不大于1.0%;对照品溶液2的回收率应在98.0%? 102.0%。理论板数按山柰酸-3-0-芸香糖苷峰计算应不低于 3000。注：假设系统适用性不符合标准应立即停止进样，排查原因后再重做系统适用性，系统适用性合格前方可进行如下试验。确认记录见附表07。含量测定5.3.2.3.1 操作系统适用性合格后，接看系统适用性进样序列取供试品溶液1、2,用0.45um 尼龙66次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下序号 4、5、6序号样品名称进样体积u

16、l进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2524供试品溶液1525供试品溶液2526对照品溶液152注：在对照品溶液1运行完成后一般间隔10针以时间最短的计后，应重新插 入2 针对照品溶液1,作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。5.323.2 计算综合前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰含量%供试品重量 1水分% 稀释倍数面积的RSD当RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量:注：综合供试品溶液的前面 5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-0- 芸香糖苷峰面积的RSD不符合规定时，应排查原因后，再按5.322项重新测人

17、定。53233可接受标准：按枯燥品计算，含山柰酸-3-0-芸香糖苷G7HO5不得少于0.03%。确认记录见附表 07。6、偏差处理在确认过程中，应严格按照确认方案进行操作和判定，出现个别指标不符合标准的结果时，针对不合格指标应展开调查分析，对于确认是因操作不当等自身原因造成，应重新进行测试。确认过程中所产生的偏差记录在附表08中。7、变更控制涉及到方案变更时，填写“变更申请表，需要对其进行原因分析，根据分析结果断定是否需要重新制定确认方案还是修改可接受标准，并将涉及到的变更情况记录 在附表09中。&附表清单编号附表名称编号附表名称01仪器校验确认记录表06鞣花酸含量测定方法确认记录表0

18、2人员培训确认记录表07山柰酸-3-0-芸香糖苷含量测定方法确认记录表03相关SOF确认记录表08偏差处理确认记录04药品确认记录09变更控制确认记录05鉴别方法确认记录表9、变更记录变更描述版本号批准日期00/新文件。附表01:仪器校验确认记录表仪器校验确认仪器名称型号检定有效期至检定证书编号符合要求电子天平XXX是否XXX是否咼效液相色谱仪XXX是否玻璃仪器校验确认玻璃仪器名称规程编号校正日期符合要求谷量瓶10ml是否25ml是否50ml是否100ml是否移液管是否是否10ml是否50ml是否疋否存在偏差或不致项：是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。否结论：所有仪器均经校验且在有效

19、期内。检查人/日期复核人/日期附表02:人员培训确认记录表培训记录覆盆子鉴别与含量测定方法学确认方案XXX电子天平标准操作与维护规程XXX型高效液相色 谱仪标准操作与维 护规 程偏差处理 标准管理 规程变更控制标准管理规程培训时间培训地点课时讲师姓名是否已接受培训是用 “ 2表示，否用“ X'表示疋否存在偏差或不致项：是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。否结论：执行本方案的人员已得到必要的培训。检查人/日期复核人/日期附表03:相关SOP确认记录表SOP名称检杳标准检查结果XXX电子天平标准操作与维护规程已批准生效是否XXX型高效液相色谱仪标准操作与维护规程已批准生效是否偏差处

20、理标准管理规程已批准生效是否变更控制标准管理规程已批准生效是否疋否存在偏差或不致项：是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。否结论：相关SOP匀已批准生效。检查人/日期复核人/日期附表04 :药品确认记录名称批号来源符合要求覆盆子留样室是否椴树苷对照品中国食品药品检定研究院是否鞣花酸对照品中国食品药品检定研究院是否山柰酸-3-O-芸香糖甘对照品中国食品药品检定研究院是否疋否存在偏差或不致项：是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。否结论：样品、对照品符合要求。检查人/日期复核人/日期附表05:鉴别方法确认记录人员工程薄层板点样方式温度湿度图谱判定标准结果符合要求专属性市售手动见05-1

21、供试品与对照品色谱相应 的位置上，显相同颜 色的 斑点；阴性液不显斑点。是否疋否存在偏差或不致项：是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：。否结论：椴树苷鉴别分析方法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表06:鞣花酸含量测定方法确认记录色谱:柱柱温检测扌器波长流动相进样量系统适用性确认工程理论板数对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸可接受标准按鞣花酸峰计算应不低于3000是否符合规定是否是否工程别离度对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸可接受标准与相邻色谱峰之间的别离度应大于1.5是否符合规定是否是否工程重复性对照品1 RSD值对照品2回收率鞣花酸可接受标准5针峰面积的相对标准偏差RSD值应不大于2.0%;对照品溶液2的回收率应在98.0% ? 102.0%是否符合规定是否是否工程保存时间空白溶剂对照品溶液供试品溶液鞣花酸可接受标准空白溶剂在相应保存时间处没有峰；供试品与对照品在相应保存时 间处出现峰。是否符合规定是否是否含量测定确认工程平均峰面积对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸含量测定结果供试品1供试品2平均值可接受标准：按枯燥品计算，含鞣花酸C14HO 不得少于0.20%。是否符合规定是否疋否存在偏差或不致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，