完整版细菌学检验

1、细菌学检验重点第一章细菌学实验的基本要求1、实验室生物安全(Laboratorybiosafety):实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，可避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相差法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。2、生物安全防护基本要求实验室生物安全防护(biosafetyprotectionforlaboratories)-实验对象：致病的微生物及其毒素-综合措施：实验室设计建造、个体防护设施、工作及操作程序和规程等-确保：实验室工作人员不受实验对象侵染，周围环境的生物安全。实验室生物安全通用原则?积极防止操作者在污染的环境中接触生物危害物；?主动封闭生

2、物危害材料产生之源，防止从操作部位向周围环境释放；?尽量减少生物危害材料向周围环境意外释放所造成的后果。3、实验室必须设有专职的生物安全负责人实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。生物安全等级?生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级。-实验室生物安全防护要求：一级最低，四级最高。4、在主实验室合理设置清洁区、半污染区和污染区5、各级生物防护实验室特点?一级生物安全防护实验室(BSL-1/P1):适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。?二级生物安全防护实验室(BSL-2/P2)实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境

3、具有中等潜在危害的微生物。在处理危险度2级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志。?三级生物安全防护实验室(BSL-3/P3):适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。?四级生物安全防护实验室(BSL-4/P4):适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。6、控制措施?安全设备和个体防护是实验室工作人员与致病微生物及其毒素直接接触的一级屏障。?所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，都必须在生物安全柜内进行。7、生物安全

4、柜(BS。biosafetycabinet(概念、分级及特点)?具备气流控制及高效空气过滤装置的操作柜，可有效降低实验过程中产生的有害气溶胶对操作者和环境的危害。(净化排气)?根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为I、n、出级3种类型。?实验室应按要求分别配备I、n、出级生物安全柜。I级生物安全柜：外部空气?保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。n级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气?既保证工作人员不受侵害，也保证实验对象不受污染；m级生物安全柜：经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气8、生物安全柜和超净工作台的区别超净工作台：保护样品，不保护操作者和环境生物安全柜

5、：保护操作者、环境以及实验材料正压、简单负压、复杂?不能以净化工作台代替生物安全柜，反之则可以。9、标准的细菌等微生物操作要求?实验室负责人.工作人员洗手、工作区域不允许吃/喝/抽.戴护目镜或面罩、食物储存?禁止口吸吸管、减少飞溅物/气溶胶、工作台表面的去污/灭活、废物去污后处理10、注：高压蒸汽灭菌：负责消毒者不准离开消毒室。制备培养基.?无菌操作.、使用酒精灯、灭菌吸管.10倍递增稀释.无菌操作；三三制：稀释三级，每一稀释度用三个平行平板；取供试液加注于平皿时，供试液须充分混匀。培养基倾注于平皿：45c±1C、整个操作过程应在lh内完成、无菌检验.第二章、细菌学检验基本技术临床样

6、本的采集与送检样本采样时间采样方法注意事项血骨髓发病早期、急性期或症状典型时成人10ml,儿童35ml;骨髓1样本切勿冰箱存放；尤的操作；2ml。废弃物局压灭菌。尿液晨起1得加防腐剂或消毒剂。幺也甘口脓血、黏液的粪便；絮状物；粪便急性期十口7#7直肠拭子尢菌采样；新鲜；立即送检。痰上呼吸道样本日f自然喙痰、支气管镜、就口晨间E、上.漱口；胃内米痰法等：无限制自小件?立即送检或4c保存。鼻咽拭子1、食品样本采集原则根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。?随机采样一代表性?无菌操作，防污染。（外源性污染、样本变质和细菌生长）?食物中毒时，采集可疑食物样本。2、食品

7、样本采集种类?大样、中样、小样。- 大样：一整批样本。- 中样：从样本各部分所取得的混合样本，一般为200g。- 小样：分析用，检样，25go注：检验结果报告后，剩余样品或同批样品不进行微生物项目的复检3、细菌的形态结构检查法借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。- 在细菌检验中极其重要，是细菌分类和鉴定不可缺少的组成部分?样本中有无细菌及其大致的数量。?细菌的形态、大小、排列、结构和染色反应性。?培养物是否为纯种。?普通光学显微镜(0.2mX1000=0.2mm)细菌染色样本；弱光下用于不染色样本活菌的运动情况?暗视野显微镜(0.04m50倍)不染色样本活菌的形态?相差显微镜

8、：活体细胞的外形和运动方式；细胞内部某些细微结构及这些结构的数量4、不染色检查：主要用于观察细菌的动力-有鞭毛的细菌为真正运动-无鞭毛的细菌则为布朗运动(即分子运动)染色检查细菌染色一显微镜观察。常用的细菌染料：人工合成带苯环的染料，色基+助色基单纯染料：苏丹染料酸性染料：伊红、酸性品红、刚果红等碱性染料：美蓝、孔雀绿、甲紫和碱性复红等复合染料：姬姆萨染料、瑞氏染料等5、单染色法：用一种染料染色，使各种细菌均染成同一颜色。操作简单，易于使用。只能显示细菌的形态及大小。如用美蓝或稀释石炭酸复红等6、复染色法：用两种以上染料染色细菌，显示细菌形态大小，鉴别细菌种类- 鉴别染色法：革兰染色法、抗酸染

