猪蓝耳病发病机理及提高非特异性免疫重要性

1、猪蓝耳病发病机理及提高非特异性免疫重要性图一蓝耳病病毒（PRRSV）1猪蓝耳病（PRRS）的发病机理蓝耳病病毒（PRRSV）进入猪机体后，侵入肺泡巨噬细胞，造成严重的间质性肺炎，入侵的第二天即可造成肺的损害，7天后损伤整个肺尖叶,呈多中心病状，病毒侵入细胞后在细胞内增殖，使巨噬细胞破裂，溶解崩溃，造成巨噬细胞数量减少，肺泡壁增厚，淋巴组织呈衰竭状态，同时降低了肺泡巨噬细胞对其他细菌和病毒免疫力。另外，因为毒株的变异，导致免疫细胞识别能力降低，从而逃避抗体的作用，极易继发或并发其它疾病，使病情非常复杂。图二正常巨噬细胞（Healthymacrophage）图三巨噬细胞被PRRSV攻击破裂（Unh

2、ealthymacrophage）2非特异性免疫与巨噬细胞2.1 非特异性免疫猪在进化过程中形成的、天生即有、相对稳定、无特殊针对性的对病原微生物的天然抵抗力，称为非特异性免疫或先天免疫。非特异性免疫主要由猪体的屏障结构（血脑屏障、胎盘屏障）、吞噬细胞的吞噬功能、正常组织和体液中的抗菌物质以及炎症反应等所组成。其中吞噬细胞包括大吞噬细胞（即单核巨噬细胞）和小吞噬细胞（即中性粒细胞）。2.2 巨噬细胞及其特点2.2.1 巨噬细胞巨噬细胞（Macrophage,M（|）由单核细胞发育而成，成熟后的体积较大。游离于血液中与固定在不同组织中的巨噬细胞其形态与名称不同。在光学显微镜下，可见有圆形或其他形

3、状的核，染色质较浓缩，经特殊染色还可见到线粒体、高尔基体和中心体等。在电子显微镜下，还可进一步看到内质网、溶酶体、微丝、微管和吞噬体等。巨噬细胞在机体免疫中有着极其重要的作用。最初只知道它有吞噬外来异物的作用，因此只认为是一种非特异性的免疫作用。随着研究的深入，发现其在协同T、B淋巴细胞参与特异性免疫反应及在抗感染方面都有着重要的作用。2.2.2 巨噬细胞特点巨噬细胞具有多种免疫功能，它可吞噬消灭入侵的病原体、有害异物，清除损伤、衰老、死亡和突变细胞及代谢废物，能加工、提呈抗原给淋巴细胞。所以特异性免疫功能是建立在非特异性免疫功能基础之上，使机体免疫功能进一步完善。巨噬细胞之所以能完成这些功能

4、是由于它具有三个特点：（1）巨噬细胞是机体最早识别外来异物的细胞。人们惊异地发现，巨噬细胞可以识别和吞噬各种各样的外来的或“自身”的物质，没有这种广泛而有效的识别，也就谈不上免疫系统对抗原物质的免疫应答和有效保护。研究表明这种识别的基础是在巨噬细胞膜上存在很多的受体（表1）,这种能力是在物种系统发生中逐渐形成的。表1单核巨噬细胞膜上的受体性能受体名称结合对象对胰酶敏感性主要功能Fc受体I(FcRIgG2a敏感ADCC、调理、吞Fc受禄力(FcRm聚合IgG、IgG1、IgG2b不敏感ADCC、端理、吞噬Fc受体田（FcRIgG3ADCC、调理、吞田）噬IgM受体(Fc单体或完整ADCC、调理、

5、吞补体R3b受体(C3bR)IgMC3b、C3cADCC、手连、吞噬补体C3d受体(C3bR)C3b、C4ADCC、粘连、吞噬各种淋巴因子受体MIF、CSF、见注(1)淋巴细胞受体LDCFT、B细胞细胞间相互激活聚合蛋白受体聚合的蛋白转接异物，加速吞连接蛋白受体(FNR)连接蛋白(FN)促进内看消除病原高密度脂蛋白受体高密度脂蛋白乳铁传递蛋白受体乳铁蛋白唾液糖蛋白受体唾液糖蛋白胰岛素受体胰岛素纤维蛋白原受体纤维蛋白质其他各种受体见注(2)见注(2)注：(1)MIF可阻止巨噬细胞游动。CSF可促进单核巨噬细胞生长，LDCF(淋巴细胞衍生的趋化因子)招引单核巨噬细胞趋向异物；(2)包括对各种激素、

