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文档简介

1、不知楼主是要计可培养的数量还是测菌液内菌的数量。如果计可培养的数量的话就直接涂布到琼脂培养基上，培养后计数就可以。若是要计菌液里的数量可以测一下ODfi或者用荧光燃料染色后再在显微镜下计数。作者：yushanyou12你是在药厂工杯的？恩，菌悬液的浓度要求的确是每毫升小于100cfu,但是最好在50到100cfu之间，小于50的话容易出现假阴性。还有你是要做无菌的方法验证还是无菌培养基的灵敏度检查呢？至于确定菌的量，是在硫乙醇中计数的。其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典（2005年版二部）附录XIH无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法，制备成小于100CFU/ml的对照用菌液

2、。所以无论你做什么，菌悬液的制备方法都是一样的。具体方法就是，先把生抱梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了（这个你得自己多做几次平行实验或验证实验，看到底稀释到多少倍。最初不好把握的时候可以同时培养几个临近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h,然后开始计数。生抱梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。注：如果培养时间太长会产

3、生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。一些具体的东西，还需要你实际去操作后，发现问题，再解决问题。貌似你现在的经验不是很足，最好的是找个懂的人带你做几次，或去别的公司或研究所参观学习，这样学起来会快一点。最后祝贺你成功。推荐方便的生抱梭菌计数方法附件：,一一生抱梭菌计数采用流体硫乙醇酸盐培养基（含琼脂）,称取培养基15g,再加入纯化琼脂粉0.40.5g加入500ml蒸播水后加热使溶解后分装至30*200的大试管中,50ml/管，加塞，包扎后灭菌，培养基温度保持在4550摄氏度时，将稀释好的生抱梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培养基中，轻轻摇匀后置3035摄氏度培养1620小时（不强求厌氧环境培养），立即观察点计菌数,切记培养期间不可摇动试管，生长的微生物群体在培养基中分散成小米状，注意选择菌数在3050之间的试管，便于点计.把我计数时的图附上，以便大家参考生抱梭菌计数采用流体硫乙醇酸盐培养基（含琼脂）,称取培养基15g,再加入纯化琼脂粉0.40.5g加入500ml蒸播水后加热使溶解后分装至30*200的大试管中,50ml/管，加塞，包扎后灭菌，培养基温度保持在4550摄氏度时，将稀释好的生抱梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培养基中，轻轻摇匀后置3035摄氏度培养1620小时（不强求厌氧环境培养），立即观

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