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文档简介

1、、课题背景选修一生物技术实践专题二微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养1 .研究和应用微生物的前提是2 .在实验室培养微生物,一方面需要,另一方面而Q1 .概念:人们根据微生物对的不同需求,配制出供其的营养基质称为培养基.2 .种类:根据培养基的物理性质可将培养基可以分为、和半固体培养基.3 .琼脂:是一种从红藻中提取的,在C以上熔化,在C以下凝固,在常规培养条件下呈现.琼脂是制备培养基时最常用的剂.4 .营养构成:各种培养基一般都含有水、和无机盐,另外还需要满足微生物生长对、以及的要求.例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加,培养霉菌时需将培养基的pH调至,培养细菌时需将pH调至或,培

2、养厌氧微生物时那么需要提供的条件.5 .牛肉膏,蛋白月东来源于,含有、和等营养.三、无菌技术1 .获得纯洁培养物的关键是预防的入侵.2 .无菌技术围绕着展开,主要包括以下几个方面:(1)对实验操作的、操作者的衣着和进行清洁和.(2)将用于微生物培养的器皿、和等进行.(3)为预防周围环境中微生物的污染,实验操作应在附近进行.(4)实验操作时应预防已经灭菌处理的材料用具与相接触.3 .无菌技术的目的:(1)预防,(2)预防.4.消毒和灭菌火菌概念使用较为_物体的物理或化学方法杀死或的局部微生物使用微生物(包括_的理化因素杀死物体和)的(不包括_和)_常用方法(1)_消毒法(在C煮(1).火菌:直接

3、在酒精灯火焰的min);灼烧,如、接种针或其他用(2)min或在_消毒法在C煮min;_c煮_具;2火菌在C加热h).消毒法如用适用于、的物品.擦拭双手、用消毒水源;紫外线如吸管、培养皿和用具;照射前,适量喷洒或溶(3)火菌:压力为kpa,温液等消毒液.)度为C条件下,维持minO4紫外线消毒法:可以杀死或中的微生物.一制备牛肉膏蛋白月东固体培养基的步骤:1 .计算:依据是培养基的比例,计算配制某一体积如100ml的培养基时,各种成分的用量.2 .称量:牛肉膏比拟,可用玻棒挑取到上,同其一块称量.牛肉膏和蛋白月东易吸潮,称取时动作要,称后及时.3 .溶化:和称量纸+少量的水'取出一加和

4、一加注意:不断用玻璃棒搅拌,预防而导致.当完全熔化后一补加蒸储水至100mLo调节后再进行灭菌.培养基:灭菌4 .灭菌i培养皿:火国、5 .倒平板:待培养基冷却至左右时,在附近倒平板.二纯化大肠杆菌1 .微生物的接种技术最常用的是和,除此之外还包括和等方法.虽然这些技术方法各不相同,但是,其核心都是要预防,保证.平板划线法:通过接种环在培养基外表的操作,将聚集的菌种逐步到培养基的外表.稀释涂布平板法:将进行一系列的,然后将不同的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的外表,进行培养.两种接种方法都是为了将聚集在一起的微生物,在划线培养后或者在的菌液涂布后,可以别离得到由繁殖而来的肉眼可见的单个.2 .菌

5、落:概念:.菌落特征包括.3 .系列稀释操作:(P19)1、2、3注意:移液管需要经过.操作时,和应在离火焰处.4 .涂布平板操作:将涂布器末端浸在体积分数为的酒精;取少量滴加到培养基外表;将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,冷却S;涂布时可转动,使菌液分布均匀.5 .培养基灭菌合格与否的方法:将接种后的培养基和一个的培养基都放入中,培养12h和24h后,分别记录观察.P20培养12h和24h后,观察到的实验结果相同吗?如果不同,请分析产生差异的原因.如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落,你能分析出可能是由哪些原因引起的吗?6 .如何记录实验结果?(三)菌种的保藏:(1)临时保藏:将菌种接种

6、到试管的,在温度下培养,当长成后,将试管放入冰箱中保藏,以后每个月,转移到培养基上.适用范围:对于的菌种,可以采用临时保藏的方法.缺点是:保存时间,菌种容易被或产生变异.(2)长期保存菌种的方法:法,在mL的甘油瓶中,装入mL甘油后将mL转移到甘油瓶中,与甘油后,放在冷冻箱中保存.P15旁栏思考题:无菌技术除了用来预防实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?P16旁栏思考题:请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌.如果需要,请选择适宜的方法.(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手(1)、(2)需要;(3)需要.P17倒平板操作的讨论1

7、.培养基灭菌后,需要冷却到50c左右时,才能用来倒平板.你用什么方法来估计培养基的温度?2 .为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?3 .平板冷凝后,为什么要将平板倒置?4 .在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?P18平板划线操作的讨论1 .为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?2 .在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?O3 .在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?P19涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行.结合

8、平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第2步应如何进行无菌操作?OP20课后练习题1、2、3专题二微生物的培养与应用答案课题1微生物的实验室培养一、1、预防杂菌入侵,获得纯洁的培养物.2、为培养的微生物提供适宜的营养和环境条件,保证无处不在的其他微生物无法混入.1 .营养基质生长繁殖2 .液体培养基固体培养基水3、多糖9844固态固体凝固4、碳源氮源PH特殊营养物质氧气维生素酸性中性微碱性无氧5、动物原料糖维生素有机氮三、1 .外来杂菌2 、如何预防杂菌空间手消毒接种用具培养基灭菌酒精灯火焰周围的物品3 、实验室的培养物被其他外来的微生物污染操作者自身被微生物感染4 .温和外表或内部芽抱和

9、抱子强烈内外所有芽抱和抱子5 .煮沸消毒1005-6巴氏70-75308015化学药剂酒精氯气石碳酸煤酚皂物体外表空气灼烧灭菌接种环金属干热灭菌160-1701-2耐高温需保持枯燥玻璃器皿金属高压蒸汽灭菌10012115-30四、一1 .配方2 .粘稠称量纸迅速盖上瓶盖3 .牛肉膏加热称量纸蛋白陈氯化钠琼脂琼脂糊底烧杯破裂琼脂PH4、高压蒸汽灭菌干热灭菌5、50酒精灯火焰二1 .平板划线法稀释涂布法斜面接种穿刺接种杂菌的污染培养物的纯度琼脂固体连续划线稀释菌液梯度稀释稀释度别离数次稀释度足够高一个细胞菌落2 .在数次划线后培养,可以别离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体菌落的形状,大小

10、,隆起程度和颜色等3、灭菌试管口移液管1-2cm4、70%菌液8-10S培养皿5、未接种37C恒温箱不同三1固体斜面培养基培养适宜的2甘油管藏法31灭菌1菌落4C3-6新鲜充分混匀-20C频繁使用不长污染P15无菌技术还能有效预防操作者自身被微生物感染.P16灭菌消毒P171、可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行2、通过灼烧灭菌,预防瓶口的微生物污染培养基.3、平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,将平板倒置,既可以预防皿盖上的水珠落入培养基,又可以预防使培养基中的水分过快地地挥发.4、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物.P181、操作的第一步灼烧接种环是为了预防接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落.划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,预防细菌污染环

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