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1、第四章抗体抗体概述免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig):具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白抗体(antibody,Ab):一种免疫球蛋白(Ig),B细胞受抗原刺激增殖分化为浆细胞产生的糖蛋白,与相应抗原特异性结合,存在体液中。以分泌型(sIg)和膜型(mIg)两种形式存在。血清蛋白分为白蛋白、a1、a2、3和丫球蛋白等组分,抗体活性主要存在于丫球蛋白区。免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig):具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白;抗体是免疫球蛋白,免疫球蛋白不一定是抗体第一节抗体的结构(一)重链和轻链重链,450550个氨基酸残基,五大类IgG丫(gamma)I
2、gAa(alpha)IgM(mu)*IgD6(delta)IgEe(epsilon)轻链,轻链为重链的1/2,约由214个氨基酸k型:入型=2:1(二)可变区和恒定区1.可变区(variableregion,V区)重链和轻链近N端的约110氨基酸的序列变化很大高变区(hypervariableregion,HVR),V区内变化最为剧烈的特定部位。L链3个,H链3个,又称互补决定区(complementaritydetermingregion,CDR)骨架区(frameworkregion,FR),V区高变区之外的部位2.恒定区(constantregion,C区)近C端的其余氨基酸序列相对稳定
3、(三)绞链区位于CH1CH2之间;对蛋白酶敏感,易伸展弯曲(四)结构域结构域:H链和L链可通过链内二硫键折叠成若干个球形结构每个结构域约含110个氨基酸本节总结性一、抗体的基本结构:两条完全相同的重链(H链)和两条完全相同的轻链(L链)以键间二硫键连接而成的四肽链结构重链与轻链:1 .重链一一由450-550个氨基酸残基组成:H链的恒定区结构特异性不同,将Ig分为五大类:丫一IgG;a-IgA;iIgM;8IgD;e-IgE2 .轻链一一约由214个氨基酸残基组成:L链的结构特异性不同,将Ig分为k和入两型,比例约为2:1可变区与恒定区:1 .可变区(V区):重链和轻链近N端的约110氨基酸的
4、序列变化很大HVR)和互补决定区(CDR):V区内变化最为剧烈的,重链和轻链各3个特定部位,共6个区域一起可与抗原表位紧密互补的区域FR):V区高变区之外的部位,稳定高变区结构;2 .恒定区(C区):重链和轻链近C端的其余氨基酸序列相对稳定,不同类别的Ig的重链结构和长度有差异CH1CH2之间,易伸展弯曲110个氨基酸J链即连接链and分泌片(保护分泌型IgA(sIgA)一条多肽链;富含半胱氨酸;由浆细胞合成1由黏膜上皮细胞合成和分泌2以非共价形式结合到二聚体(sIgA)上;一起被分泌到黏膜表面黏膜免疫系统1 .参与黏膜局部免疫应答2 .产生分泌型IgA(secretoryIgA,sIgA)三
5、、抗体的水解片段(一)木瓜蛋白酶水解片段FabFc(二)胃蛋白酶水解片段1F(ab,)2(可同时结合两个抗原表位,表现为双价结合)+pFc(无生物学作用,最终被降解,不能发挥生物学效应)二、抗体的J链和分泌片:(一)J链(IgM和IgA):一条多肽链,稳定多聚体,由浆细胞合成(二)分泌片(sIgA):保护分泌型IgA,由黏膜上皮细胞合成三、抗体的水解片段:(一)用木瓜蛋白酶水解Ig:连接两条重链的键间二硫键的氨基端附近水解Fab(fragmentantigenbinding):即抗原(表位)结合片段;Fc(fragmentcrystallizable):即可结晶片段;单核细胞、巨噬细胞、粒细胞
