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1、临床免疫学检验1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能2、免疫防御对外；免疫自稳防自身免疫病；免疫监视防肿瘤.3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、 脾脏最大、黏膜相关淋巴组织4、B细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原,介导 体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 外表标志：膜免疫球蛋白SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体.成熟B细胞：CD19 CD2Q CD21 CD22 成熟 B细胞的 mIg主要为mIgM和mIgD同时检 测CD5分子,可分为B1细胞和B2细胞.B细胞功能检测方法： 溶血空斑形成试验体液免疫功能.5、T细胞：介导细胞免疫.共同外

2、表标志是CD3多链糖蛋白；辅助T细胞的标志是CD4; 杀伤T细胞的标志是 CD& T细胞受体=TCRT细胞和NK细胞的共同外表标志是 CD2绵羊红细胞受体；CD讣CD什CD8-=辅助性T细胞ThCD讣CD4- CD计=细胞毒性T细胞Tc或CTD T细胞介导的细胞毒试验CD务CD2计=调节性T细胞Tr或Treg T细胞功能检测： 植物血凝素PHA刀豆素CONA刺激T细胞增殖.增殖试验有：形态 法、核素法.T细胞亚群的别离： 亲和板结合别离法,磁性微球别离法,荧光激活细胞别离仪别离法*E花环试验是通过检测SRBCM体而对T细胞进行计数的一种试验；6、NK细胞：具有细胞介导的 细胞毒作用.直

3、接杀伤靶细胞肿瘤细胞和病毒感染的细胞外表标志：CD16 ADCC、CD56测定人NK细胞活性 的靶细胞多用 K562细胞株,而测定小鼠 NK细胞活性那么常采用 YAC-1细 胞株.7、吞噬细胞包括：单核-吞噬细胞系统 MPS外表标志CD14包括骨髓内的前单核细胞、外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞和中性粒细胞.表达MHC1类分子8、人成熟树突状细胞 DQ 专职抗原呈递功能：外表标志为CD1a CD11c和CD839、免疫球蛋白可分为分泌型sIg ,主要存在于体液中,具有 抗体功能及膜型mIg,作 为抗原受体 表达于B细胞外表,称为膜外表免疫球蛋白10、免疫球蛋白按 含量多少排序：IgG>

4、;IgA >IgM>IgD>IgE五类按重链恒定区抗原性CH 排序免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法.11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区CH CD12、抗体由浆细胞产生.抗体分子上VH和VL 高变区是抗原结合部位.13、IgG:血清中含量最高的免疫球蛋白IgG1最高,血液和细胞外液中的主要抗体.也 是再次免疫应答 的主要抗体,是 唯一能通过胎盘的抗体,大多数抗菌抗体、抗病毒抗体是 IgG,某些自身抗体及超敏n型抗体是IgG,免疫学检测中第二抗体也以IgG为主.14、IgA：分血清型单体存在及分泌型；分泌型 IgA sIgA 为二聚体,性能稳定,主 要

5、存在于胃肠道、支气管分泌液、初乳、唾液、泪液中,局部浓度高,是参与 黏膜局部免疫的主要抗体.15、IgM：为五聚体,主要存在于血液中,是 Ig中分子量最大的又称巨球蛋白.个体发 育最早合成和分泌的抗体.抗原刺激后体液免疫应答中最先产生的抗体,感染过程中血清IgM水平升高,说明 近期感染.新生儿脐血中假设IgM增高,提示有宫内感染.16、IgE：为单体结构,正常人血清中 含量最低.IgE为亲细胞抗体,介导 I型超敏反响. 特异性过敏反响和寄生虫早期感染患者血清中可升高.17、补体：具有酶样活性的球蛋白肝细胞、巨噬细胞产生；激活途径主要有三种：经典途径以结合抗原后的IgG或IgM类抗体为主要 激活

6、剂双链 DNA , C1C9全部参与、 替代途径病原微生物 细胞壁成分脂多糖直接激活补体 C3,然后完成C5C9的激活过 程、M3堆径由急性炎症期产生的甘露糖结合凝集素MBQ与病原体结合后启动激活.18、补体系统中 C3含量最多,C2含量最少.19、灭活：加热56 C30分钟,补体丧失活性20、补体去除免疫复合物的方式：吞噬调理；免疫粘附；免疫复合物抑制.21、完全抗原=反响原性+免疫原性.半抗原=反响原性无免疫原性22、抗原抗体结合力 分子间引力：静电吸引、范德华力、氢键、疏水作用力最强23、抗原抗体反响 的四大特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性；受反响条件如温度、 pH电解质、抗原抗体比