9、色法- Grams染色操作步骤：初染、媒染、脱色、复染-抗酸染色法：抗酸菌：分枝杆菌/分枝菌酸。一般不易着色，一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色。经过加热和延长染色时间来促使抗酸菌着色。步骤：初染、脱色、复染7、负染色法：背景着色而细菌本身不着色。?细菌荚膜常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)，背景呈黑色，菌体染成蓝色，荚膜不着色，包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。?该法具有快速、经济、简便易行、高度反差、分辨率高的特点。8、培养基的种类-按物理性状分?液体培养基：增菌、作生化试验等?半固体培养基：观察细菌的动力、分类鉴定、保存菌种及噬菌体效价滴定等。琼脂用量为0.5%1%?固体培养基：主要用

10、于分离培养；平板、斜面、高层及高层斜面；琼脂用量为1.5%2%9、培养基的种类-按用途分?基础培养基(basicmedium)营养培养基(nutrientmedium)增菌培养基(enrichmentmedium)?选择性培养基(selectivemedium)鉴别培养基(differentialmedium)专用培养基(dedicatedmedium)10、增菌培养基：多为液体。T目的菌，J杂菌。营养成分+抑制物质选择性增菌培养基；非选择性增菌培养基?7.5%NaCl肉汤：金葡增菌11、鉴别培养基：几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同，其菌落的生长特征(颜色、形状等)不同而被区分开。

11、+某些特定的化学物质?鉴别和区分不同细菌12、制备培养基的一般程序?调配溶化；矫正pH；C3过滤澄清；04分装；岔灭菌；C6检定13、平板划线接种法?平板划线接种法是常用的细菌分离培养方法。?使样本或培养物中混杂的多种细菌分开成长为单个菌落，并根据菌落的形态和特征，挑选所需的单个菌落，经移种获得纯种细菌。?不同的细菌在平板上所形成的菌落有其固有的形态特征，可以作为细菌鉴定的依据之一。14、平板划线方法?分区划线接种法；曲线/连续划线接种法；棋盘格划线接种法；放射法；四格法；平板涂布接种法15、分区划线接种法：多用于含菌数量较多样本的细菌分离16、半固体培养基：可用于观察细菌动力和保存菌种。17

12、、菌落：细菌经一定时间培养后，在固体培养基表面所形成的，肉眼可见的物体（群落）。18、菌落特征?菌落形状；大小：mm表面性状；边缘情况；颜色；透明度；质地；粘度；乳化性.等19、细菌在鉴定培养基上的特征?溶血特征；卵黄；蛋白；色素；气味?在血平板上的溶血特征?”溶血：狭窄的草绿色的半透明区域?3溶血：完全透明清楚的宽带?丫溶血：看不到溶血带的溶血?卵黄琼脂中的反应：检查细菌是否产生卵磷脂酶和脂酶?卵磷脂酶：降解卵黄，菌落周围出现沉淀环?脂酶：出现“珍珠包膜”?蛋白水解作用：在菌落周围出现清晰的环。?色素水溶性色素溶在培养基中，使培养基着色。绿脓色素、荧光色素等；脂溶性色素则使细菌菌落着色。金黄

13、色葡萄球菌的金黄色菌落。?气味假单胞菌属细菌一葡萄汁气味；变形杆菌一巧克力烧焦的臭味；链球菌一地窖里的霉臭；梭菌一粪臭、腐败味；产黑色素类杆菌属细菌-辛辣味20、细菌的生化反应试验不同的细菌一一不同的酶系统一一不同的新陈代谢产物一一产物不同的生化特性一一鉴别细菌的类别21、糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解XX糖产酸、广气酸性变色、无气泡分解XX糖产酸、/、产气珞加生小X色不分解XX糖22、甲基红（MR）试验：检查细菌发酵葡萄糖产生并保持稳定的酸性终末产物和克服体系缓冲作用的能力。-分解葡萄糖一丙酮酸一乳酸、乙酸、甲酸等一培养基的pHjV4.5+甲基红指示剂一红色：阳性;-

14、分解葡萄糖一产酸少一培养基pH较高+甲基红指示剂一黄色：阴性。23、3-半乳糖甘酶试验：预测细菌发酵乳糖的能力。?3-半乳糖甘酶：一种能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。?发酵乳糖的大肠菌类能产生3-半乳糖甘酶-渗透酶（P）和3-半乳糖甘酶（G）24、靛基质（口引喋）试验?分解：蛋白月东中的色氨酸一口引喋?口引喋十二甲氨基苯甲醛一玫瑰口引喋（红色）25、硫化氢试验?分解：含硫氨基酸一H2S?HbS+铅或铁离子f黑色硫化物。26、触酶试验?过氧化氢酶又称触酶，可使细菌代谢过程中的过氧化氢分解为水和氧。27、血浆凝固酶试验?金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，附着于细菌表

15、面，产生凝固。?玻片法：与细胞壁结合的凝固酶?试管法：菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶28、血清学鉴定serologicalidentity:确定致病菌的种或型?未知纯种细菌+已知特异性抗体?常用方法：玻片凝集试验、免疫荧光、协同凝集、对流免疫电泳、酶免疫、间接血凝、乳胶凝集29、血清学诊断?辅助诊断：抗原性较强的病原菌和病程较长的传染病。抗体有无及其抗体效价变化-已知的细菌/特异性抗原+特异抗体?常用方法：试管凝集试验。- 直接凝集试验、显微镜凝集试验、沉淀试验、乳胶凝集试验、ELISA、免疫荧光试验等。- 急性期和恢复期双份血清样本，恢复期的抗体效价比急性期升高4倍或4倍以上。30、细

