初始染菌校正因子测定操作规程

1、一次性使用医用高分子产品初始染菌校正因子的测定操作规程XXXXXXXX公司1、输液（血）器初始染菌数校正因子的测定1.1、 壁校正因子1.1.1 洗脱液的制备：取三套任意规格新制备的样品，在净化操作台上，分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水在管路内往复运行数十次以上。将冲洗液在无菌的状态下置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。1.1.2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121c高压灭菌20分钟，放入55c左右的水浴中备用。1.1.3 接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫

2、升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50c左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。1.1.4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35C恒温箱中培养48小时。1.1.5 菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。重复1.1.1-1.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。1.1.6 内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液

3、得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。1.2、 外壁校正因子1.2.1 洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。重复上述1.1.2-1.1.6操作。即得到外壁校正因子。1.3、 琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50c左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取

4、平均数，乘以样品总长度（cm）,再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。表1输血器校正因子测定数据表测定项目第一次洗脱第二次洗脱第三次洗脱第四次洗脱琼脂覆盖第一次洗脱去除率%平均去除率校正因子内壁：外壁：表2输液器校正因子测定数据表测定项目第一次洗脱第二次洗脱第三次洗脱第四次洗脱琼脂覆盖第一次洗脱去除率%平均去除率校正因子内壁外壁：检验：复核：日期：2006/1/142、穿刺针初始染菌数校正因子的测定2.1、 壁校正因子2.1.1 洗脱液的制备：选取1个批次新制备的穿刺针样品15套，分成三份，每份5套为一组样品。在净化操作台上，每组产品分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水

5、在管路内往复运行数十次以上，然后将冲洗液置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。2.1.2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121c高压灭菌20分钟，放入55c左右的水浴中备用。2.1.3 接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50c左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。2.1.4 培养：待上述培养基冷

6、却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35C恒温箱中培养48小时。2.1.5 菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。重复2.1.1-2.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。2.1.6 内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。2.2、 外壁校正因子2.2.1 洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即

7、盖好备用。重复上述2.1.2-2.1.6操作。即得到外壁校正因子。2.3、 琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的穿刺针样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50c左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（cm）,再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。测定结果详见表3。表3穿刺针校正因子测定数据表测定项目第一次洗脱第二次洗脱第三次洗脱第四次洗脱琼脂覆盖第一次洗脱去除率%平均去除率内壁：外壁:内壁：外壁：检验:复核:日期：2006/

8、1/4校正因子3、头皮针、采血针初始染菌数校正因子的测定3.1、 壁校正因子3.1.1 洗脱液的制备：选取三个批次的样品，每个批次各选10套（采血针20套）样品，在净化操作台上，去掉针套同时插在密闭的生理盐水瓶盖上，用力挤压，将挤出液收集到已事先灭菌的具塞三角瓶中，每批产品共收集15毫升洗脱液，立即盖好备用。3.1.2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121c高压灭菌20分钟，放入55c左右的水浴中备用。3.1.3 接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，

9、将约10-15毫升已融化的50c左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。3.1.4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35C恒温箱中培养48小时。3.1.5 菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。重复3.1.1-3.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。3.1.6 内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到

10、第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。3.2、 外壁校正因子3.2.1 洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。重复上述3.1.2-3.1.6操作。即得到外壁初始染菌数的校正因子。3.3、 琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将10-15毫升50c左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每批样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（cm

11、）,再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。表4头皮针校正因子测定数据表测定项目第一次洗脱第二次洗脱第三次洗脱第四次洗脱琼脂覆盖第一次洗脱去除率%平均去除率内壁：外壁：校正因子内壁：外壁：表5采血针校正因子测定数据表测定项目第一次冲洗第二次冲洗第三次冲洗第四次冲洗琼脂覆盖第一次冲洗去除率%平均去除率内壁：外壁：校正因子内壁：外壁：检验:复核:日期：2006/1/64、管类产品初始染菌数校正因子的测定4.1 洗脱液的制备：选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀（导丝用玫瑰剪）剪成大约1厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加15-50毫升（可根据样品本身的大小确定）生

12、理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。4.2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克,加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121c高压灭菌20分钟，放入55c左右的水浴中备用。4.3 接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50c左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。4.4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35C恒温箱中培养48小时。4.5 菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。重复4.1-4.5步，分别进行第二次、第三次、第四次冲洗，将各次洗脱液中的菌落数填入数据表中。4.6 校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数