还原糖和总糖的测定

1、生物化学综合实验报告题 目：3, 5二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓 名：学 号：同组成员：_分院（系）:_专业班级：指导教师：完成日期月 日1。实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2。实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度 A从而得其总糖和还原糖含量。3。实验仪器和试剂试剂： 1g/L 葡萄糖标准液、 3,5- 二硝基水杨酸、 6mol/L HCl，6mol/L NaOH仪器 :25 ， 100ml 容量瓶、 1， 5ml 吸量管、 50ml 移液管、 100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、 10

2、0ml 容量 瓶、比色皿 离心机、分光光度计、恒温水箱4。实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0。2、0。4、0.6 、0。 8、1.0 毫升在加入蒸馏水 2。0、1.8 、1。6、1。4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1。5毫升混合均匀后 100 摄恒温水浴 5min ，冷却后加入蒸馏水至 25ml 刻 度线，用 1 号样调零，测其分光度，制得标准曲线。二、还原糖提取：取 3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50 摄水中保温20min，离心，取滤液，用100ml容量瓶定容得还 原糖待测液 .总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水

3、搅匀,100摄下恒温水浴 30min，冷却，NaOH调节 PH至中性，离心,滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液. 测定时取5支比色管分别加入还原糖 0、1。0、1。0、0、0 毫升，总糖0、0、0、0.5、0。5毫升，蒸馏水2。0、1。0、1。0、1。5、1。5毫升,DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至 25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度.5数据处理葡萄糖标准曲线表管号012345含糖总量（mg00.20o 40o 60o 81葡萄糖标液（ml）”00.2r 0.4 10o 60o 81蒸馏水（ml）21.81o 61.41o 21DNS剂（ml

4、）1.51。51.51o 51.51.5吸光度A100.04:0o 1170o 1920.3350o 46皿蔔萄糖锻光度Ay二Q* 4082k山芋中还原糖和总糖测定表管号空白66'77'还原糖待测品（ml）0110P 0总糖待测液（ml）0000。50.5蒸馏水（ml）2111.51。5DN熨剂（ml）1.51.51.51。51。5 1吸光度A00。0040.0071.3421。435测量得还原糖和总糖:m还原糖=0。4235*( A6+A6)/2=0。0019mgm总糖=0。4235 *( A7+A7') /2=0.1910mg还原糖=m曲线葡萄糖* （V总N测）/m样品* 100%3还原糖=0.0019* （100/1）/3000 衣 100% =0。0063%3总糖=m曲线葡萄糖* （V总/V测）/m样品* 100%3 总糖=0.191 伙（100/0。5） /200 衣 100% =19。1%6。注意事项离心时中心对称的离心管质量要基本相等 可以增加山芋粉的质量来使得还原糖易于测量7思考题DNS比色法是如何对总糖进行测定的？用 HCl 水解总糖中的非还原性糖从而得到还原糖进