16、菌毒素的检测方法?外毒素- 细菌外毒素的免疫血清（抗体）+被检细菌培养物滤液（抗原）- 细菌外毒素（抗原）+被检患者血清- 动物试验?内毒素-家兔热原试验，赏试验，免疫学方法、生物学方法、化学发光法、流式细胞术、高效液相色谱31、赏试验（limulustest,LT）:定量及半定量检测细菌内毒素；?血液中含有一种独特的有核变形红细胞，红细胞裂解物+内毒素-凝胶32、细菌数量的测定：物理计数法；生物计数法物理计数法细菌总数计数法：利用工具和仪器对样本中的细菌进行计数，其结果表示样本中的所有细菌（活国+死困）O?Breed计数法：Directmicroscopiccount?比浊管计数法：细菌悬液

17、的浊度与菌数成正比?分光光度计测定法：吸光度同细菌总数成正比生物计数法活菌计数法：利用各种培养方法本测样本中细菌的数目，计数培养基上生长的菌落数=样本中活菌数。?半定量计数法；倾注平板法；旋管计数法；滴液计数法；琼脂表面计数法；膜滤过计数法；微菌落快速计数法；最可能数（MPN）的估计33、L-型细菌检查Lformsbacterium:一种细菌通过变异而产生的细胞壁缺陷型。-必须在高渗溶液中方能存活，并失去原有形态而变成圆球形或多形性。-致病？第四章、细菌的分型及其检验技术1、细菌分型一“传统方法”?仅进行病原的菌种鉴定是不够的，需要进一步的分型诊断。血清学分型；生物化学分型；噬菌体分型；细菌素

18、分型；耐药谱分型；质粒图谱分型；PCR技术；染色体酶切物脉冲场凝胶电泳分型2、噬菌体的作用具有高度特异性（种、型）?一种噬菌体只能裂解一种或与该种相近的细菌，故可用于细菌的分类鉴定。?用己知型噬菌体鉴定细菌，可对细菌进行分型。3、毒性噬菌体：VirulentPhage:能在宿主菌细胞内复制、增殖，产生许多子代噬菌体，最终裂解细菌。4、温和噬菌体：TemperatePhage：与宿主菌的染色体整合，随细菌DNA勺复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产生子代噬菌体。5、噬菌斑（plaque）?在液体培养基中，噬菌体可使浑浊的菌液变为澄清；?在固体培养基上，噬菌体对宿主菌细胞的裂解作用可使菌落溶解，导

19、致在带菌琼脂平板上产生空斑，易于观察,称噬菌斑（plaque）。6、噬菌体的效价测定?噬斑形成单位（pfu）的测定：若将噬菌体按一定倍数稀释，通过噬斑计数，可测定一定体积内的噬斑形成单位（plaqueformingunits,pfu）数目，即噬菌体的数目。7、细菌素分型技术?细菌素（bactericin）:某些细菌产生的蛋白质类抗菌物质，这种物质只对产生菌亲缘关系近的细菌有抗菌作用，而对产生菌本身不敏感。?细菌素是蛋白质，质粒控制，多处于抑制状态。?细菌素的应用主要是细菌的分型和流行病学调查，是血清学分型的补充。8、药敏试验（drugsusceptibilitytest）-在体外测定抗菌药物抑

20、制或杀死细菌能力的试验。-抗菌药物：具有杀菌或抑菌活性的抗生素和化学合成药物。9、药敏试验方法?纸片法：测定抑菌环大小，其结果以敏感、中度敏感、中介度、耐药表示。?稀释法：找出能抑制细菌生长的最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC表示。?E试3佥（E-test）:最小抑菌浓度MIC:在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度。最小杀菌浓度MBC杀死99.9%（降低3个数量级）的供试微生物所需的最低药物浓度10、纸片扩散法?是国际上推荐使用的标准实验方法；细菌耐药谱分析中最常用的方法。?原理：将含定量抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表面，培养后，形成一个透

21、明抑菌环。抑菌环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度，与MIC成反比。?0.5麦氏比浊度=1X108cfu/ml?结果判断：针对抑菌环直径测量值报告敏感、中介或耐药。-敏感（S）：被测细菌所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈。-中介（I）-耐药（R）:被测细菌不能被常用剂量抗菌药物抑制，或具有特定耐药机理，临床治疗效果不佳。11、肉汤稀释法?原理：将药物按一定规律用M-H肉汤稀释成一系列浓度后，与一定量的细菌作用，经培养后定量测定其MIC,反映细菌的药物敏感性。?校正0.5麦氏比浊标准，1:200稀释（1：10X1：20）。（5X105cfu/ml）?结果判定：无肉眼可见细菌生长的药物最低

22、浓度即为该待测菌MIC12、琼脂稀释法?原理：将待测菌接种于含不同浓度药物的琼脂平板上，经培养后观察菌落的生长情况，以能抑制细胞生长的最低药物浓度为该菌的MIC。第五章、细菌的分类与命名P911、细菌分类等级-种是细菌分类的基本单位，将生物学性基本相同的细菌群体归成一个菌种；-性状相近、关系密切的若干菌种组成一个菌属；2、细菌DNA中G+Cmol/%测定?细菌DNA中G+Cmol%含量不同是细菌的一个重要遗传特征。?单一菌种中许多不同菌株的G+Cmol%平均值极为接近或者是一致的。3、细菌命名?细菌的科学名称（学名）为生物双名式。?属名十种名（+人名、地名）。斜体- 属名在前，名词，首字母大写

