呼吸道病毒7项检测试剂

1、呼吸道病毒7项检测 试剂 2021-1-10 FQ5UN度是迫断 呼吸道病毒 7 项检测试剂 试再争优 荧光显微镜参数 目录 1.概述 D3Ultra FA FA FA 试齐J F优势卜乍步骤吉果判读 2 2 2 3 种病 内临床意义 验邕所需设 *清单试剂盒中不含 1.概述 日常生活中,几种常见的呼吸道病毒往往给人们的工作和生活带来极大的不 常常是诊断和治疗的难题 常见的呼吸道病毒包括：A型甲型流感病毒,B型乙型流感病毒,呼 心病毒,副流感病毒1型,副流感病毒2型和副流感病毒 J抗原检测有其无法比较的优势：1.可以用于病 孑重要；2.快速、简便的诊断方法,短时间内得出结果, DHI公司的D3

2、UltraDFA试剂属于抗原检测 摩的测试对象为婴幼儿和儿童,所以目标客户群体为: I科的三甲医院. 便, 有些甚至威胁到人们的健康和生命. 在医院和急诊室中,这些呼吸道病毒也 式剂可以同时筛查和鉴定出常见的 7 7 种呼吸道病毒. 这对 f/ O 试剂 DF 干斗力 3 猫胞瘾毒RSV 测 2. D3UltraDFA试剂 2.1 D3UltraDFA试剂规格 D3UltraDFA试剂分为7项呼吸道病毒筛查试剂和7项呼吸道病毒鉴定试剂.检测病毒种类:A型甲型流感病毒,B型乙型流感病毒,呼吸道合胞病毒RSV,腺病毒,1、2、3型副流感病毒.具体规格如下： 3、防止抗生素的滥用 病毒不同于细菌、衣

3、原体、支原体等原核生物,其对抗生素不敏感,不能使用抗4素进行治疗.准确的诊断能帮助医生确定是否使用抗生素来治疗病人. 2mLX7,可用于80次测试 40 x浓缩洗液25mL,固定液15mL,正常鼠丙种球 质控,含有 7种呼吸道病毒抗原的阳性质控板 疑似呼吸道病毒感染的患者进行快速的病毒筛查和鉴 导人的治疗非常重要 这主要表达在以下几点: 奥司他韦达菲等是抗流感病毒的特效药 M酬桂药物,主要采取支持疗法 NA抑 被感染的宿主细胞中释放,从而减少甲型或乙型流 48小时内使用奥司他书才有用,过了 剂 N、 市用于400次测试 七 这个时间段后疗效甚微 2.3 D3UltraDFA试剂特点和优势 1、

4、产品几乎覆盖了所有常见呼吸道病毒的诊断 2、采用直接免疫荧光法,较其他检测方法有较大优势详见表一mIBSI 3、实验步骤较简便,在短时间内能得出结果,从而帮助医生更好地治疗病人 4、使用质量优异的抗体,染色步骤仅需15分钟,大大节省了实验室的劳动力和 本钱,同时提升了临床诊断的成功率,减少重复实验 5、可以监控感染的大规模流行 6、拥有强大的科研团队,不断研制和改良单克隆抗体 表1、几种常用检测方法的比较 检测方法 病毒别离培养 幅联免疫吸附法 间接免疫荧光法 抗原检测 直接免疫荧光法 UltraDFA试齐 血清学检测 分子生物学方法 2.4 D3UltraDFA试剂实验操作步骤 1、样品准备

5、步骤: 将样本充分震荡混匀约 1010- -1515 秒. 在400-600 xg转速下离心5-10分钟 充上清如果预留上清可用于细胞培养 M在沉淀中期 5mLPBS 缓冲液请 4 包用普通 PBS,不要使用弑剂盒内配套的浓 缩洗液,充分震荡混匀约10-15秒 在400-600Xg 黑座不离心 5-10 力钟 5 吸走上清和黏液层,小心不要吸到江淀 优点 特异性高 较快速、简便 较快速 3 D快速、简便,灵敏度 和特异性均较高 快速、特异性较高 较快速,灵敏度和特异性均较高 缺点 耗时耗力,灵敏度较低 有非特异性反响有非特异性反响 需要使用荧光显微镜 对疾病初期诊断没有太大帮助操作繁琐,价格昂

6、贵 在2或8加卜的病肉滴力25的细晌县油沟o重复步骤4到6,直至黏液层被完全云 除. 注意：一定要将黏液去除干净,否那么会造成非特异荧光从而影响实验 结果. 在沉淀中加0.5到1mL的PBS缓7 中液. 用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀,光可用于直接样本测试. ,成一个略混浊的悬液.这, 卜悬浊液 2、 宜接样本测试步骤: 在200倍放大荧光显微镜下观察结果. 2.5D3UltraDFA试剂 样本完全风干在20oC到25oC,用预冷的100%丙酮固定细胞约5到10分钟.注意：丙酮是易挥发、可燃性物质,使用时请远离明火. 从丙酮中取出载玻片并风干 在固定并风干的细胞上滴加一滴DFA染色试剂如图1,

7、使其完全覆盖细胞 注意：2孔或8孔板上有一孔是阴性对照孔,请勿滴加 DFA 染色试剂. 在呼吸道病毒抗原对照板的每孔内也要滴加DFADFA 染色试剂.抗原对照板包含了被病毒感染的细胞和未感染的细胞,只能一次性使用. 在阴性对照孔内滴加正常鼠丙种球蛋白试剂,使其完全覆盖细胞. 将载玻片放于35oC到37oC的恒温箱内孵育 1515 到 3030 分钟,为保持其湿润最好放置于带盖的盒子内用事先稀释好的洗液漂洗染色细胞.为了更有效地洗涤,请将玻片在洗液中反复浸雁4次左右. 使用新的1X洗液再洗一次 ?用去离子水再洗一遍 图1、在玻璃板上滴加:P3U,船DFA染色试剂 3、观察实验结果.八 滴加2到3