6、神经肽、多糖质、糖蛋白、脂蛋白及脂多糖的受体，可调控单核巨噬细胞功能。(2)巨噬细胞具有多种胞内酶和胞外酶(表2),使之有效地消化、杀灭被吞噬进入细胞内的病原体及异物。表2单核巨噬细胞的酶类及其功用酶系名称主要功能溶酶体水解酶组织蛋白酶B(cathepsinB1细胞内水解消除吞噬的异物及病原透明质酸酶(hyaluronidase?体细胞外破坏炎症组织糖甘酶(gucosidase)脱氧-/核糖核酸酶促进创伤愈合降解弹性蛋白促进溶解血块促进降低血压降解脂质及磷脂、消除内毒素脂多糖氧化及催化Cl-水解杀菌(DNase/RNase)溶酶源中性蛋白酶胶原蛋白酶(collagenase)弹性蛋白酶(ela

7、stase)血纤维蛋白溶酶原激活剂(PA)血管紧张素转化酶(angiotensinCse)溶酶体脂酶脂蛋白脂酶(lipoproteinlipasej-)磷月旨酶(phospholipase)溶菌酶(lysozyme)髓过氧化物酶(myeloperoxidase)胞外酶核甘酸酶(nucleotidase)在细胞外进行物质代谢，供给养分及能量亮氨酸氨肽酶(leucine/aminopeptodase)碱性磷酸酯酶(alk.phophoesterase)精氨酸酶(arginase)脱氨酶(deaminase)其他酶类3)巨噬细胞还可以分泌很多活性物质，其分泌产物之多，可与肝细胞相比拟。这些分泌产物对

8、组织、细胞起着重要调节作用(表3)。表3巨噬细胞的分泌产物1 .单核因子(monokines)5.细胞外基质及连接蛋白IL-1=LAF纤维连接素(Fibronectin)IL-3=CSFIL-6=BCDF干扰素(IFN-a/y)=MAF肿瘤坏死因子(TNF)2 .激素(normones)样物前列腺素(PGE2,PGF2a)凝血嗯烷(thromboxane)白三烯(leukotriene)花生四烯酸(eicosatetraenoicacid促肾上腺皮质激素(ACTH)胰岛素样物(insuline-like)胸腺素B4(thymosineB4)为内啡肽(为endorphin)二羟基维生素D3 .补

9、体(comlement,C)成分C1、C2、C3、C4及C5备解素(P)、B因子、D因子抑制物：C3b抑制物、B1H补体裂解成分(由M小蛋白酶裂解)：C3a、C3b、C5a、Bb4,凝血因子凝血因子V、V11、1X及X凝血酶原、凝血酶原酶组织因子、血纤维蛋白溶酶95000明胶结合蛋白凝血扬升素(thrombospodin)6 .反应性中间物超氧化物(superxide)过氧化氢(H2O2)羟基(hydroxylradical)亚硝酸盐、硝酸盐7 .生长因子及活化因子粒细胞集落刺激因子(G-CSF)中性粒细胞活化因子(NAF)单核细胞/巨噬细胞集落刺激因子(G/M-CSF)促红细胞生成素细胞集落

10、增强因子成纤维细胞生成因子、活化因子及转化因子浆细胞瘤生长因子血小板衍生的生长因子谷胱甘肽(glutathione)8 .酶及细胞抑制物蛋白酶抑制物a1抗胰蛋白酶a2巨球蛋白(a2M)胶原蛋白酶抑制物磷脂酶抑制物月旨调节素(lipomodulin)抑制物、血纤维蛋白溶酶原激活剂及抑制物9 .喋吟及喀咤产物胸腺嚅咤脱氧核昔（dT）脱氧胸音（deoxycytidine）尿（uracil）尿酸新蝶吟（neopterin）10 .其他结合蛋白3特异性免疫与蓝耳病疫苗3.1 特异性免疫1L-1抑制物转铁蛋白(transferrin)同族铁蛋白(isoferrin)转钻胺素II(rtanscobalami