23、- 种名在后，形容词，小写?属名可用第一个字母代表- M.tuberculosis（结核分枝杆菌）、S.typhi（伤寒沙门菌）?常见的细菌也可用习惯通用俗名- tuberculosis（结核杆菌）、typhoidbacillus（伤寒杆菌）?泛指某一属细菌：属名+sp（菌种species）- Mycobacteriumsp,Salmonellasp?亚种的名称：属名十种名+亚种- Klesbsiellapenumoniaesubspeciespneumoniae?中文译名则种名在前，属名在后。4、细菌分类系统：伯杰氏鉴定细菌学手册第七章、消毒学试验技术1、消毒学试验?原理：将试验微生物暴露于

24、消毒因子（物理、化学、生物学），作用预定的时间之后，检查试验的微生物是否被杀灭或抑制。?主要目的：检查一种消毒剂或消毒方法是否能达到杀灭或消除病原微生物的要求。2、消毒disinfection:杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理。灭菌：杀灭或清除传播媒介上一切微生物（包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞）的处理。3、微生物学检验：中和试验、定性/量杀菌试验、病毒灭活试验、能量试验、现场试验等4、消毒药械鉴定测试的项目消毒齐IJ消毒器械理化性能检验功效成分含量；pH;金属腐蚀性杀菌因子强度或浓度；金属腐蚀性微生物学检验微生物杀灭模拟现场试验与现场试验实验室杀灭微生物模拟现场和现场

25、试验其他稳定性试验安全性试验（电器、毒理）5、菌片：用于测定各种消毒剂、消毒器械与方法对不同物品上微生物的杀灭作用。6、残留消毒剂的去除方法：化学中和法（称中和剂法）、过滤冲洗法、稀释法等中和剂中，将残留消毒?中和剂法：在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。?中和剂：能及时中止消毒剂的杀微生物作用本身及其与消毒剂的反应产物对微生物无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。7、中和试验?操作方法-1.用PBS将指示菌制成5X1055X106cfu/ml悬液。-2.将消毒剂用灭菌蒸储水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，

26、测知该消毒剂10min抑杀指示菌99.9%以上的最低有效浓度。- 3.取消毒剂10min抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据等当量中和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度。- 4.中和剂选择试验时，先将消毒剂1.0mL与中和剂溶液9.0mL混合，制成中和产物溶液，再分组进行。?试验分组- 消+菌：消毒剂对试验菌有无杀灭或抑制能力。- （消+菌）+中：残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否能恢复生长。- 中+菌：中和剂是否抑菌。- （消毒剂+中和剂）+菌液：中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。- 稀+菌：

27、菌数对照。- 稀+中+培养：阴性对照。8、消毒剂定性消毒试验：测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。?试验方法- 5X1055X106cfu/mL的菌悬液。- 灭菌试管10,标号。每管：灭菌蒸储水2.5mL,20±2C水浴。+消毒液2.5mL,倍比稀释，至第9管。第10管中不加消毒液作对照。- 加菌悬液2.5mL于各管中，混匀并记录各管加菌时间，使菌药混合液中含菌量均为105106cfu/mL。- 各管分别于加菌后4个不同间隔时间，取0.5mL+4.5mL中和剂内，中和10min后，取出0.5mL加入4.5mL营养肉汤管内。- 将接种细菌的肉汤管放37c培养48h,观察初

28、步结果，无菌生长管继续培养至第7天。试验重复5次。?结果判定?若肉汤管混浊，则表示有菌生长，记为阳性，以（+）表示。?若培养至第7天，肉汤管澄清，则表示无菌生长，记为阴性，以（一）表示。?对难以判定的肉汤管，取0.1mL接种于营养琼脂平板，用灭菌L棒涂匀，放37c培养48h,观察菌落形态；并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。?5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌。9、消毒剂定量消毒试验：测定受消毒因子作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。?用于对消毒剂杀灭效果的评价。?原理：将一定量的细菌悬液或菌片（载体），暴露于设计浓度的消毒液中，作用至规定时间后

29、，取细菌与消毒液的混合物或取出载体，与中和剂反应，终止消毒剂的继续作用，并接种于营养琼脂平板，培养之后，计数菌落。以存活的菌落数与最初加入的菌数比较，计算出杀灭率，或杀灭效果（germicidaleffect,GE）。10、悬液定量杀菌试验-活菌培养计数?消毒液：浓度为待测浓度的1.25倍?实验用菌悬液：（1X1085X108）cfu/ml?菌0.5ml+干扰0.5ml,混匀，20±1C水浴5min,+消毒液4.0ml,迅速混匀并立即计时。?待菌药相互作用至预定时间，分别吸取0.5ml菌药混合液加于4.5ml经灭菌的中和剂中，振荡混匀。11、定量杀菌试验的评价规定?在产品说明书指定的

