细胞生物学研究中的激活剂和抑制剂.

1、细胞生物学研究中的激活剂和抑制剂AnandikaDhaliwal(anandikadotdhaliwalatgmaildotcom)RutgersUniversity,NewJersey,UnitedStates译者王秀英(maryatlabomedotcom)美国新泽西州普林斯顿合原研究有限责任公司(SynatomResearch)DOI/10.13070/.3.185日期更新:2014-09-18;原始版:2013-04-27引用实验材料和方法2013;3:185摘要在细胞生物学研究中使用的化学激活剂和抑制剂的综述。英文摘要Acomprehensiverev

2、iewofchemicalactivatorsandinhibitorsusedincellbiologyresearch.介绍细胞生物学研究细胞结构、生理特性及细胞功能。它涉及到对细胞器、细胞与周围环境间相互作用、生命周期、分化及死亡的研究。细胞生物学与遗传学、分子生物学、发育生物学和生物化学等其它生物学领域是密切相关的。放大图1.真核细胞骨架。肌动蛋白纤维显示为红色，微管为绿色，核为蓝色。肌动蛋白染色使用的是罗丹明-鬼笔环肽，微管使用的是连接有Alexa488的抗a微管蛋白着色剂，DNA则使用的是Hoechst染料。对于细胞生物学领域的研究者而言，为了更加全面地理解细胞的功能、细胞的信号传

3、递以及控制细胞命运、功能及表型的胞内机制，抑制剂与激活剂是至关重要的研究工具。许多抑制剂和激活剂都被广泛用于研究细胞动力学及功能。这里我们对真核细胞中各种细胞生物学研究如细胞内吞、分泌、粘附、细胞骨架动力学、内质网和高尔基体研究中常用的抑制剂和激活剂进行了综述。细胞骨架细胞骨架为细胞提供了特定的结构与形状。真核细胞主要有三种细胞骨架纤维：1)微丝，2)中间丝和3)微管。微丝(肌动蛋白丝)：这是细胞骨架中最细的纤维。它们由肌动蛋白亚基的线性聚合物所组成，通过在纤维一端的伸长并伴随着另一端的收缩来产生力，从而使其间的纤维产生净移动。中间丝：这种纤维的平均大小为直径10纳米并且比肌动蛋白丝更稳定(是

4、紧密结合的)，是细胞骨架的异质成分。中间丝负责组织细胞内部的三维结构和细胞器，是核纤层的结构性组成部分。它们也参与一些细胞-细胞间和细胞-基质间的连接过程。微管：它们是直径为23nm的空心圆柱，大多数情况下由13条原纤维组成，而这些原纤维则是alpha微管蛋白和beta微管蛋白的聚合物。它们具有很高的动态活性，通过结合GTP来进行聚合反应并通常由中心体来组织。抑制剂靶点机制作用特点及效果肌细胞松弛素D动(C30H37NO6)蛋白结合于肌动蛋白核和F-肌动蛋白的生长端，从而抑制聚合反应。诱导肌动蛋白解聚。肌LantraculinA动C22H31NO5S)蛋白扰乱微丝介导的过程。与G-肌动蛋白单体

5、形成1:1的复合物(Kd=200nM)。肌LantraculinB动(C20H29NO5S)蛋白体外反应中抑制肌动蛋白的聚合(Kd=60nM)。扰乱微丝的组织和微丝介导的过程。选择性地抑制N-WASP肌Wiskostatin动C17H18Br2N2O)蛋白Wiskott-Aldrich综合症蛋白(WASp)家族成员)并抑制Arp2/3复合物的活化。该分子阻断肌动蛋白丝的组装。溶于DMSO和乙醇。抑制收缩。抑制依赖于p-53的细胞通路。引起G1-S转化过程中的细胞周期阻滞。抑制胰岛素刺激的葡萄糖转运。溶于DMSO和乙醇。比细胞松弛素的抑制效果强10-100倍。抑制巨噬细胞的吞噬作用。比Lantr