6、、B细胞、NK细胞等细胞表面均具有的Fc段受体(FcR)(二)用胃蛋白酶水解Ig:从连接两条重链的键间二硫键的竣基端附近水解F(ab)2:可结合两个抗原(表位)pFc:无体外活性第三节抗体的功能一、特异性识别和结合抗原三、结合细胞表面Fc受体巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、NK细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞等细胞表面均具有的Fc段受体(FcR)1 .调理作用(opsonization)2 .抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)3 .介导翟超敏反应(详见第十八章)四、通过胎盘和黏膜第五节人工制备抗体一、多
7、克隆抗体(Polyclonalantibody,pAb),含多个抗原表位的抗原免疫动物,可刺激体内多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物抗血清(antiserum):机体经特定抗原免疫后含特定抗体的血清常用的免疫动物:马羊,兔子,豚鼠,小鼠,大鼠制备多克隆抗体的主要局限:特异性不强,交叉反应,纯化相对困难,无法连续生产二、单克隆抗体:由针对(或识别)单一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体高效价、高纯度、高特异性、低纯化成本等单抗多抗抗体组成单一复杂抗体性质高纯度,高特异性纯度低,特异性差纯化标记容易,效果好难度高一些种属来源绝大多数是小鼠兔子、羊、豚鼠制备周期长短制备技术复杂简单经
8、费多少第五章补体第二节补体的激活识别活化阶段:在某些激活物质的作用下酶促级联反应阶段:各补体成分按一定顺序,以连锁的级联酶促反应方式依次活化效应阶段:并表现出多种生物学活性的过程一、经典途径(一)主要激活物质:特异性抗体与抗原形成的免疫复合物(immunecomplex,IC)(二)激活过程1 .识别阶段高效抗体:IgG1、IgG2、IgG3或IgM抗体较链区的作用:抗原与抗体结合后,暴露补体结合位点2 .活化阶段3 .膜攻击阶段管状结构的多聚体,极强的亲脂性膜攻击复合物(membraneattackcomplex,MAC),导致靶细胞的溶解二、旁路途径(自学)激活物质:细菌细胞壁成分(脂多糖
9、、肽聚糖、磷壁酸)、酵母多糖、葡聚糖、聚合/凝集的IgA或IgG4等三、凝集素途径(自学)激活物质:病原体表面的特殊糖结构如甘露聚糖、岩藻糖、N-乙酰氨基半乳糖等四、补体三条激活途径的比较MBL旁路途径主要激活物质抗原与抗体Ag+IgG1、IgG2、IgG3、IgM)免疫复合物病原菌表面特殊糖结构(如甘露糖、岩藻糖、N-氨基半乳糖)等微生物等颗粒、凝集的IgA和IgG4生物学作用在适应性体液免疫的效应阶段,在感染后期起作用参与固有免疫的效应阶段,在感染早期或初次感染起作用是否依赖Ab是否否第四节补体的生物学作用一、细胞毒作用:MAC)介导靶细胞溶解,即补体依赖的细胞毒作用:溶解细菌;溶解破坏肿
10、瘤细胞;溶解宿主自身组织细胞,导致溶血或自身免疫病的发生C3b、C4b、iC3b可促吞噬细胞的吞噬作用C3b、C4b、iC3b可与IC(免疫复合物)结合,再黏附于表达CR1、CR3的红细胞、血小板上,经血液循环至肝和脾,解毒清除掉;第六章细胞因子第二节细胞因子的种类及其主要功能(中文名、英文名、代表性细胞因子、主要功能)一、白细胞介素(interleukin,IL)生物学特性列举产生细胞主要效应刺激T、B细胞的增殖分IL-2活化的T细胞化;增强NK巨噬细胞杀伤活性IL-28沽化的多种免疫细胞抗病毒作用IL-29是二、干扰素(inteferon,IFN):干扰病毒感染和抑制病毒复制的细胞因子1.