30、最低浓度与最低作用时间，重复试验3次。?在悬液定量杀灭试验中，各次的杀灭对数值均5.00,可判定为消毒合格。12、破坏效果判定?以S/NV2.1作为HBsAg抗原性破坏合格标准。-S是消毒因子作用后被检样品或阳性对照样品平均每分钟脉冲数（cpnD值或光密度（OD值。-N是试验中阴性对照样品平均cpm值或OD值。细菌学检验各论一般性思考题：?1、XXXX菌的培养特征如何？（增菌、选择性平板）?2、XXXX菌的形态与染色有何特点。?3、xxxx菌的生化特性有哪些？其中最有特点的是哪个项目，如何利用这个项目，诊断某细菌是否是xxXX菌。?4、XXXX菌的分型特点是什么？?致病菌检测的一般思路？（肖老

31、师某次课后在黑板上总结过，大家注意哦）第十一章弧菌属?弧菌属细菌分布广泛，尤以水中最多，致病菌主要有霍乱弧菌、副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒§1霍乱弧菌目前，作为国际检疫传染病一一霍乱的病原诊断，以检出O1群霍乱弧菌或O139群霍乱弧菌为准1、生物学性状形态：G-,菌体弯曲或直的短杆菌，呈弧形或逗点状，单鞭毛在病人来沿水”样便中，可呈头尾相接的鱼群样排列。作悬滴观察时，因细菌一端有鞭毛，呈穿梭样运动。在暗视野显微镜下观察，犹如夜空中的流星。无荚膜，有普通菌毛和性菌毛，O139群有多糖荚膜，不形成芽胞。培养特性?营养要求不高，在普通培养基上生长良好，属兼性厌氧菌。?生长温度：16

32、42c/37C?pH:6.09.2/7.27.4/8.48.6/9.2?碱性蛋白月东水：菌膜，液体混浊。?固体琼脂培养基：无色、圆形、透明、光滑、湿润、扁平或稍凸起、边缘整齐的菌落。抗原特性：O1群霍乱弧菌分类生化特性靛基质和亚硝基靛基质反应（霍乱红反应）?细菌分解色氨酸一口引喋+对二甲基氨基苯甲醛一玫瑰色口引喋霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，靛基质反应阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应VP试验：细菌分解葡萄糖一丙酮酸一乙酰甲基甲醇一二乙酰+月瓜基一红色化合物?埃尔托生物型：+古典生物型：-溶血性区分古典生物型与埃尔托生物型

33、霍乱弧菌溶血素溶血环备注草绿色环古典生物型+,透明埃尔托生物型2、细菌学检验增菌：碱性蛋白月东水分离：TCBS硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂，发酵蔗糖。黄色，扁平状，直径2-3mm。确证：初步鉴定：显微镜下涂片染色：G-;动力中查：+（制动试验）；氧化酶试验：+;氯化钠三糖铁试验：?生化确认：法国梅里埃ID32E鉴定试剂条霍乱弧菌的快速诊断方法?制动试验急性病人的水样便一直接镜检：流星状动力的细菌。+O1群霍乱免疫血清一运动停止，凝集成块。?免疫荧光菌球法?SPA协同凝集试验霍乱病原菌即古典生物型霍乱弧菌、埃尔托生物型霍乱弧菌流行株和O139群，不仅可引起个体严重腹泻性疾病，而且可引起该病的流

34、行和大流行。§2副溶血性弧菌?是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。?进食含有该菌的食物致可食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒。神奈川现象（KP）:KP阳性：绝大多数致病性副溶血性弧菌产生的耐热溶血毒素能使人或家兔的红细胞溶解。?溶血反应是鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标。第十三章与医学有关的其他细菌§1军团菌属营养要求特殊，常接种于复合培养基中，生长环境中必须含半胱氨酸和铁盐。需氧，2.5%5%CQ能促进生长。分离：各取0.1ml上述3种经处理样品，分别接种BCYEGVPC平板。BCYC可溶性焦磷酸铁，L4胱氨酸盐酸盐鉴定：培养确证：BCYEfc长/B

35、CYE-Cys不生长军团病主要是通过呼吸道吸入带菌飞沫、气溶胶而感染，多流行于夏秋季，为全身性疾患。§2绿脓杆菌假单胞菌中同人类与动物疾病有重要关系的大约有10种：绿脓杆菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、葱头假单胞菌、类鼻疽假单胞菌、嗜麦芽假单胞、腐败假单胞菌、斯氏假单胞菌、产碱假单胞菌、类产碱假单胞菌2种水溶性色素：绿脓素，为蓝绿色的吩嗪类分合物，无荧光性，具有抗菌作用。绿脓素只有绿脓杆菌产生，故有诊断意义。荧光素，呈绿色。1、增菌：1：10样品稀释液10ml+90mlSCDLPt体培养基SCDLP用于疏水性化妆品样品处理及化妆品和一次性使用卫生用品增菌培养。2、分离：乙酰胺培养基3

36、、绿脓菌素试验可疑菌落接种绿脓菌素测定用培养基氯仿提取一蓝色+盐酸一粉红色、紫红色一阳性（被检物中有绿脓菌素存在）§3李斯特菌单核细胞增多性李斯特菌与人类关系较密切，是人和动物的致病菌。嗜冷菌：242c（也有报道在0c能缓慢生长）。“冰箱杀手”与医学有关的其他细菌大家所出思考题汇总绿脓杆菌的鉴定方法有：革兰染色、镜检，氧化酶试验，硝酸盐还原产气试验、明胶液化试验、42C生长试验绿脓杆菌能产生两种水溶性色素：甲脓素有抗菌作用有诊断意义。|荧光素1 .李斯特菌穿刺SIM动力培养5d的培养特性：倒立伞状生长2 .李斯特菌生化反应中触酶试验：阳性幽门螺杆菌1. Hp与下列哪种疾病无关？DA.