6、aculinB的效果更强。溶于DMSO、甲醇或乙醇。比细胞松弛素的抑制效果强10-100倍。在该复合物持续存在的情况下被血清缓慢失活并导致短暂的诱导变化。在DMSO中溶解度可达100mMo同样抑制PIP2诱导的肌动蛋白聚合反应(EC504mM)抑制依赖于肌动蛋白的参考文献、来源及供应商123,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,EnzoLifeScience,Invitrogen,SantaCruzBiotechnology,CaymanChemical1234,Invitrogen,TocrisBioscience,Sigma-Aldri

7、ch,CaymanChemical,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore567,Invitrogen,Sigma-Aldrich,CaymanChemical,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore,EnzoLifeScience8910,AffixScientific,EnzoLifeScience,Sigma-Aldrich,TocrisBioscienceMycalolideB(C52H74N4O17)肌动蛋白它选择性地将F-肌动蛋白彻底解聚成G-肌动蛋白。与肌动蛋白以1:1的摩尔比进行结合(今13-20nM)。Noc

8、odazoleC14H11N3O3S)抑制微管的动态变化并促使微管解聚。与0微管蛋白结合并阻止两个链间二硫键中任意一个的形成。长春碱(C46H58N4O9H2SO4)解聚微管。与微管蛋白结合并诱导其自缔形成螺旋形聚合体，抑制微管组装。秋水仙碱(C22H25NO6)长春新碱(C46H56N4O10H2SO4)表1.常用的细胞骨架抑制剂激活剂靶点细胞功能(迁移、运输、吞噬、内褶)。溶于DMSO、甲醇或异丙醇。抑制肌动球蛋白ATP酶。在DMSO的溶解度达10mg/ml。有丝分裂抑制剂。将细胞周期阻滞在G2/M期。抑制各种癌症相关的激酶，包括ABL、c-KIT、BRAF、MEK1、MEK2和MET。溶

9、于水和甲醇。通过阻断有丝分裂纺锤体的形成将细胞周期阻滞于G2/M期。在一些肿瘤细胞系中诱导凋亡。抑制自在乙醇中溶解度达50mg/ml,在水中溶解度可达100微与微管蛋白结合并阻止mM,DMSO中溶解管其聚合度可达100mMo有丝分裂抑制剂。在一些正常的及癌症细胞系中诱导凋亡噬体的成熟。能与微管蛋白结合并抑制微管形成的吲哚生物碱。解聚微管。溶于甲醇和水。延迟细胞周期的进程。在人类淋巴瘤细胞中诱导凋亡。机制作用特点及效果Jasplakinolide肌在体外诱导肌动在DMSO中溶解度2111213,SantaCruzBiotechnology,EnzoLifeScience14151617,Sigm

10、a-Aldrich,TocrisBioscience,CellSignalingTechnology,EMD/Millipore181619,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnologyo202122,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore232425,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnologyo参考文献、来源及供应商26272829,C36H45BrN4O6)动蛋

11、白聚合及稳mg/mlo一种具有杀菌、杀蛋定。在体内同样虫、抗癌特性的环羧酚酸白诱导肌动蛋白单肽。无荧光且具有细胞透性Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,SantaCruzBiotechnology,Invitrogen,体聚合成F-肌动的F-肌动蛋白。蛋白。TocrisBioscience紫杉醇(Taxol)(C47H51NO14)结合于作微管蛋白的N端，促进微管组装并抑制微管蛋白分解溶于DMSO和甲醇。抗肿瘤和抗白血病试剂。将细胞周期阻止于G2/M期。导致异常的有丝分裂并且有时会引起凋亡。303132,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,CellSig

12、nalingTechnolgy,CytoskeletonInc.鬼笔环肽C35H48N8O11S)肌动蛋白与聚合的F-肌动蛋白结合并保持其稳定，防止解聚的发生（F-肌动蛋白转变为G-肌动蛋白）溶于乙醇和甲醇。从真菌中分离出的有毒双环七肽。干扰富含肌动蛋白的结构行使功能。鬼笔环肽的偶联物被用作确认纤维状肌动蛋白的探针。333435,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology,EnzoLifeScience表2.常用的细胞骨架激活剂。内质网内质网（ER）是真核生物中一种会形成互连的膜囊泡网络的细胞器。它参与