11、 I型干扰素,IFN-“、IFN-3,病毒感染是合成I型干扰素最强有力的天然诱生剂,具有抗病毒作用;2. n型干扰素,干扰素-丫,参与多种免疫调节的作用3. 出型干扰素,IL-28,IL-29三、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF),TNF-a:由活化的单核-巨噬细胞等分泌(1975)TNF-3:又名淋巴毒素(lymphotoxin,LT),主要由活化的T淋巴细胞等产生(1968)主要功能:正常:介导炎症反应和免疫应答,抗肿瘤异常(过量):恶液质(cachexia)、败血症休克所致的多器官功能衰竭、类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis,RA)、多发性
12、硬化症等四、集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF):能够选择性地刺激造血前体细胞(多能造血干细胞和其他造血祖细胞)定向增殖分化而形成相应细胞集落的细胞因子干细胞因子stemcellfactor,SCFIL-3,多能集落刺激因子一一multi-CSF红细胞生成素erythropoietin,EPO血小板生成素thrombopoietin,TPO粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子granulocyte/macrophage-colonystimulatingfactor,GM-CSF粒细胞集落刺激因子granulocyte-colonystimulatingfactor,
13、G-CSF巨噬细胞集落刺激因子macrophage-colonystimulatingfactor,M-CSF五、生长因子(growthfactor,GF),一类可促进相应细胞生长和分化的细胞因子神经生长因子nervegrowthfactor,NGF表皮生长因子epithelialgrowthfactor,EGF转化生长因子-3(正或负调节作用)transforminggrowthfactor-3,TGF-3成纤维细胞生长因子fibroblastgrowthfactor,FGF血小板源性生长因子platelet-derivedgrowthfactor,PDGF血管内皮细胞生长因子vascula
14、rendothelialcellgrowthfactor,VEGF六、趋化因子(chemokines)趋化作用:能吸引免疫细胞到免疫应答局部,参与免疫调节和免疫病理反应1 .CXC亚族2 .CC亚族3 .C亚族4 .CX3C亚族“部分细胞因子”小结细胞因子(Cytokine,CK):由多种细胞合成、分泌的具有多种功能的高活性、低分子量的蛋白质或多肽的统称,共六大类:一、白细胞介素(interleukin,IL)表一介导细胞间相互作用:IL-1,IL-2,IL-38,等(?)IL-2:促进T、B细胞的增殖分化,增强NK细胞和巨噬细胞杀伤活性;IL-28,IL-29:即出型干扰素,抗病毒。二、干扰
15、素(interferon,IFN)巨一干扰和抑制病毒复制:IFN-IFN-IFN-三、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)促进肿瘤出血坏死(体外):TNF-TNF-LT)正常:介导炎症反应和免疫应答,抗肿瘤;异常(过量):恶液质、类风湿性关节炎等多种疾病。四、集落刺激因子(colony-stimulatingfactor,CSF)表一选择性地促进造血干细胞或造血前体细胞定向增殖分化:SCF(干细胞因子),IL-3(mutli-CSF)(多能集落刺激因子),GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子),M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),G-CSF(粒细胞集落刺激因子),