7、例等的影响.24、抗体过量一一前带；抗原过量一一后带钩状效应25、抗原抗体反响 可分为两个阶段：第一阶段 为抗原与抗体发生特异性结合的阶段, 此阶段 反响快,仅需几秒至几分钟,但不出现可见反响；第二阶段为可见反响阶段,此阶段反响慢, 往往需要数分钟至数小时.26、颗粒性抗原出现凝集反响.可溶性抗原出现沉淀反响.单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象.27、木瓜酶水解IgG为2Fab+Fc；胃蛋白酶水解IgG为Fab2+nFc.28、最常用于免疫动物的佐剂是弗氏佐剂,弗氏佐剂分为弗氏完全佐剂弗氏不完全佐剂加卡介苗和弗氏不完全佐剂两种.29、R 兔子型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体,抗原抗体

8、反响比例适宜范围较宽,适于作诊断试剂.H 马型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体,抗原抗体反响比例适宜范围较窄,一般用作免疫治疗.30、抗血清常见保存条件：2-8 C保存；冷冻保存最常用；真空枯燥保存5-10年.31、杂交瘤细胞 放入液氮-196C前,需要 逐步降温.复苏细胞时,从液氮罐内取出冻存 管,立即浸入37 c水浴.32、凝集反响分为两个阶段：抗原抗体的特异性结合；出现可见的颗粒凝聚.33、直接凝集反响：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原,在适当的 电解质0.85%氯化钠 参与下可直接与相应抗体结合出现凝集.抗原=凝集原,抗体=凝集素.34、玻片凝集试验：主要用于抗原的定性分析, AB0

9、血型的测定.试管凝集试验：肥达氏试验、外斐试验、输血交叉配血试验；35、正向间接血凝反响PHA :红细胞包被 抗原,用以检测抗体.凝集反向间接 血凝反响RPHA :红细胞包被 抗体,用以检测抗原.凝集36、间接血凝抑制试验：可用于检测抗体、自身抗体、变态反响性抗体,也可测定抗原.不 凝集37、金黄色葡萄球菌 A蛋白SPA -协同凝集反响反向间接凝集38、血凝试验载体为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞可在微量滴定板或试管中进行,将标本倍比稀释,一般为 1:64 ,同时设不含标本的稀释液为对照孔.凡红细胞沉积 于孔底,集中呈一圆点 的为不凝集.如红细胞 凝集,那么分布于孔底 周围.39、胶乳凝

10、集试验间接凝集,所用载体为 聚苯乙烯胶乳；明胶凝集试验间接将病毒 抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒：HIV-1抗体和抗精子抗体检测40、抗球蛋白试验,又称 Coombs试验,是检测抗红细胞 不完全抗体的一种很有用的方法. 包括直接Coombs试验检测红细胞上的不完全抗体 和间接Coombs试验游离在 血清中的 不完全抗体41、沉淀反响分两个阶段：第一阶段 为抗原抗体发生特异性结合,几秒到几十秒即可完成,出现可溶性小的复合物,肉眼不可见.第二阶段 为形成可见的免疫复合物,约需几十分钟到数小时才能完成,如沉淀线、沉淀环.絮状沉淀试验：抗原抗体溶液在电解质的存在下结合,形成絮状沉淀物, 这种絮状沉

11、淀受抗原和抗体比例的直接影响,因此 常用来作为测定抗原抗体反响最适比例的方法.42、免疫比浊：最适pH为6.58.5 ,磷酸盐缓冲液.R型抗体,增浊剂如聚乙二醇PEG、 吐温-20.适合于 大批量标本 的检测.当反响液中 抗体过量 时,IC的形成随着抗原递增而增加,至抗原、抗体最适比例处达最高 峰,这就是经典的海德堡曲线理论.当抗原过量 时,形成的IC 免疫复合物分子小,而且会发生再解离,使浊度反而下降,光散射亦减少,这就是高剂量钩状效应.43、单向扩散试验 是在琼脂内混入抗体,测抗原.Mancini曲线适用大分子抗原和长时间扩散48小时的结果,沉淀环直径的平方与抗原浓度呈线性关系.Fahey