13、了细胞物质的合成、修饰和运输。它从细胞膜开始伸展，经过细胞质，一直与核膜相连。取决于细胞类型、细胞功能和细胞需求，内质网具有多种不同的功能。在结构与功能上，它由两种区域组成。粗面内质网：它是一系列扁平状囊泡且胞浆侧由核糖体组成。核糖体是细胞中的蛋白质合成位点。粗面内质网加工膜及分泌蛋白，在某些白细胞中产生抗体，而在胰腺细胞中产生胰岛素。其它功能还包括组装过程中的起始N-糖基化和溶酶体酶的加工。滑面内质网：它是一个光滑的微管网络并且不包含核糖体。它通常与粗面内质网相连，是那些负责将内质网产物运输到不同位点的囊泡的过渡区域。它具有多种功能，包括脂质合成、碳水化合物代谢、钙离子浓度调节、药物解毒和受

14、体附着到细胞膜蛋白。在肌肉中，滑面内质网辅助肌肉细胞的收缩，在脑细胞中则合成雄性和雌性荷尔蒙。内质网应激：内质网介导的蛋白折叠一旦失衡就会引起内质网应激。内质网的应激信号传导通路或应激响应被称作未折叠蛋白反应（UPR）。最初的UPR只是尝试通过停止蛋白翻译并激活可增加参与蛋白折叠的分子伴侣的信号通路来恢复细胞的正常运作。当UPR的这种初始尝试失败而扰乱还在持续的情况下，UPR就会开始诱导凋亡。下面提到的抑制剂是用于抑制内质网功能或诱发内质网应激的，而提到的激活剂则用于诱导内质网功能或抵抗内质网应激的：抑制剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商内质网相关靶向p97相关的在DMSO中溶解度

15、达3637383940,蛋白降解去泛素化过程100mM,在乙醇中溶解度Sigma-Aldrich,(ERAD)（PAD）并抑制达5mM在淋巴样细胞EMD/Millipore,TocrisEeyarestatinI(C27H25Cl2N7O7)依赖于ataxin-3(atx3)的去泛素化过程。抑制内质网中Sec61介导的蛋白质转运。系、BJAB、HBL-2、JEKO-1、Jurkat、KMS-12、MINO以及慢性淋巴细胞白血病中的原代白血病细胞中诱发细胞毒性。通过促凋亡蛋Bioscience,SantaCruzBiotechnology白NOXA诱导细胞死亡。以可逆且ATP内质网相关竞争性的方

16、式(Ki=3.2|jM)抑制ATP酶p97DBeQ(C22H20N4)蛋白降解途22204径活性(对于野生型或C522Ap97的IC50=1-6|jM)可逆地抑制内质XestosponginC血管舒缓激网钙库中的血管(C28H50N2O2)肽和内质网舒缓激肽-和氨285022的钙外流甲酰胆碱-Ca2+外流。DMSO中溶解度达100Kifunensine(C8H12N2O6)蛋白降解(ERAD)的甘露糖苷酶活性。衣霉素诱导内质网应激。抑制N-糖基蛋白折叠化并阻断N-糖(CH_.NO3960416苷蛋白-糖类键的形成。mM。在RPMI8226、HeLa和HEK29细胞中抑制细胞增殖。抑制caspa

17、se3/7活性及凋亡。4142,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience,BioVisionInc.溶于DMSO、乙醇和甲434445,醇。大环双Sigma-Aldrich,-1-oxaquinolizidine的合EMD/Millipore,成形式。具有膜通透性。CaymanChemicals,可逆地抑制IP3受体。TocrisBioscience4647,水(双蒸热水)中溶解度Sigma-Aldrich,达50mM。生物碱化合EMD/Millipore,物。选择性抑制负责加工CaymanChemicals,I类糖蛋白的a甘露糖苷TocrisB

18、ioscience,酶。SantaCruzBiotechnology.溶于DMF、DMSO和吡啶。衣霉素A、B、C和484950,D的混合物。引起G1期Sigma-Aldrich,Tocris阻滞。抑制N-乙酰葡糖胺Bioscience,磷酸转移酶(GPT)。剂EMD/Millipore,Santa量依赖性地抑制DNA合CruzBiotechnology。成。内质网相关抑制内质网相关毒胡萝卜素(C34H50O12)肌浆网Ca2+ATP酶(SERCA)抑制肌浆网Ca2+-ATP酶。抑制自噬过程并诱发内质网应激。溶于DMSO和乙醇。可渗透细胞。诱导凋亡。被用于诱导哺乳动物细胞自噬。515253,S