16、EPO(红细胞生成素),TPO(血小板生成素),等五、生长因子(growthfactor,GF)促进相应的细胞增殖分化:NGF(神经生长因子),EGF(表皮生长因子),TGF-3(转化生长因子-3),VEGF(血管内皮生长因子),FGF(成纤维细胞生长因子),PDGF(血小板源生因子),等六、趋化因子(chemokine)具有趋化作用的细胞因子(最大的细胞因子家族):、CXC亚族(如IL-8);、CC亚族;、C亚族;、CX3c亚族细胞因子受体:细胞因子必须与相应的细胞表面的特异性受体(receptor)结合,才能发挥作用,受体均为跨膜蛋白。第七章MH为子:移植排斥反应的主要决定性因素第一节HL
17、A复合体的基因结构及遗传特点预备内容一、主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC):次要组织相容性抗原:引起慢而弱的排斥反应的移植/组织相容性抗原;主要组织相容性抗原:引起强而迅速排斥反应的移植/组织相容性抗原;主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC):编码主要组织相容抗原的基因是一组紧密连锁的基因群,位于同一条染色体上MHC分子即主要组织相容性抗原小鼠的MHC即H-2复合体位于第17号染色体短臂二、人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA):人类的MHC分子又叫人类
18、白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA),因为人的MHC分子首先在人的白细胞表面发现;编码HLA的基因也是一组紧密连锁的基因群,位于同一条染色体上,称为HLA复合体即人类MHC二、免疫功能相关基因(一)非经典HLA-I类基因,HLA-E、F、G,参与免疫调控(二)抗原加工相关基因,HLA-DO、DM、TAP等,参与蛋白质抗原的加工与提呈(三)炎症相关基因1 .肿瘤坏死因子基因家族:TNF、LTA、LTB等2 .热休克蛋白基因家族:HSP70基因等3 .血清补体成分的编码基因:C2、C4、Bf等第二节HLA分子的结构P96重点看第八章CM子与黏附分子第一节CD分子白细胞分
19、化抗原(leukocytedifferentiationantigen,LDA),指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化的不同阶段及细胞活化过程中,出现或消失的细胞表面标记分子,多属于跨膜蛋白或糖蛋白分化群(clusterofdifferentiation,CD),将来自不同实验室所鉴定识别的同一白细胞分化抗原归为同一个分化群第九章T淋巴细胞第二节T细胞表面分子及其作用一、TCR-CD3复合体1 .TCR的结构和功能2 .CD3分子的结构和功能aB三、共刺激因子1.CD28协同刺激受体配体:抗原提呈细胞(APC)表面B7-1(B7/CD80)或B7-2(CD86)作用:T细胞活化第二信号(协同刺激
20、信号),使T细胞充分活化4. CD40L(CD154)协同刺激分子表达细胞:活化的T细胞配体:APC或B细胞表面的CD40分子主要作用:与B细胞的CD40结合,促使B细胞活化,增殖5. CD2绵羊红细胞受体APC)或靶细胞的CD58结合;介导之间的黏附;促进T细胞活化其它细节自行添加第十章B淋巴细胞第二节B细胞的表面分子及其作用1.BCR(Bcellantigenreceptor)B细胞抗原受体,直接识别天然构象的抗原分子三、共刺激分子1.CD40协同刺激受体表达细胞:表达于成熟B细胞配体:T细胞的CD40L作用:B细胞活化第二信号(协同刺激信号),活化过程中最重要的辅助分子,使B细胞充分活化
21、第十一章固有免疫细胞固有免疫InnateImmunity- 与生俱来,不变(普遍性)- 早期,非特异性没有记忆性是抗感染的第一、二道防线适应性免疫AdaptiveImmunity- 后天的,可变的(个体性)- 后期,特异性具有免疫记忆性第三道防线第一节单核/巨噬细胞一、来源、分布与特征其由骨髓造血干细胞分化而来。在血液里称为单核细胞,在组织里称为巨噬细胞巨噬细胞结缔组织:组织细胞肺:肺泡巨噬细胞肝:枯否细胞脾与淋巴结:游走与固定巨噬细胞浆膜腔:胸、腹腔巨噬细胞神经组织:小胶质细胞骨:破骨细胞关节:滑膜A型细胞二、生物学功能(一)吞噬及杀伤作用(二)参与炎症反应(三)加工与提呈抗原(四)免疫调节