12、曲线适用于小分子抗原和较短时间扩散的结果处理,用半对数值画线,浓度对数与 扩散环直径呈线性关系.双向扩散试验 是对抗原或抗体进行定性分析.沉淀线如果靠近抗原孔,那么表示抗体含量较大沉淀线如果靠近抗体孔,那么表示抗原含量较大.不出现沉淀线 那么说明无对应的抗体或抗原 或者抗原过量.* 分子量小者扩散快,反之那么较慢.由于慢者扩散圈小,局部浓度那么较大,形成的沉淀线弯向分子量大的一方.如果两者分子量大致相等,那么形成直线.* 两条沉淀线互相吻合相连 ,说明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀,两个抗原相同沉淀线呈局部相切,说明两个抗原之间有局部相同.两条沉淀线交叉而过,说明两个抗原完全不同.* 出

13、现沉淀线最高的抗体稀释度为该抗体的效价.* 出现一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯. 出现多条沉淀线说明不纯.44、对流免疫电泳双向免疫扩散 与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术：抗体流向负 极,抗原流向正极；最适比例出现沉淀线.火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术,实质上是加速的单向扩散试验.抗体混合于琼脂 中,样品孔中的抗原置于负极端,电泳时抗体不移动,抗原向正极泳动,随着抗原量的逐渐减少,抗原泳动的基底区越来越窄,抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄,形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰.顶部呈不清楚的云雾状或圆形,那么表示未达终点.免疫电泳技术：区带电泳 +免疫

14、双向扩散.用于纯化抗原和抗体成分的分析免疫固定电泳：电泳+沉淀反响技术,可用于各种蛋白质的鉴定M蛋白的鉴定与分型, 也用予尿液中本-周蛋白的检测及K、入分型,脑脊液中寡克隆蛋白的检测及分型.45、RIA 放免核素125 1标记抗原,竞争抑制标记抗原和非标记抗原竞争 限量抗体, 反比关系；IRMA 免疫放射核素标记抗体,非竞争结合过量标记抗体,反响速率比RIA 快,灵敏度明显高于 RIA,正比关系.* RIA可以测定大分子和小分子抗原,但IRMA那么只能测定至少有两个抗原决定簇的抗原.46、常用的荧光素有： 异硫氟酸FITC,最大吸收光波长 490495nm黄绿色,最常用； 四乙基罗丹明RB20

15、Q最大吸收光波长为 570nn橘红色；四甲基异硫鼠酸罗丹明TRITC,最大吸引光波长为 550nm橙红色；藻红蛋白R-R日橙色.其他：铺Eu3+47、荧光标记蛋白的常用方法：搅拌法和透析法.荧光抗体效价鉴定：抗原含量为1g/L时,抗体效价?1: 1648、时间分辨荧光 免疫测定TRFIA以系元素如：铺化合物为荧光标记物.49、偏振免疫测定的偏振波长是485nm 蓝光.不适宜测定大分子物质.50、荧光酶免疫：由于使用酶和荧光底物的化学反响作为放大系统,故灵敏度大大提升.51、均相法：不别离,直接测用于小分子激素和半抗原如药物的测定；酶放大免疫 测定技术EMIT最早用于临床.酶标半抗原.EIA:异

16、相法：先别离,后测定.固相酶免疫测定如ELISA52、酶联免疫吸附试验ELISA辣根过氧化物酶 HRP :底物1邻苯二胺OPD , 2四甲基联苯胺TMB ELISA 中应用最广泛的底物.HRP记抗体或抗原的最常用方法一一改良过碘酸钠法碱性磷酸酶ALP:底物：对-硝基苯磷酸脂p-NPP3-半乳糖昔酶3 -Gal:底物：4-甲基伞酮基-R-D半乳糖昔4-MUU 必要的试剂：固相的抗原或抗体；酶标记的抗原或抗体；酶反响的底物.抗原测定：蛋白大分子抗原用得最多的是 双抗体夹心法HBsA0.只有单个抗原决定簇的 小分子,那么使用竞争抑制法.抗体测定：通常使用间接法HCM HIV、双抗原夹心法HBsAD、