19、igma-Aldrich,EMD/Millipore,TocrisBioscience.ERO1抑制剂I,内质网氧化选择性抑制酵母溶于DMSOo体外抑制依54,EMD/MilliporeErodoxin酶1抑制剂内质网氧化酶1赖于ERO1的硫氧还蛋(C7H5BrN2O5)(ERO1)。对小鼠EROIa(IC50=4005UyM)抑制较弱白-1(Trx1)氧化活性。与参与蛋白折叠、糖基化和细胞壁合成的基因聚类。兔抗内质网蛋白72(623-638)多克隆抗体555657,EMD/Millipore,USBiological,NovusBiologicals.识别小鼠大脑、脾脏、睾丸和大鼠脑、肌肉、

20、脾、睾丸组织中72kDa的ERp72蛋白。以及人宫颈上皮细胞(HeLa)、人成纤维细胞(A431)、人胸腺细胞(Hs67)和小鼠成纤维细胞(3T3)的细胞裂解物。表3.常用的内质网抑制剂激活剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商5,8,11-二十碳三炔酸(C2uH28O2)在MDCK细胞中引发Ca2+从内质网中释放。引起Ca2+从内质网、线粒体和其它浓度达30yM的钙库中释放出来乙醇中溶解度达25mg/ml，DMSO中溶解度达25mg/ml或溶于二甲基甲酰胺。脂肪氧化酶的抑制剂。在较高浓度下抑制环氧合酶。5859,Sigma-Aldrich,CaymanChemicals,EnzoLi

21、feSciencesSalubrinalC21H17Cl3N4OS)防止内质网应激保护细胞免受内质网应激所诱导的凋亡(EC5u-15pM)。溶于DMSO。选择性抑制使真核翻译启动因子2亚基a(elF-2a)去磷酸化的磷酸酶复合体606162,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore.牛磺脱氧胆酸(TUDCA)(C26H44NaNO6S)抵抗内质网应激抑制内质网应激。溶于水。被用作去垢剂来使脂质和膜结合蛋白增溶。606162,SigmaAldrich,SantaCruzBiotechnology,EMD/Millipore.表4.

22、常用的内质网激活剂。高尔基体高尔基体是真核细胞中的一种细胞器，是细胞内膜系统的一部分。高尔基体长约1yM,并由两部分组成：被称为潴泡的扁平膜囊和膜封闭的小泡。它在各种蛋白分泌前的加工过程中起着重要的作用。植物细胞壁中的多糖合成位点。高尔基体的各种功能包括：它从来自粗面内质网、含有蛋白质的囊泡处接收蛋白并进行进一步修饰。细胞合成的各种大分子在分泌前或被送到各自目的地之前，都由它负责修饰、富集、分类及包装。它通过加入糖基和磷酸基团来对蛋白修饰。它在动物细胞胞外基质的蛋白聚糖合成中起着重要作用。抑制剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商1,3-环己烷双甲胺(CBM)(CeHZCNH)通过高尔

23、基体在体内和体外都可以抑制外被体蛋白与高尔基体溶于乙醇和乙醚636465,Sigma-Aldrich,FisherScientific运输膜结合以及完整到质细胞的分泌膜。溶于甲醇。可逆地布雷菲德菌素A(BFA)(C16H24O4)膜运输、高尔基体10能域间形成的界mg/ml)。导致高组装面裂缝中选择性尔基体和反面高尔GolgicideA(C17H14F2N2)和运地可逆抑制顺面基网的解体与分输高尔基体ArfGEF散。抑制可溶性的GBF1。Arf属于和膜结合的蛋白质RasGTP酶家族分泌。并介导囊泡运输。胞凋亡。6970Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,SantaCr