22、作用第二节树突状细胞巨噬细胞髓系DC树突状细胞的来源其广泛分布于全身组织器官,是体内最重要的抗原提呈细胞,能够识别、摄取的加工抗原肽并提呈给T细胞。DC不但参与固有免疫应答,还是连接固有免疫与适应性免疫的纽带,其最大特点是能够诱导初始T细胞活化,是适应性免疫应答的始动者。最强的专职抗原呈递2田胞,效率高tthemostpowerfulantigen-presentingcellinhumanbody)三、DC的生物学功能1 .参与固有免疫2 .撮取、加工和提呈抗原3 .免疫激活作用4 .免疫调节作用5 .免疫耐受的诱导与维持第三节自然杀伤细胞:一类无典型T、B细胞表面标志和特征的淋巴细胞主要生
23、物学功能:非特异性杀伤(肿瘤细胞或者病毒感染靶细胞)NK细胞不表达特异性抗原识别受体,但可表达多种表面标志,目前将CD3-、TCR-、mIg-、CD56+、CD16+淋巴样细胞认定为人NK细胞二、NK细胞的生物学功能1 .细胞毒作用2 .免疫调节作用单核-巨噬细胞:PBR,FcR,补体受体,细胞因子受体等;树突状细胞(DC)T细胞自然杀伤细胞(NKcell)T、B细胞的第三类淋巴细胞;FcR(ADCC作用);杀伤抑制受体(KIR);杀伤活化受体(KAR)第十二章固有免疫应答(重点看)(一)固有免疫应答的模式识别PRR的主要特点有限多样性:与TCR、BCR不同,非特异性识别非克隆性表达:同一类型
24、天然免疫细胞表达相同PRR介导快速生物学反应:immediatereaction几类重要的PRR细胞膜型受体(膜分子)1)甘露糖受体(mannosereceptors,MR2)清道夫受体(scavengerreceptor,SR)3) Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)分泌型受体(膜分子1)甘露糖结合凝集素(MBL)2)C反应蛋白(二)固有免疫细胞识别的分子模式病原体相关分子模式(pathogenassociatedmolecularpattern,PAMP)即PRR识别的配体,是病原体及其产物所共有的、某些高度保守的特定分子结构特性:1-为病原微生物所特有一一区分“自
25、己”“非己”;2、为其生存和致病所必需;3、是天然免疫成分泛特异性识别的分子基础2.损伤相关分子模式(damageassociatedmolecularpattern,DAMP)组织或细胞受到损伤、缺氧、应激、无菌性炎症、凋亡等因素刺激后释放到细胞间隙或血液循环中的一类物质如热休克蛋白、高迁移族B,尿酸,肝癌来源生长因子生理性效应:可通过Toll样受体、RIG-1样受体或NOD样受体等模式识别受体病理性效应:诱导自身免疫如关节炎、动脉粥样硬化、肿瘤、系统性红斑狼疮等疾病(一)固有免疫细胞的模式识别受体(PRR):模式识别受体(PRR):固有免疫细胞表面、胞内器室膜上和血清中游离的受体分子,能够
26、直接识别病原体及其代谢产物,或者宿主自身凋亡细胞和衰老损伤细胞表面的某些共有特定分子结构。PRR的特点:有限多样性;非克隆表达;介导快速生物学效应。主要包括:(1)细胞膜型PRR:甘露糖受体,清道夫受体,Toll样受体等;(2)分泌型PRR:甘露糖结合凝集素,C反应蛋白等。(二)固有免疫细胞识别的分子模式:1 .病原体相关分子模式(PAMP):即PRR识别的配体,是病原体及其产物所共有的、某些高度保守的特定分子结构。主要包括:脂多糖、肽聚糖、磷壁酸、病毒RNA等。2 .损伤相关分子模式(DAMP):组织或细胞受到损伤、缺氧、应激、无菌性炎症、凋亡等因素刺激后释放到细胞间隙或血液循环中的一类物质
27、第十四章T细胞介与的细胞免疫应答第二节T细胞的活化、增殖和分化一、T细胞活化(一)T细胞活化的第一信号来自APC提呈的pMHC,涉及pMHC与TCR-CD3的相互作用(二)T细胞活化的第二信号CD28配体:B7(B7.1/CD80)和B7.2(CD86)提供T细胞活化的协同刺激信号(第二信号)(三)细胞因子促进T细胞增殖和分化合成分泌各种细胞因子并表达细胞因子受体,各种细胞因子的作用使T细胞发生克隆性增殖,最重要的是IL-2,与自身的IL-2R结合,是所有T细胞增殖的必须条件Th细胞活化的“三信号模型”第一信号:双识别,第二信号:协同剌激,第三信号:增强信号,细胞因子、T细胞增殖与分化IL-2
