imageJ测荧光

1、这里是它的官网:正题1、安装后首先翻开ImageJ :2、 翻开要分析图片：Fileopen 热键为Ctrl+Otcft kme Frtxess M审yze Pu?咋 肌inoou NewI QpehGtritO IOpen wxtGU1+3hlH+Oopen csnpicsOpen Rwenilj*ImpartClustiCtrt+WClose Allsavectn+sSaw ASkP3QC setup.PrimCtrkPaun cliexll： 5MljChC3、转换成 8bit 的灰度图：lmageType8-bit4、黑白反转因为对于光密度 0D丨来说越白数值越小，纯白为 0 ;越黑数

2、值越大，纯黑理论上是无限大。因此我们需要将上一步所转换的灰度图进行黑白反转，不然的话测岀来的数值就会荧光越亮反而数值越小：Editlnvert热键为 Ctrl+Shift+I J 1册US輪r 1ri 品IIIhchnWHdin吧o.Fioaanari .ii ftNt -1 V ：lr Ul* *出尸. : 伸J l八;*J f、： q 1h以下为从左到右分别为原图、8bit灰度图及反转后的图:5、校正光密度软件默认为测量灰度，因此我们要改为更加适用的光密度，其中原理不是一两句话能说得清的，这里忽略：AnalyzeCalibrate,然后点击在弹出来的界面的 Function 选择Uncal

3、ibrated OD ,并下界面左下方勾选Global calibration右下角的0Kf Calibrate.-Funct on: jJncaliorateaOD-honeUnit- Stf3yrMbii92nd 吟伸0 匸Qbnmlsl ptgroc polynamiai 4th Degree Folyn 口ER cnentiailPu*eFLoaRnrfciaMGaFma询快t = a+5FlntJ taHbiaUofiP howl(rtoc点击OK后会跳出校正后的光密度曲线:6、选择测量单位一般选择象素，如有明确的比例，也可以选择相应单位：如不勾选Global calibration

4、，光密度的校正只对这张图片有效，一般分析都要分析多张图片，所以需要勾选，勾选后在翻开另一图片时会提示是否将此校正应用于所有图片，不勾选Disable Global Calibration勾选 Disable these Messages=7.tifUMThe calib ration this Image cortfllds with the current global calibration厂 Disable Glosal CalibrationtheseOK | CancelAnalyzeSet scale点击后在弹出的界面里点击中间的click to Remove Scale，并勾选下

5、面的Global同样的，如不选Global这个测量单位的选择只对这张图片有效，最后点击0K7、选择测量工程：AnalyzeSet Measurements这在弹出界面中选择我们需要测量的工程Area、Integrated density ，并勾选下面的 Limit to threshold个选项是指只测量我们选中的范围，如不勾选侧会测量整张图片数据，选择后点击0KQ Set M pasi i尸hulEl U&an gray value Standard devialioiir Hod al gny value厂 Min & max gray value厂 Centroid厂 Center of

6、 mass厂 Pesi meterl Rcunding rprtanglp厂 Fit ellssi Shape(iescfipt&rE! Ferats dane-er中(nitgrated density厂 MediaeI- Skewnessr Kurtosia厂 Ar&arracnonr sta：Kposition2 Limit to thresholdi D spla)lat)ei厂 Invert Ycoortfinates厂 3dfritHc notation:Add tn cverla/Remr&ct tc:None *D&cimal places网.；(XCaneelJ Ij出热键为

7、 Ctrl+Shift+T 8、选择测量域值：lmageAdjustThreshold: lincgcJI c -iriwyeFre Edl/tidyzt Plugliit卜 tip卜BlgntiiessjGonirFCtr +sninttsnnw true01*1nndmvi cvrlpropeniwCtnisnttttPcwor BalanceCtfcrihresrnkistaciscolor ThneshokiHypereiacks1总笙Croputn+iihin+xCanvas Sa/p-Duplicate Ctri+Shift+DLine widthRenarne.,Scale.Cl

8、rhET rnsioriri卜Zourri0Vz：nayLoukii Titles卜“！C-C*Str3iC*if. M滑动弹岀界面中间的滑块选择适合的域值，以使的你图片中的细胞或待测目标刚好全部被选中，选好之后 点击右下角的Set:litrf ；GJ(33.3*o|圏：赵l-iHjrrcjpsh1 %*fl在弹出来的界面点击0K弓ut ThreshaldLower TTi re shold Level:Upper Tfireshoid Level: 03OK | Cancel |9、测量：AnalyzeMeasure热键为 Ctrl+M 或直接按 M ImageJFile Edu Infig

9、n Process | 叵 U-也型企J 丑Maaninpo gjflss oruse B and*- I IP ug ns v；indow dr f10、记录数据并计算:结果中的Area为选择范围的面积，如果是测量的是细胞的话就是细胞在图中的面积; 围的IOD光密度的总和。IntDen就是所选范结果界面中的数据可以复制到Excel等软件中进行计算。用 IntDen /pixel同法测量多张图的平均光密度值后就可以进行半定量比拟。以下附上分别应用Image-Pro Plus 及ImageJ对五张图片进行分析的结果比照:Imagr Pru Plus8006742Z1H. 432 L. 02765TS354U1 2412b. 060. OZ087B931035252D1. SOS 0. 027068971133 27459.90. 0282756*?95715127015. 074 0, 02822495377 29366.340. 0295056*793161225S2