37、十二指肠溃疡B.胃炎C.肝癌D.肺炎2. Hp的快速检测方法是下列哪种？CA.氧化酶试验B.触酶试验C.尿素酶实验D.硝酸盐还原实验布鲁菌属1以下不属于布鲁菌属的生物学特性的是：DA革兰阴性杆菌B严格需氧菌C硝酸盐还原实验阳性D具有运动性2布鲁菌的实验室常用培养基是或.（肝浸液培养基、改良厚氏培养基）气单胞菌属1、气单胞菌属的选择性培养基、鉴别培养基分别是什么？（RS培养基、AHMf养基）2、使用碱性蛋白月东水增菌的细菌有哪些？（霍乱弧菌、气单胞菌）弯曲菌属1 .弯曲菌属中导致腹泻的最常见病源菌？空肠弯曲菌2 .弯曲菌属生化鉴定的三个试验？快速马尿酸钠试验、快速硫化氢试验、快速DNAB水解试验

38、军团菌1在军团菌标本处理时，哪些平板可用来培养？GVPC平板，巧克力平板，血琼脂平板2军团菌鉴定的试验及结果有哪些？发酵试验（-）、氧化酶试验（+/-）触酶实验（+）、动力试验（+）、马尿酸水解试验（+）、明胶液化试验（+）为军团菌第十四章螺旋体属螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、无鞭毛而能活泼运动的原核单细胞微生物。与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体（非特异性抗体）,称为反应素。钩体是唯一可用人工培养基培养的螺旋体人是梅毒的唯一传染源，由于感染方式不同可分先天性梅毒和后天性梅毒。

39、性病研究实验室玻片试验（VDRL）非特异性血清不加热的反应素玻片试验（USR）（反应素）快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）无病损标本土血清（抗体）荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-AB5）特异性梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）梅毒螺旋体制动试验（TPI）1、暗视野显微镜检查梅毒螺旋体：是诊断梅毒螺旋体感染唯一快速、直接的方法，为诊断早期梅毒所必需。2、非特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验：梅毒螺旋体一抗原性心磷脂一反应素反应素+从牛心中提取的心磷脂一抗原抗体反应抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇的乙醇溶液。VDRLUSRRPR抗原微粒+抗体（反应素）一粘附一肉眼可见的颗粒凝集和沉淀，即为（+）;可用作临

40、床筛选，并可作定量，用于疗效观察。3、RPR快速血浆反应素环状卡片试验VDRL抗原+活性炭颗粒一RPR抗原试验在特制的白色纸卡上进行，在白色底板上出现黑色凝集颗粒或絮片为阳性反应第15章立克次体我国发现的立克次体病主要有斑疹伤寒、恙虫病和Q热等。1、立克次体是一类专性寄生于真核细胞内的G-原核生物，是介于细菌与病毒之间，而接近于细菌的一类原核生物。以二分裂方式繁殖。2、常用Gimenez或Giemsa法染色。Gimenez染色：呈红色，背景为蓝色。Giemsa染色：呈紫红色，常显两端浓染。除恙虫病立克次体多采用Giemsa法外，其他立克次体常用Gimenez法。3、立克次体有两种主要抗原：-群

41、特异性抗原：与细胞壁表层的脂多糖成分有关，为可溶性抗原，耐热。-种特异性抗原：与外膜蛋白有关，为颗粒性抗原，不耐热。4、外斐（氏）反应?原理：斑疹伤寒等立克次体的脂多糖（群特异性抗原）与变形杆菌某些菌株的菌体抗原具有共同的抗原成分。?外斐氏反应：-用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌0X19、0X2、OXk进行非特异性凝集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体。?变形杆菌凝集试验WFR,用以诊断流行性斑疹伤寒、恙虫病等急性传染病。5、埃立克体：X鸡胚，X无生命培养基，V体外细胞培养。6、磺胺类药物不能抑制立克次体的生长第16章衣原体Chlamydia1、衣原体是一类具有独特生长发育周期、专性细胞

42、内寄生、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。2、衣原体具有独特的发育周期，可观察到两种不同的颗粒，即原体（EB和始体（旧）。-原体较小而致密，有胞壁，胞外稳定，是发育成熟的衣原体，具有感染性。Giemsa染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色。- 始体又称为网状体(RB),较大而疏松，无胞壁，胞外不稳定，无感染性，是繁殖型。经Giemsa和Maechiavello染色后均呈蓝色。3、显微镜检查Giemsa染色：光镜下，原体呈紫红色，始体为嗜碱呈蓝色，查见包涵体有诊断价值。第17章支原体Mycoplasma1、无细胞壁、形态上呈高度多形性，可通过除菌滤器，在无生命的培养基中能生长繁殖的最小