28、是参与T细胞活化与增殖的最重要的细胞因子IL4,6,10,15,18等也发挥重要作用(一)CD4+T细胞的分化胞内病原体感染(如病毒、结核杆菌、利什曼原虫等)变应原、胞外病原体(大多数细菌、寄生虫等)胞内病原体感染Th1细胞免疫CD4初始胞外病原体Th2促进体液免疫T细胞受到抗原刺各种胞外病原体及真菌的感染Th17参与固有免疫,参匕某些炎症的发生激生成Th0生发中心活化的B细Tfh辅助B细胞活化、分化TGF-BTreg免疫负调节(二)CD8+T细胞的活化1. CD8+T细胞的直接活化一一Th细胞非依赖型活化2. CD8+T细胞的间接活化一一Th细胞依赖型活化(1)低表达共刺激分子的APC对CD
29、8+T细胞的活化(2)不表达共刺激分子的非专职APC对CD8+T细胞的活化T细胞对抗原的识别(第一信号):间接识别:识别MHC+抗原肽;双识别:TCR+CD3(抗原肽),CD4或CD8(MHC限制性)T细胞的活化:(一)第一信号:双识别;(二)第二信号:T细胞的CD28APC的B7(B7.1、B7.2)(三)细胞因子(APC和T细胞自身产生的)促进T细胞增殖与分化,第三信号T细胞的增殖与分化:(一)CD4+T细胞的分化Th0Th1Th0Th2Th0Th17,(二)CD8+T细胞的分化1 .直接活化:病毒感染的DC高表达共刺激分子CD282 .间接活化:APC低表达或不表达共刺?t分子,依赖于C
30、D4+Th1的辅助第三节T细胞的免疫效应一、CD4+T细胞的效应(一)Th1细胞的效应1. Th1细胞对巨噬细胞的作用Th1与M。提呈的Ag作用诱导其活化激活巨噬细胞IFN-丫、CD40L诱生巨噬细胞IL-3、GM-CSF-HSC募集巨口i细胞TNF、MCP-1(血管)促进炎症反应IL-1、11-6、血小板活化因子等炎症介质-急性炎症反应2. Th1细胞对中性粒细胞的作用促进血管内皮细胞-黏附分子或分泌趋化因子-迁移或外渗至炎症部位3. Th1细胞对淋巴细胞的作用-分泌IL-2等诱导非专职APC或某些专职的APC表达共刺激分子CTL;-分泌IL-2等促进Th1、CTL和NK细胞增殖;-分泌IF
31、N-B细胞分泌IgG调理作用增强巨噬细胞的吞噬作用(二)Th2细胞的效应辅助B细胞产生抗体诱导产生IgEI型超敏反应和寄生虫感染阻断ADCC;诱导M?产生抗炎细胞因子促进胶原蛋白合成,参与组织修复和纤维化(三)Treg细胞的效应第十五章B细胞介导的体液免疫应答第一节B细胞对TD抗原的应答一、B细胞识别和提呈抗原TCR识别,间接识别,双识别,双信号BCR识别,直接识别,单识别,双信号二、B细胞的活化、增殖、分化与成熟(一)B细胞的活化1. B细胞活化的第一信号,直接识别,单识别2. B细胞活化的第二信号3. 细胞因子的作用一一B细胞活化的第三信号第三节体液免疫应答的效应及抗体产生的一般规律一、体
32、液免疫应答的效应B细胞介导的体液免疫应答最主要的效应分子为特异性抗体。抗体与抗原特异性结合后,可通过中和作用、调理作用、激活补体、ADCC和阻止病原体侵入局部黏膜等多种机制发挥免疫效应,以清除抗原性异物。特异性抗体介导的免疫效应主要清除胞外病原体。二、抗体产生的一般规律初次应答(primaryresponse)-抗原初次进入机体所产生的应答潜伏期长(约710天)总抗体水平低抗体以IgM为主抗体亲和力低维持时间短再次应答(secondaryresponse)-同一抗原再次进入机体所产生的应答潜伏期短(约23天)总抗体水平高以IgG为主抗体亲和力高维持时间长第一节B细胞对TD抗原的应答:一、识别:直接识别和单识别(BCR直接识别抗原,Ig“和Ig3传递信号,CD19/CD21/CD81作为共受体)(第一信号)二、活化、增值、分化与成熟:第二信号:CD40+CD40L(Th2产生的共刺激分子)第三信号:Th2产生的细胞因子第二节B细胞对TI抗原的应答:直接识别活化,无需Th细胞的辅助第三节体液免疫应答的效应及抗体产生的一般规律:抗体在血液中浓度变化的四个阶段:潜伏期、对数期、平台期、下降期初次应答:潜伏期长;总抗体水平低;以
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