24、uzBiotechnology,EMD/Millipore1-Deoxymannojirimycin(DMM)(C6H13NO/HCI)6134糖蛋抑制N-糖基化。白加抑制甘露糖苷酶工I。溶于乙醇和水。用于高尔基体介导的糖蛋白加工过程的研究。717273,EMD/Millipore,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,SantaCruzBiotechnology.表5.常用的高尔基体抑制剂。生物分子的分泌分泌是指细胞或腺体产生和释放一种有用的物质，包括激素、酶、细胞因子和细胞外基质蛋白。该过程中物质被包装进囊泡然后以胞吐方式从细胞中分泌出来。分泌途径：在真核细胞中，经

25、典的分泌过程是通过内质网、高尔基体和其它细胞内囊泡来实现的，是一个由细胞严格调控的过程。广义上来说，要输送出去的蛋白被核糖体合成后停靠在内质网上进行转运。然后含有正确折叠的蛋白的囊泡进入高尔基体。糖基化修饰后进一步进行翻译后修饰。然后蛋白质进入分泌囊泡，沿着细胞骨架移至细胞边缘。最后一步就是囊泡在一个被称为融合孔的结构处与细胞膜融合并进行胞吐，蛋白就被释放到环境中。非经典的蛋白质分泌途径：有许多蛋白不是通过牵涉到内质网和高尔基体的经典途径来分泌的，相反是利用各种不同的非经典的蛋白质分泌途径来分泌的。这些蛋白包括FGF-1(aFGF)、FGF-2(bFGF)和白细胞介素-1(IL1)7475。非

26、经典的分泌机制大致可分为两种。1)直接使物质跨过胞质蛋白的质膜进行转运，例如FGF2的分泌。2)胞内转运中间物，例如酰基辅酶A结合蛋白的分泌76。抑制剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商CP-10447(Ci6Hi3BrN2O)载脂蛋白B(apoB)分泌抑制微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP,MTTP)并刺激apoB的早期内质网降解溶于DMSO(10mg/ml)。抑制甘油三酯分泌而不影响其合成。人体肝脏微粒体甘油三酯转运活性的有效抑制剂。777879,Sigma-Aldrich,PfizerExo1(C15H12NFO3)胞吐在哺乳动物细胞中通过诱导高尔基体膜解体和成管以及重新运输回内质

27、网来可逆地抑制从内质网到高尔基体间的囊泡运输。溶于DMSO、DMF、甲醇或乙醇。它的影响仅限于高尔基体，不能影响其它的内吞细胞器。活化高尔基ARF1(ADP核糖基化因子)GTP酶。80,Sigma-Aldrich,EMDMillipore类似于BFA但是Exo2(廿18叫025)胞吐选择性更强。可能的靶点包括TGN(反面高尔基网)、高尔基体和一部分早期内涵溶于DMSO(20mg/ml)。抑制志贺毒素运送到内质网。作为胞内运输的一种化学探针。818283,Sigma-Aldrich,SantaCruzBiotechnology体生长激素抑制素(C76Hi04Ni80i9S2)生长激素、胰岛素和胰

28、高血糖素抑制生长激素、胰岛素和胰高血糖素的内源性肽溶于5%乙酸，水中溶解度为0.30mg/ml。它是一个环状十四肽。同样抑制电压门控Ca2+通道。848586,TocrisBioscience,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore胃肠胰肽激素和生长激素它是一个合成的8788,奥曲肽(C49H66N10O10S2)较长作用八肽，是生长激素抑制素溶于水Sigma-Aldrich,Bachem,Tocris糸的类似物。Bioscience它靶向于GHRH(生长激素释放SXN101742,一种定向分泌抑制剂(TSI)生长激素激素)受体并使参与GH(生长激素)胞吐过程的TSI是来自于肉

29、毒毒素(BoNTs)的重组蛋白。8990,SyntaxinLtd.SNARE蛋白耗尽。抗FGF1抗体酸性成纤维酸性成纤维细胞生长因子抗体/Beta血管内91929394,表6.常用的分泌抑制剂激活剂a-蛛毒素细胞生长因皮细胞生长因子抗体。产自于兔子或小鼠。子(aFGF)与人反应。其应用包括WB、ELISA、IHC-P及中和。用于各种应用的方法及浓度请参考生产商的操作流程靶点机制作用特点及效果溶于50%甘油。那格列奈(C19H27NO3)血管紧张素II(C50H71N13O12)Sigma-aldrich,Abcam,Origene,ThermoScientific.参考文献、来源及供应商与蛛毒