43、的原核细胞型微生物。革兰染色阴性，但不易着色，姬姆萨染色较好，结果呈淡紫色。2、人工培养基培养：营养需求tWj于一般细菌。- 基础：牛心浸液- 提供胆固醇及其他长链脂肪酸：人或动物血清- 提供核昔前体和维生素等：10%的新鲜酵母浸液3、典型的菌落呈“油煎蛋/荷包蛋”样，菌落大小0.11.0mm。解月尿胭原体的菌落最小，直径仅为1040m,须在低倍显微镜下观察，故原称为“T株(tinystrain)。4、病毒学研究中细胞培养常被支原体污染。5、对青霉素、头抱等作用于细胞壁的抗生素不敏感，但对干扰蛋白质合成或作用于核蛋白体的抗生素如强力霉素、四环素、红霉素、螺旋霉素、链霉素等敏感。6、支原体无细胞

44、壁，而细菌L型是细菌失去细胞壁所形成的细胞壁缺陷型，二者在许多生物学性状上相似。支原体L型细菌自然界中广泛存在自然界很少存在绝大多数生长需胆固醇生长不一定需要胆固醇遗传上与细菌无关，且无论在什么条件下也不能变成细菌遗传上与原菌相关，并可在诱导因素去除后回复为原菌菌落较小，0.10.3mm菌落稍大，0.51.0mm第8,9章病原性球菌1) 名词解释：1)血浆凝固酶：使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类，分为结合凝固酶和游离凝固酶。血浆凝固酶：是多数致病菌株能产生凝固酶，能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，致病株大多数能产生，是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标2) SPA:(Sta

45、phylococcalproteinA,SPA)葡萄球菌A蛋白，存在于细胞壁的一种表面蛋白，为完全抗原，具属特异性。90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。?本质为单链多肽，与肽聚糖形成共价键结合，SPA可与IgG1、IgG2、IgG4分子的Fc段发生非特异性结合，IgG的Fab段与特异性抗原结合，可用于协同凝集试验(coagglutination)用于抗原检测。?SPA与IgG结合后复合物具有抗吞噬，促细胞分裂，超敏反应等多种生物学活性。3) Optochin试验：奥普托欣试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。挑取待测定的菌落密集接种

46、在血平板上，贴5wg/片的Optochin的纸片与平皿表面，35c18h后，抑菌环直径15mm为肺炎球菌。2 .根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？金黄色葡萄球菌-致病菌表皮葡萄球菌-偶尔致病腐生葡萄球菌-一般不致病3 .金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？1 .产生脂溶性金黄色色素2.血平板上菌落周围产生透明溶血环3.发酵甘露醇4.血浆凝固酶阳性5.耐热核酸酶阳性6.涂片镜检为革兰阳性葡萄状排列的球菌7.G+Cmol%为30mol%38mol%4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？在血平板上根据溶血现象分为甲、乙、丙三型。“（甲）溶血性链球菌菌落周围有狭窄的草绿色溶血环-多为

47、条件致病菌，草绿色链球菌3（乙）溶血性链球菌菌落周围有明显宽广的完全透明环-致病性最强，溶血性链球菌丫（丙）溶血性链球菌菌落周围无溶血环-一般不致病，不溶血性链球菌，常存在于乳类及动物的粪便中。5.脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？脑膜炎球菌可发酵葡萄糖，麦芽糖产酸，淋球菌只分解葡萄糖产酸，还可用血清学试验加以鉴别。比较内容脑膜炎紫瑟宙淋病余瑟前生物学形态结构GT双球菌；有荚膜、菌毛（新）同左性状培养特性高营养、5%COW滴状、自溶酶高营养、5%CO生化反应分解葡萄糖、麦芽糖只分解葡萄糖抗原与分类荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异Ag脂多糖Ag核蛋白Ag菌毛蛋白Ag;脂多糖Ag;外膜蛋白Ag

48、（Pi、Pn、Pm）抵抗力冷、热、干燥、消毒剂均敏感同左致病性致病物质荚膜、菌毛、内毒素荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1所致疾病流行性脑脊膜炎淋病防治原则荚膜多糖疫苗洁身自好6.葡萄球菌属的生物学特性？1）形态染色与培养革兰染色阳性，球形，呈葡萄状排列，无鞭毛，无芽抱培养特点：1.营养要求不高；2.需氧或兼性厌氧；3.最适生长温度28-38C；4.某些菌株耐盐（10%NaCl）菌落观察：在普通琼脂平板上，35c孵育18-20h葡萄球菌均形成中等大小、圆形凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明菌落，并可产生不同的脂溶性色素，使菌落呈现不同的颜色，如金黄色葡萄球菌呈金黄色、表皮葡萄球菌大多呈白色、腐

49、生葡萄球菌大多呈柠檬色。在血琼脂平板上，三种葡萄球菌的菌落特点与它们在普通琼脂平板上的菌落相同，但金黄色葡萄球菌菌落周围有完全溶血环（3溶血），而腐生葡萄球菌和大多数表皮葡萄球菌菌落周围无溶血环。2）生化反应?触酶试验阳性。?致病株分解甘露醇。?金黄色葡萄球菌耐热核酸酶试验阳性。?金葡菌血浆凝固酶阳性。3）抗原构造?葡萄球菌A蛋白（SPA?多糖抗原：具有群特异性，是存在于细胞壁上的一种半抗原。?荚膜多糖4）致病物质?毒素：葡萄球菌溶血素，肠毒素，杀白细胞素，表皮剥脱毒素，毒性休克综合征毒素-1?酶类：脂酶，触酶，凝固酶，葡激酶，耐热核酸酶，透明质酸酶?超抗原5）免疫性人对金黄色葡萄球菌有一定的

