发酵工程种子制备ppt课件

1、本章内容：n种子制备原理与技术n影响种子质量的要素n种子质量的控制措施n种子制备的放大原理与技术种子制备原理与技术优良种子应具备的条件生长活力强，延迟期短；生理形状稳定；浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求；无杂菌污染，保证纯种发酵；顺应性强，消费才干稳定种子罐级数确实定 n种子扩展的级数：制备种子需逐级扩展培育的次数 n级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的时机，减少消毒及值班任务量，减少因种子罐生长异常而呵斥的发酵动摇。确定方法n菌种的性质(如菌种传代后的稳定性)n瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁衍速度n发酵罐中种子培育液的最低接种量n种子罐与发酵罐的容积比n消费规模n随工艺

2、条件的改动作适当的调整种子质量的判别方法v通常检测的培育液中参数vpH能否在种子要求的范围之内 v糖、氨基氮、磷酸盐的含量 v菌丝形状、菌丝浓度和培育液外观 v有无杂菌污染 v其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气等 种子制备v步骤：步骤：v斜面培育基中活化；斜面培育基中活化；v扁瓶固体培育基或摇瓶培育基中扩展培扁瓶固体培育基或摇瓶培育基中扩展培v养，完成实验室种子制备养，完成实验室种子制备v一级种子罐，制备消费用种子；视情况一级种子罐，制备消费用种子；视情况v确定扩展级数，完成消费车间种子制备；确定扩展级数，完成消费车间种子制备；v种子转种至发酵罐种子转种至发酵罐种子制备过程v实验室种子

3、制备阶段：琼脂斜面至固体培育基扩展培育如茄子瓶斜面培育等或液体摇瓶培育 v消费车间种子制备阶段：种子罐扩展培育 实验室种子制备 v无菌方式接保藏的菌种至斜面培育基上，成熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。v菌种产孢子才干强及孢子发芽、生长繁衍迅速，可用固体培育基培育孢子v菌种产孢子才干不强或孢子发芽慢，可用摇瓶液体培育法v不产孢子的菌种，保藏根底上，在一定温度下活化即可v种子扩展培育阶段v液体培育法：液体试管、三角瓶摇床振荡或盘旋式培育。v外表培育法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培育。v固体培育法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培育皿等麸皮培育。消费车间种子制备 v实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进

4、展扩展培育v种子罐培育一获得足够的菌种数量，二种子罐的培育基接近发酵罐培育的醪液成分和培育条件，使菌体顺应发酵环境 v种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌时机以及并减少由于多次转种而带来的染菌时机以及减少因种子罐生长异常而呵斥的发酵动摇减少因种子罐生长异常而呵斥的发酵动摇 v但思索能否在一定时间内获得优质、足量的但思索能否在一定时间内获得优质、足量的种子以满足发酵的需求种子以满足发酵的需求 种龄与接种量v 接种龄 v 种子罐中培育的菌体从开场移入下一级种子罐或发酵罐时的培育时间v 种子培育期应取菌种的对数生长期为宜，菌种

5、过嫩或过老，不但延伸发酵周期，而且会降低产量。v大量地接入培育成熟的菌种的优点：v缩短生长过程的延缓期，因此缩短了v发酵周期，提高了设备利用率v节约发酵培育的动力耗费v有利于减少染菌时机放射形土壤杆菌多糖ARPS发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响 接种种龄和接种量v接种量：移入的种子液体积和接种后培育液体的体积的比例 v接种量过多，菌丝生长过快、溶氧缺乏，衰老细胞添加等，发酵后劲缺乏v种量过少延伸发酵周期，构成异常形状，而且易呵斥染菌。 v以消费菌种在发酵罐中的繁衍速度为根据v接种量的大小直接影响发酵周期。在放射形土壤杆菌多糖ARPS发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响 影响种子质量的要

6、素v原资料质量v培育温度v湿度v通气与搅拌v 斜面冷藏时间v 培育基v pH原资料质量v原资料质量动摇引起种子质量不稳定v原资料质量动摇的主要缘由：无机离子含量不同微量元素Mg2+、Cu2+、Ba2+能刺激孢子的构成，磷含量太多或太少也会影响孢子的质量。 培育温度 v温度过低，菌种生长发育缓慢v温度过高会使菌丝过早自溶在制备土霉素消费种子过程中，高于37培育时，孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨基氮上升提早，菌丝过早自溶，效价降低等景象。湿度v湿度低，孢子生长快；v湿度大，孢子生长慢 制备土霉素消费菌种龟裂链霉菌孢子时发现，在含有少量水分的试管斜面培育基下部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅

7、速蒸发呈干瘪状，孢子稀少 通气与搅拌 v足够的通气量，以保证菌种代谢正常，提高种子的质量 v搅拌可提高通气效果，促进生长繁衍，过度搅拌导致培育液大量涌泡，液膜外表的酶易氧化变性，泡沫过多添加染菌时机，添加能耗。v丝状微生物不宜猛烈搅拌。斜面冷藏时间 v对孢子的消费才干有较大影响 v冷藏时间越长，消费才干下降越多 链霉素消费中，斜面孢子在6冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月的降低18，比冷藏3个月的降低35。 培育基v培育种子的目的：v扩展培育，添加细胞数量；v同时也必需培育出强健、安康、活性高的细胞。为了使细胞迅速进展分裂或菌丝快速生长。v有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充足氮源和生长因子

8、，无机氮源比例大；v各种营养物质的浓度不用太高；v供孢子用的种子培育基，可添加易被吸收利用的碳源和氮源；v应思索与发酵培育基的主要成分相近。种子培育基特点种子培育基特点 pH v选择最适种子培育pH的原那么是获得最大比生长速率和适当的菌量v培育最后一级种子的培育基的pH应接近于发酵培育基的pH，以便种子能尽快顺应新的环境 种子质量的控制措施 v菌种稳定性的检查 v测定其消费才干，从中挑选高产菌株，并及时对退化菌种进展复壮 v提供适宜的生长环境v种子无杂菌检查，保证纯种发酵。 种子液生化分析工程主要有：营养基质的消耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等种子制备的放大原理与技术v细菌发酵时的种子

9、扩展培育；v细菌发酵过程中种子扩展培育的主要目的是为了获得大量的活力强的种子 ；v种龄对于生芽孢的种子尤其重要。假设接种物含大量芽孢，将给后续发酵带来较长迟滞期 梭状芽孢杆菌发酵丁醇丙酮时种子扩展培育的程序 举 例： 酵母发酵时的种子扩展培育酵母发酵时的种子扩展培育v酿酒酵母的扩展培育 v最初采用纯种进展酵母发酵并设计出酵母繁衍流程，他将每一步的接种量规定为10，并控制繁衍条件与酿造时一致 v现代的流程中，接种量为1%或更低，控制的条件也与酿造时不同。面包酵母时的种子扩展培育的程序 丝状真菌发酵的种子扩展培育丝状真菌发酵的种子扩展培育 丝状真菌既可以利用孢子，也可以利用菌丝体作为接种物接种到发酵罐进展发酵 在固化的培育基上产生孢子“滚瓶技术运用于产黄青霉的孢子消费在固体培育基上产生孢子在谷类的颗粒外表构成大量的孢子在液体深层培育基中产生孢子v 利用孢子作为接种物 灰黄霉素产生菌展青霉一实验阐明在良好的通气条件下，培育基中含氮是在0.050.1w/v之间时，可以产生大量的孢子 丝状真菌的菌丝体作为接种物丝状真菌的