17、竞争法HBcAb> HBeAb 和捕获法IgM等*待测孔最后显示的 颜色深浅 与标本中的待测抗原或抗体呈正相关的是：双抗体夹心法、双位点一步法、间接法测抗体；*封闭：1%- 5%勺牛血清白蛋白或 5%20%、牛血清.53、化学发光底物 有：直接化学发光剂：口丫咤酯和三联毗咤钉；酶促反响发光剂：标记酶HRP鲁米诺及其衍生物、标记酶为碱性磷酸酶AMPPD54、免疫印迹实验中常选用多克隆抗体.55、外周血单个核细胞的别离的分层液常用：Ficoll 由上到下为血浆,单个核细胞,粒,红和Percoll 由上至下：死细胞,单个核细胞,淋,红,粒.56、纯淋巴细胞群的采集有：黏附贴壁法,吸附柱过滤法,

18、磁铁吸引法,Percoll别离液法.57、T细胞和B细胞的别离：E花环沉降法,尼龙毛柱别离法58、淋巴细胞 活力测定：台盼蓝染色法,死细胞为蓝色.59、CD4是HIV受体,HIV感染时CD"CD8比值明显降低.60、CD" CD8升高常见于自身免疫性疾病；而CD犷CD8降低常见于病毒感染、恶性肿瘤和 再生障碍性贫血等.61、 ELISA双抗体夹心法是用于细胞因子测定的最常用方法.62、流式细胞仪：前向散射光FS反映颗粒的大小.侧向散射光SS反映颗粒内部结构 复杂程度、外表的光滑程度.荧光FL反映颗粒被染上荧光局部数量的多少.63、免疫荧光标记最常用的荧光染料：异硫氟酸荧光素

19、FITC亮绿色荧光.德州红红色荧光.藻胆蛋白类橙色至红色荧光.64、临床上常用三色荧光抗体标记将CD3-CD16+CD56+巴细胞确定为 NK细胞.65、AIDS患者的一个特征性免疫诊断指标表现为：T淋巴细胞总数减少,T细胞亚群CD4Th/CD8Tc比例倒置,Th/Tcv 1.0 , Th细胞数量显著下降甚至测不出,而Tc细胞数量可正常或增加,NK细胞减少或活力下降,B淋巴细胞群那么处于正常范围.65、强直性脊柱炎 HLA-B2766、SLE患者以IgG、IgA升高较多见.类风湿关节炎患者以IgM增高为主.67、M蛋白MP是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖>30g/L所产生的一种在氨基酸

20、组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白.多无免疫活性,故又称副蛋白.临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等68、M蛋白-最根本方法：血清蛋白区带电泳技术M蛋白-粗筛试验：血清 免疫球蛋白定量 单向琼脂免疫扩散法和免疫比浊法M蛋白-鉴定,首选方法：免疫固定电泳IFE技术区带电泳技术与特异性抗血清的免疫 沉淀反响相结合是临床最常用的方法.69、IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、矽肺70、CSF中的浓度：IgG>IgA>IgM.神经系统肿瘤时,以 IgA和IgM升高为主.感染、血管病变、系统性疾病 =IgG升高71、本-周蛋白即尿中游离的免疫球蛋

21、白轻链.尿中可测得,血中呈阴性 原因是本-周蛋白分子量小,极易迅速自肾脏排出,血中含量并不升高72、冷球蛋白又称冷免疫球蛋白,在-4 C时发生沉淀,于 37 c时又复溶解.采血是冷球蛋 白检测的关键,宜在体温条件下采集和保存静脉血.73、补体结合试验CFT ,梅毒的诊断,华氏反响.74、非均相荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定法.均相荧光免疫测定：荧光偏振免疫测定法.75、链球菌感染：ASO胶乳凝集试验、免疫散射比浊法76、伤寒沙门菌有菌体.抗原、鞭毛H抗原和外表Vi抗原.肥达反响,效价A 1:80 为阳性77、卡氏肺抱菌,又称卡氏肺抱子虫,为类真菌.78、I型超敏反响：由特异性IgE抗体介导