50、天然免疫力。当皮肤粘膜发生损伤或机体免疫力降低时才易引起感染。病后能获得定的免疫力，但作用不强，一般认为不足以预防再次感染。6）抵抗力?耐干燥；对外界因素的抵抗力强于其他无芽胞菌；?对青霉素耐药株高达90%以上；?耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已经成为医院内感染最常见的致病菌之一。7.简述葡萄球菌和链球菌的检验程序和检验方法。（重点掌握葡萄球菌）葡萄球菌检验程序：检验方法：?直接涂片检查-可作初步报告，革兰染色阳性，呈葡萄状排列的球菌，即可作初步报告。?培养：1 .增菌培养一一7.5%NaCl肉汤，胰酪大豆肉汤2 .分离培养一一普通平板、血平板、Baird-Parker平板、高盐甘露醇平

51、板、卵磷脂高盐平板等金葡球菌鉴定培养基一S.aureusID：灰绿色菌落为金葡球菌法国科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基（CHROMagar?Staphaureus）:金黄色葡萄球菌：紫色;其他：蓝色、无色。链球菌检验程序nil串施审谆啮国问弄HTR牺附诙学.E*&gq心或心笄捋种rfn甲蚯bMehAE跣由石性状、溶血)整车过骑林?告司生壬漱=_=口rv!检验方法：?脓汁、咽拭、痰液和渗出物可直接涂片检查。?增菌培养接种肉浸液葡萄糖肉汤或匹克肉汤。?分离培养接种血平板做需氧和厌氧培养，观察菌落形态。鉴定试验?3溶血者做杆菌肽敏感试验，敏感者为A群链球菌，耐药者做胆汁-七叶昔试验(阳性为黑色

52、反应)，阳性者为B群链球菌，同时做CAM就验也应为阳性；阴性者为ABC群以外的其他链球菌；?”溶血者做Optochin试验，敏感者为肺炎链球菌，耐药者做胆汁-七叶昔试验，阴性者为草绿色链球菌；?不溶血者做6.5%氯化钠试验，阴性者为其他链球菌。?链激酶试验：取草酸钠血浆0.2ml,用生理盐水稀释，再加入链球菌培养物0.5ml和0.25%氯化钙溶液0.25ml混合，放37c水浴，观察血浆凝固。从血浆凝固起记录溶化时间，溶化时间越短，链激酶越多。?马尿酸钠水解试验：B群链球菌阳性。阳性产紫色或深紫色。第十章肠科杆菌1、简述肠道杆菌共同特点，怎样初步区别肠道致病菌与非致病菌？肠杆菌科共同特性相似的形

53、态染色中等大小，G杆菌，无芽胞，多数有动力，致病性菌株多有菌毛，具有质粒。简单的培养条件抗原构造：抵抗力：变异性：活泼的生化反应包括菌体(。抗原、鞭毛(H)抗原和表面抗原3种。O抗原和H抗原是分群和分型的依据。不强，不耐干燥，对一般的化学消毒剂均敏感。(1) S-R变异：新鲜分离的细菌菌落为光滑性，反复传代或保存过久，菌落变成粗糙型。(2) H-O变异：鞭毛从有到无。(3) 质粒、转座子、结合子等的转移改变菌株遗传信息，如耐药菌株的出现。乳糖发酵试验-初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌-不发酵乳糖肠道非致病菌-发酵乳糖2、何谓肥达试验？肥达试验结果判断须注意哪些要点？肥达试验（Wida

54、ltest）:用已知伤寒沙门菌的QH抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌的H抗原（称为PAPB）作为诊断菌液，与受检血清做试管或微孔板凝集试验，检测受检血清中有无相应的抗体及其效价的一种半定量试验。可辅助诊断肠热症结果分析及临床意义：1）正常值：首先应考虑当地人群的正常效价。伤寒沙门菌O凝集价1:80,伤寒沙门菌H凝集价1：160甲型副伤寒H凝集价1:80,肖氏沙门菌H凝集价1:80?或在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价增高4倍或以上具有诊断的参考价值。2）O与H抗体的诊断意义：?O抗体出现较早，为IgM,持续时间短（约半年），消退后不易受非特异性病原

55、刺激而重现。H抗体出现较晚，为IgG,持续时间长达数年，消退后易受非特异性病原刺激而重现。?O、H凝集价均超过正常值，则肠热症的可能性大；?若两者均低，肠热症的可能性小；?若O不高H高，可能为疾病的晚期，是预防接种或非特异性反应；?若O高H不高，则可能为感染早期，或与其他沙门菌有交叉反应，或H-O变异的沙门菌引起的感染等，建议一周后复查，如一周后H也有升高，可证实为肠热症。3）注意事项：确诊为伤寒的患者中约有10%巴达反应始终为阴性，故阴性结果不能排除伤寒的确诊。其原因可能由于早期使用抗生素治疗，患者免疫功能低下或与肥达反应诊断菌液等有关。采血的时间不同，肥达反应的阳性率也不同。发病第一周阳性率为50%第二周为80%第四周90%恢复期凝集价最高。以后逐渐下降以至转阴。临床上一般以双份血清（早期和恢复期）的凝集价