11、neII)脱辅基月旨蛋白E(apolipopreoteinE)脂质转移蛋白(lipidtransferpreotein)亲和素(avidin)特异性免疫又称获得性免疫或适应性免疫，是经后天感染（病愈或无症状的感染）或人工预防接种（菌苗、疫苗、类毒素、免疫球蛋白等）而使机体获得抵抗感染能力。一般是在微生物等抗原物质刺激后才形成的（免疫球蛋白、免疫淋巴细胞），弁能与该抗原起特异性反应。主要参与细胞是T、B细胞和抗原提呈细胞。在抗原刺激下，机体的特异性免疫应答（体液免疫或细胞免疫），般可分为感应阶段、反应阶段和效应阶段。感应阶段是对抗原的识别及处理阶段。绝大多数抗原物质第一次进入机体后，须经巨噬细胞

12、处理后将抗原信息传递给免疫活性细胞（T细胞、B细胞）。反应阶段是免疫活性细胞接受抗原刺激后，进行分化、增殖，产生大量致敏T细胞和B细胞，由B细胞产生抗体的阶段。此阶段尚有少量细胞停止分化、增殖，成为保留抗原信息的记忆细胞。效应阶段是致敏T细胞及抗体发挥免疫功能的阶段。当再次遇到相同抗原时，致敏T细胞直接作用于抗原，同时释放出多种淋巴因子，消灭抗原，发挥细胞免疫的作用。而抗体可直接作用于抗原，或与巨噬细胞、补体等协同作用，杀灭或破坏抗原异物，发挥体液免疫的功能。图四巨噬细胞加工、处理和递呈抗原3.2 猪蓝耳病疫苗随着PRRS的发现，PRRS的疫苗研究也就随之开展，对于蓝耳病的免疫现在养猪界的说法

13、很多，到底应不应该注射疫苗，在疫苗的选择上是应用弱毒苗还是灭活苗，每个人都有自己的看法。目前，世界上商品化的PRRS疫苗有弱毒苗和灭活苗两类。弱毒苗的缺点是：把它注射入体内的效果与感染野毒没有多大差别。对完全蓝耳病阴性的场或已经是蓝耳病阳性的猪，当注入另外一种毒株的的PRRS疫苗后，它会同野毒一样照样穿过胎盘侵害胎儿。有时，如果我们所使用的疫苗的基因序列与某一群体存在的PRRS病毒基因序列相似性达到70%80%时，疫苗会比较有效。如果我们所使用的疫苗的基因序列与我们本场存在的PRRS病毒基因序列不同时，则意味着可能会有一场新的蓝耳病到来。Botner等报道，在丹麦，对1000多头PRRS血清学

14、阴性猪使用了弱毒疫苗，可是不久后猪群发生了PRRS,而且从流产胎儿和死胎中分离到了疫苗病毒，发现疫苗病毒可经胎盘感染胎儿，并向未接种的母猪传播，有些猪群则表现出急性PRRS样综合症状。Opriessnig报道从一个多次接种IngelvacPRRSMLV的猪场发生PRRS后分离到一株PRRSV98-38803，并证实该毒株来自于IngelvacPRRSMLV。所以PRRS弱毒疫苗的毒力返强的可能性是存在的。从以上结果来看，PRRS弱毒疫苗免疫产生期快，在控制PRRS临床症状上明显好于PRRS灭活疫苗。但PRRS强毒和弱毒在猪体内的反应过程是一致的，所以长期使用PRRS弱毒疫苗所带来的安全问题仍是

15、目前PRRS免疫中最大的争议。灭活苗的缺点是：免疫剂量大、免疫次数多、免疫力产生期较长，诱导有效免疫力的能力比较差。但毫无疑问，灭活苗在使用上是比较安全的，可以诱导一定的抗体产生，如果抗体与野毒的基因序列比较相似，同样还会产生保护；如果基因序列不相似，则保护力比较差。这就是这两种疫苗的不同之处，了解到他们的缺点后我们在生产实践中就要避免它。所以要根据每个养殖场不同的情况来选择疫苗。灭活苗的安全性大大高于弱毒苗，而且不存在散毒的危险，然而再好的灭活苗的效果也不能和弱毒苗的效果相比较的。所以对于种猪和阴性场应该选用灭活苗，而阳性场为了净化蓝耳病最好选用免疫效果好的弱毒疫苗。专家之音南方农村报：当前