22、产生,其发生速度最快.青霉素、支气管哮喘 提升Th1细胞活性,减少IL-4的分泌,可降低IgE的产生,阻断IgE介导的I型超敏反响. 参与I型超敏反响：肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞.79、n型超敏反响：又称细胞毒型或细胞溶解型超敏反响,它是由靶细胞外表的抗原与相应IgG或IgM类抗体结合后,在补体细胞溶解、巨噬细胞吞噬和NK细胞ADCC乍用参与下,引起的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反响.输血反响、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血细胞减少症、肺出血肾炎综合征、甲状腺功能亢进80、出型超敏反响：由可溶性 免疫复合物 沉积于局部或全身多处毛细血管基底膜,通过激活补体,

23、并在 血小板、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞 等的参与下,引起的以充血水肿、局部坏死 和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反响和组织损伤. Arthus反响、类Arthus反响、血 清病、链球菌感染后肾小球肾炎、类风湿关节炎、SLE /81、IV型超敏反响：又称迟发型超敏反响DTH ,是效应T细胞与特异性抗原结合后,引起的以单个核细胞浸润和组织损伤 为主要特征的炎症反响.细胞免疫效应性CD4+Th1细胞识别抗原后活化,可释放 IFN-丫、TNF淋巴毒素LT、IL-3、GM-CSF单核细胞趋化蛋白-1 MCP-D等多种细胞因子.接触性常见IV型超敏反响性疾病：感染性迟发型超敏反响结核分枝杆菌、病毒、原虫、

24、皮炎、移植排斥反响.结核菌素皮试、斑贴试验82、变性的IgG可刺激机体产生抗变性 IgG抗体类风湿因子83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗体,该抗体可以缩短血小板的寿命.84、抗乙酰胆碱受体抗体：对重症肌无力MG具有诊断意义.85、毒性弥漫性甲状腺肿 患者血清中有 抗促甲状腺激素受体TSHR的IgG型自身抗体.甲 状腺功能的亢进86、多发性肌炎是以损害肌肉为主要表现的自身免疫性疾病,如果同时有皮肤损害, 那么称为皮肌炎.87、75%勺PSS患者有抗核抗体阳性, 抗Scl-70抗体是PSS的特异性抗体,80%- 95湖局限 性硬皮病患者抗着丝点抗体阳性.88、自身免疫病AID的特征：高滴度自身

25、抗体,病理特点为免疫炎症损伤与抗原分布一 致,能建动物模型.89、抗DNM体抗核蛋白抗体通常完全被DN用口组蛋白吸收,是形成 狼疮细胞的因子.90、ANA阳性的荧光现象分：核膜型、均质型、斑点型、核仁型.ANA常为自身免疫病的初筛试验.91、ENA是可提取核抗原的总称,分子中 不含DNA92、抗dsDN丽体对SLE有较高的特异性. 抗SmC体也是SLE的特异性标志之一.此两项 常为SLE确诊指标.对疑为 SLE的患者,应先进行 ANA和抗dsDNAt体的检测,当 ANA 和或抗dsDNA抗体阳性时,再作抗 ENAfet体谱的检测.如有抗 Sm抗体和或抗 RNP 抗体阳性,可实验室诊断为SLE9

26、3、抗核RNM体：为MCTD混合性结缔组织病的诊断指标.94、抗SSAB SSB抗体：为枯燥综合征SS的诊断指标.当 ANA阳性而抗dsDNA抗体 阴性,抗ENAfet体谱中抗SsA抗体和或抗ssB抗体阳性,可实验室诊断为枯燥综合征. 95、抗Jo-1抗体：多发性肌炎PM患者常为阳性.96、抗Scl-70抗体：进行性系统性硬皮症 PSS的诊断指标.97、NCA原发性小血管炎的特异性血清标志物98、内风湿性关节炎RQ :自身抗体有 RF、抗角蛋白抗体AKA、抗环瓜氨酸肽抗体 anti-CCP .99、Farr法测定dsDNAfet体的特异性高,为公认标准法,当抗dsDNAfet体结合率大于 20%时对SLE有意义.100、抗线粒体抗体AMA :原发性胆汁性肝硬化101、巨球蛋白血症：以分泌IgM的浆细胞恶性增殖