30、素受体结合。利用诱导胞吐Ca2+依赖性和非依赖性的作用机制。引起神经递质的释放。导致Ca2+非依赖性的胰岛素胞吐。刺激皮质星形胶质细胞培养物中Ca2+非依赖性的GABA和谷氨酸释放。溶于DMSO胰岛素醛固酮959697,AlomoneLabs,EMD/Millipore,EnzoLifeSciences通过增加胞浆中Ca2+浓度来引起胰腺0-细胞中的胰岛素分泌。(5mg/ml)。它是Kir6.2/SUR1通道的抑制剂。刺激ATP敏感性钾通道依赖性和非依赖性胰岛素分泌。降9899100101,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,TCIAmerica血糖药。溶于水或5%乙

31、酸。刺激血管生成并增加微血管密度。有很强导致肾上的血管收缩效腺中的醛果。在血管平滑固酮释放肌细胞中活化p60c-src和ERK1/2、JNK102103104,Sigma-Aldrich,Calbiochem/EMD/Millipore.及p38丝裂原活化蛋白激酶。甲苯磺丁脲(磺脲类)(C12H18N2O3S)胰岛素通过直接溶于DMSO或作用于胰100%乙醇。被105106107108,SantaCruzBiotechnology,腺0细胞CYP2C9(甲苯中的ATP敏感性钾通道引起胰岛素释放磺丁脲羟化酶)所代谢Sigma-Aldrich,Abeam.瑞格列奈(C27H36N2O4)胰岛素关闭

32、胰腺0细胞质膜上的ATP敏感性钾(KATP)通道在DMSO中溶解度达100mM,在乙醇中溶解度达100mM。体内具有降血糖效果。109110111112,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience溶于水(100mg/ml)、甲醇油酸钠(CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COONa)载脂蛋白B100(Apo-B)增加肝脏中的载脂蛋白B100分泌(50mg/ml)和乙醇。激活肝细胞中的蛋白激酶C(PKC)。在较高生理剂量下抑制载脂蛋白B100分113114,SantaCruzBiotechnology,Sigma-Aldrieh,TCIAmerica泌。溶于5%的乙酸或水。

33、它是一种分泌素(C130H220N44O40)胰液刺激富含碳酸盐的胰液分泌强碱性胃肠肽类激素。放松平滑肌。引起胰管线中剂量依赖性的cAMP积累。115116117,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore表7.常用的分泌激活剂。内吞细胞通过内陷产生的囊泡从膜上脱落来吸收大分子和溶质的过程被称为“内吞”。内吞可大致分为两类：1)吞噬和2)胞饮。吞噬是特定细胞摄取大颗粒。胞饮是所有细胞中都发生的摄入液体和溶质过程。当泛指细胞内化时，“吞噬”和“胞饮”多数被用作同义词。主要有三种内吞途径：1)网格蛋白介导的内吞作用，2)胞膜窖介导的内吞作用和3)巨胞饮。在这三种内吞途径中，内化步骤始于

34、质膜内陷并将该膜转变为称作内涵体的封闭囊泡。每个途径都有控制内化的一套分子。抑制剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商氯丙嗪网格引起网格蛋白溶于水和甲醇。抑制钙118119,SantaCruz(C17H19CIN2SHCl)蛋白网络在内涵体调蛋白依赖性的环核Biotechnology,介导膜上的组装并苷酸磷酸二酯酶和一的内阻止细胞表面氧化氮合成酶激活。对吞作上的被膜小窝白血病细胞具有细胞用组装。毒性和抗增殖活性。Sigma-Aldrich,EMD/Millipore溶于DMSOo可渗透胞膜细胞。抑制表皮生长因窖介可逆性抑制酪子受体激酶。抗血管生金雀异黄素（C15H10O5）导的氨酸激酶