16、，不少地方养殖场出现接种蓝耳病疫苗（尤其是弱毒苗）后大量死猪的现象，这是否意味着弱毒苗有很大的危险性？樊福好：我个人觉得，接种疫苗只是防控高致病性猪蓝耳病的权宜之计，市场上个别厂家的产品也存在着灭活疫苗灭活不完全、弱毒疫苗混有强毒的情况，建议养殖户在选用疫苗产品时，一定要慎重。从理论上说，弱毒苗虽然在实际效果上会好于灭活疫苗，但是在目前的情况下，蓝耳病的免疫还存在着许许多多的问题尚未解决，匆匆忙忙推荐某些疫苗（弱毒或灭活疫苗）的做法值得商榷。目前针对所谓新变异毒株的疫苗主要是灭活疫苗，具免疫效果，我个人不太了解。减少养猪生产中抗生素的使用，减少过多种类的疫苗接种，反而是当前提高猪群免疫水平的有

17、效途径之一。袁世山：这种打苗（尤其是应急免疫）后发病的情况可能会出现。主要原因包括：第一，免疫程序（亦即打苗时机及疫苗剂量）不当：严格来说，应急免疫对蓝耳病效果不好，但如果进行，建议越早越好；注苗前已感染的猪肯定是要发病乃至死亡的；另外，因为蓝耳病疫苗保护性免疫应答迟缓，一般需要3-4周才能起作用，在此期间内感染猪也会发病或死亡。第二，慎选疫苗，正规疫苗质量较好，一般无毒力过高或返强问题。杨汉春：关于蓝耳病活疫苗的使用在生产上应慎重，从国家相关单位的试验结果来看，现有的活疫苗对流行的变异毒株的免疫保护率不好；至于变异毒株的灭活苗，已有的数据表明，对变异毒株具有较高的免疫保护率，但在实际生产中的

18、免疫效果如何还需要进一步验证，对其他蓝耳病病毒毒株的免疫效果如何还缺乏实验室数据，因蓝耳病病毒本身就容易变异，不同毒株之间的交叉的免疫保护效果就不是很好，这也是防治蓝耳病的难题所在。至于自家组织苗，我认为规模化猪场可以采用这一措施，用采自猪场本身发病死亡猪的组织制成灭活苗（但要灭活彻底）用于本场猪的免疫，也不失为一种有效的方法，但最好不要用于其他猪场。（樊福好：现任广东省养猪行业协会技术部部长、农业部种猪质量监督检验测试中心基因分析室负责人。）（袁世山：中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病学研究室教授，主持蓝耳病基因工程疫苗研制。）（杨汉春：中国农业大学动物医学院教授，对猪猪蓝耳病和猪圆环病

19、毒病研究方面有很高的造诣。）（摘自：南方农村报）图五蓝耳病导致猪耳朵发绡，母猪流产4非特异性免疫与特异性免疫的比较非特异性免疫与特异性免疫之间有着极为密切的联系。以抗病原体来说，非特异性免疫是基础，它的特点是出现快，作用范围广，但强度较弱，尤其是对某些致病性较强的病原体难以一时消灭，这就需要特异性免疫来发挥作用。特异性免疫的特点是出现较慢，但是针对性强，在作用的强度上也远远超过了没有针对性的非特异性免疫。由于机体在任何时间、任何地点，都有可能接触到各种各样的异物，如果全部都以特异性免疫来对付，机体的消耗就会过大，因此先以非特异性免疫来处理，对机体更为有利。特异性免疫是在非特异性免疫的基础上形成的。例如，进入机体的抗原，如果不经过吞噬细胞的加工处理，多数抗原将无法对免疫系统起到刺激作用，相应的特异性免疫也就不会发生。止匕外，特异性免疫的形成过程,又反过来增强了机体的非特异性免疫。非特异性免疫与特异性免疫区别见表4。表4非特异性免疫与特异性免疫区别范围细胞组成作用时间作用特点作用时间非特异性免疫特异性免疫机体仅对某一异物（抗原）产