8、滴固定液,并加盖盖20X50 气泡. 土 口 毒抗原,染色后就会显绿色的特征如图2. 在荧光显微镜下,感染不同病毒的细胞会呈现独有 FOSUNgggK 带FITC标记的抗体在荧光显微镜下会呈现明亮的绿色,如果细胞外表存在病 64 F05UN后星迫斯 上海复星医学科技开展 1、Vircell产品检测工程除了以上7种病毒外,还包含肺炎衣原体、支原体等原 核生物检测工程.但是,90%90%的感冒是由病毒弓I起的.如果是细菌、衣原体、支 原体等感染,一般白细胞和C-反响蛋白CRP都会显著升高,而病毒感染,这 两项指标一般不会升高.我们建议医生可以先做血常规或者 CRPCRP 检测,这样就能 区分是病毒

9、还是细菌感染,而这两项测试不仅快速一般 2020- -3030 分钟,而且价格相对廉价. 2、D3UltraDFA试剂的检测原理是用荧光FITC标记的单克隆抗体检测病毒抗原,属于直接荧光免疫法.Vircell产品的检测原理是用抗原检测抗体IgM,使 用的方法是间接免疫荧光法.虽然检测IgM能区分出是既往感染还是急性感染,但是抗体产生的个体差异较大,特别是1岁以下的婴幼儿和有免疫缺陷的人群,其抗体往往产生较慢.短时间内,在体内抗体缺乏的情况下,可能会出现假阴性,从而 错过了治疗的最正确时期.甲型流感病毒其外表抗原变异较快,而人体往往不能及时 产生针对新毒株的抗体,这时也会造成假阴性.间接免疫荧光

10、法会增加非特异性反应的几率. 表2、Vircell与D3UltraDFA试剂比照 3 DUltraDFA Vircell 检测工程 9项呼吸道病原体,其中包含在我国 发病率很低的Q热立克次氏体 只检测呼吸道病毒,降低患者的看病本钱,患者更易接受 需要体内产生抗体后才能检测出病原 检测原理 体,如果抗体产生较慢或者无抗体产生会有假阴性 只要有病原体存在即只要有病原体存在即m椅渺椅渺Lm在在 发病早期进行快速诊断 作为回忆性诊断,对病例的早期诊断 意义不大 可用干疾病早期诊断,对黑者的治疗有重大意义 检测灵敏度 不能很好地检测变异的病毒 将多种抗体进行组合,能更好地应对变异的病毒,在多项检测工程中

11、灵敏度送到100% 检测方法 间接免疫荧光法,二抗的使用会增加 非特异性反响 直接免疫荧光法,特异性提升 实验步骤 二抗的使用让实验步骤变得较为繁琐 步染色,不易交叉污染 *备注：引用自?流行性感冒诊断与治疗指南 2021年版 上海复星医学科技开展 附录1七种病毒检测的临床意义 流感病毒侵入呼吸道,经 1 1- -2 2 天的潜伏期,感染者即可由现流感病症.病毒 在上皮细胞内复制,很少入血,但可释放内毒素样物质入血,引起全身中毒病症： 发热、头痛、全身酸痛、疲乏无力、白细胞数下降等.幼儿或年老体弱病人感染流感病毒易继发细菌感染,如合并肺炎等,病死率高. 婴幼儿特别是2-6个月的婴儿对RSV特别

12、敏感,常引起较为严重的呼吸道疾 病,如细支气管炎、肺炎等,患儿常出现呼吸暂停,气管或细支气管坏死物与粘液、纤维蛋白等结集在一起,极易阻塞患儿的呼吸道,严重者造成死亡.在我国RSV还是引发流行性喘憋性肺炎的主要病原,可弓 I I 起婴幼儿尤其是新生儿较高的 死率. 腺病毒主要引起呼吸道感染,病症有急性发烧、咽炎、扁桃体炎等.腺病毒 肺炎约占儿童期肺炎的10%,多由腺病毒3、7型引起；婴幼儿腺病毒肺炎的病 死率为8%-10%.除呼吸道疾病外,腺病毒亦可引起其他疾病,如流行性角膜炎、 出血性结膜炎、急性滤泡性结膜炎等.腺病毒与婴幼儿胃肠道疾病也有可能相关,包括阑尾炎、急性胃肠炎,有时可引起脑炎和脑膜

13、炎、出血性膀胱炎等. 副流感病毒是弓I起小儿急性呼吸道感染的常见病因,仅次于 RSVRSV.副流感 1 1、 2型是哮喘的主要病因,以2-4岁儿童中最为严重.副流感3型,亦可引起哮喘,但主要易引起婴幼儿支气管炎、肺炎,并以1岁以内的婴儿较为严重. 病毒及其对应抗病毒药 抗病毒药物 金刚烷乙胺、瑞乐沙、奥司他书达菲 利巴书林喷雾剂 病情严重者可使用利巴书林 没有专门的抗病毒药物,主要采取支持疗法病毒种类 流感病毒 呼吸道合胞病毒副流感病毒腺病毒 R5UN距物 上海复星医学科技开展 附录2实验室所需设备清单试剂盒中不含 此列表中的器材和试剂是实验所必需的, 但是未包含在试剂盒中,需要单独购置. 器材和试剂规格 :纯度100% 1鼻咽拭子 |2.载玻片 3盖玻片 4-上生物平安柜 I 建议使用DHI配套鼻咽拭子 7约70mmX20mm 约50mmX20mm ：2级 恒温培养箱 35oC-37oC 离