35、成剂。抑制肿瘤细胞增内吞殖。抑制肿瘤细胞分作用化。体外抑制拓扑异构酶II活性。胞膜窖介导的清除胆固醇内吞作用水中溶解度达50mg/mlo由相同的环状a1,4-糖苷键连接的D-葡萄吡喃糖单元形成的七元环。形成包合物。常用的络合剂。120121119122,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore0-环糊精（c42h70o35）123124,Sigma-AldrichFisherScientific,EMD/Millipore盐酸阿米洛利C6H8ClN7O.HCl.H2O）巨胞饮抑制Na+/H+交换。降低膜下pH值。阻止Rac1和Cdc42的信号传导。S水中溶解度达50mg/mloT

36、-型钙通道阻滞剂。抑制尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）o抑制血管生成。125126127,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD4Bioscience,AlomoneLabs网格蛋白溶于DMSO和乙醇。介导抑制动力蛋白同样抑制Drp1（线粒128129130,的内1和2的GTP体）。会引起纤维化并Sigma-Aldrich,Tocris吞作酶活性（IC50在胸膜间皮细胞中诱Bioscience,SantaCruz用中5015pM)。导PAI-1。抑制BSC1Biotechnology,的动力蛋白细胞的细胞铺展和迁移。EMD4Bioscience,AbcamDynas

37、ore(C18H14N2O4)非律平（C35H58O11）胞膜窖介导的内吞作用与膜上的胆固醇结合并形成超微机构聚集与复合。非律平由4个异构的多烯大环内酯组成。非律平III是主要成分。抗生素和抗真菌。抑制朊蛋白（PrP）的内吞。123131132133,CaymanChemical,Sigma-Aldrich,SantaCruzBiotechnology.制霉菌素（C47H75NO17）胞膜窖介导的内吞胆固醇隔离。溶于DMSO、DMF、乙醇和甲醇。抗微生物（酵母、支原体）。增加Na+-K+泵活性。134135136,Sigma-Aldrich,EMD4Bioscience,Invitrogen内

38、涵阻止内涵体酸溶于氯仿、乙醇和甲醇。聚醚类抗生素。Na+离子载体。阻断糖莫能菌素（C36H61O11.Na）体成366111熟化蛋白分泌。阻断神经酰胺在高尔基体中的运输137138139140,Sigma-Aldrich,EMD/Millipore,EnzoLifeSciences磷酸氯喹(Cl8H26C叫POq)它是一种可以装入内涵体和内涵溶酶体这样的体成酸性囊泡的弱熟碱，从而抑制内涵体酸化和溶酶体酶活性。水中溶解度达100mM。内涵体Toll样受体抑制剂（拮抗剂）。在许多癌症细胞系中抑制细胞生长并诱导细胞死亡。128139141,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience

39、,Imgenex渥曼青霉素（C23H24O8）142143144145,CellSignalingTechnology,Sigma-Aldrich,TocrisBioscience,EMD/Millipore抑制磷脂酰肌巨胞醇-3激酶（PI3饮激酶）（IC50=5nM）溶于DMSO。具有细胞通透性。在很高浓度时抑制肌球蛋白轻链激酶和PI4激酶活性。抑制polo样激酶1（PLK1）（IC50=5.850nM)。表8常用的内吞作用抑制剂。HOE.64和LY294002是另外两种巨胞饮抑制剂。单丹磺酰尸胺和巴弗洛霉素A1是用于研究网格蛋白介导的内吞作用的另外两种抑制剂。参考文献、来源及供应商激活剂靶

40、点机制作用特点及效果在体内和体外DMSO中可溶解至佛波醇-12-十四酸酯巨都激活蛋白激100mM，在乙醇中可146147148,Sigma-Aldrich,-13-乙酸酯（PMA）胞酶C。诱导膜溶解至10mM。具有感EnzoLifeSciences,Tocris（C36H56O8）（佛波酯）饮转运和酶激光性。强力的肿瘤诱发Bioscience,Abcam活。物内溶于DMSO和乙醇。12-O-十四烷酰佛波醋结合并激活蛋具有感光性。强力的肿149150151152,酸酯-13(TPA)吞瘤诱发物。人单核作用白激酶CSigma-Aldrich,Cellsignaling（C36H56O8）（佛波酯）

41、U937细胞中诱导凋technology亡。表9常用的内吞作用激活剂。12,13-二丁酸佛波醇是另一种类似于PMA和TPA的佛波酯，被用于刺激内吞摄取。核运输核运输主要是通过核孔复合物（NPC）进行的。离子和小分子是通过被动扩散穿越NPC来进行转运的。较大核蛋白质、RNA及核糖核蛋白的输入由核定位信号（NLS）介导停靠于核孔。另一方面，核输出是由核输出信号（NES）介导的。核输入途径大致由四步组成：1）在输入物、输入蛋白a和输入蛋白B间形成三聚复合物，2）将复合物停靠于NPC（核孔复合物），3）通过中央通道进行转位，4）复合物解离并将输入物释放到核质中。抑制剂靶机制点核通过直接与核孔相互作用来

42、麦胚凝集素（WGA）输抑制核蛋白运入输。直接与CRM1核（输出蛋白来普霉素A(C32H46O6)输-1）这一主要出的核输出蛋白结合。抑制核运输受体Crm1，该蛋核白用于识别底来普霉素B（C33H48O6）输物蛋白中被称出为核输出序列（NES）的短肽核制含有RatjadoneA(C28H40O5)输LR-NES(富含出亮氨酸的核输出信号）的蛋白依维菌素（C48H74O14核输入最近被发现对(22,23-dihydroavermectin于输入蛋白B1a)+c47h72o14a/0介导的核(22,23dihydroavermectin输入具有广谱通过与CRM1共价结合来抑作用特点及效果参考文献、来

43、源及供应商细胞生物学中广泛使用的一种外源凝集素。对N-乙酰-0-D-葡糖胺基和N-乙153154155,酰-0-D-葡糖胺寡聚物有亲Sigma-Aldrich,和性。用于细胞粘附研究。PolysciencesInc.,也用于影响淋巴细胞活化Invitrogen及研究基于糖类的治疗方法。溶于甲醇和乙醇。来普霉156157,素A和B的性质是很相似Sigma-Aldrich,的。具有细胞通透性，抗SantaCruz真菌及抗生素。可以诱导Biotechnology,野生型ERK5在核内积聚。EMD/Millipore溶于乙醇。抗真菌、抗生素。抗肿瘤细胞毒素。比来普霉素A效力强两倍。158159160,

44、LC受来普霉素B影响的含labs,Sigma-Aldrich,NES的蛋白包括HIV-1CellsignalingREV、肌动蛋白、c-Abl、technology,细胞周期蛋白B1、EMD/MilliporeMDM2/p53、MPF、PKA和MEK。溶于含水缓冲液和甲醇。161162163,可通透细胞的聚酮。抗生Sigma-Aldrich,素。与来普霉素B一样有EMD/Millipore,Cell效。抑制扩增。导致肿瘤signaling细胞在G1期发生细胞周technology,Santa期阻滞。CruzBiotech.抗病毒。对于研究蛋白质164165166,MP核输入十分有用。调节谷Bi

45、omedicals,氨酸-GABA活化的氯通Sigma-Aldrich,道。FisherScientificBib)作用表10.核运输的常用抑制剂。一般为了诱导核输入会将设计成NLS的肽段结合在输入底物上。另一方面，针对诸如输入蛋白和运蛋白等可以识别NLS的核运输受体而设计的细胞通透性肽被用于抑制核运输167。细胞收缩在特定胞内Ca2+农度下，磷脂酶C(PLC)、蛋白激酶C(PKC)、RhoGTP酶、Rho激酶(RhoA的下游效应蛋白)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCPh)都会参与细胞收缩过程。放大ERPRlioRockpAI)PActinPhivated)MLCKI

46、nteminreceiptorsMLCPh(hiactivated)MLCECMReceiptorsthatactivatePLCATPRlio-GTPMLC图2.细胞收缩MLCK和MLCPh的作用：细胞收缩主要由肌动蛋白和肌球蛋白介导。肌球蛋白轻链的磷酸化会诱发肌动蛋白和肌球蛋白分子之间的相互作用。肌球蛋白轻链的磷酸化是由肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活化与肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCPh)之间的平衡所决定的。RhoGTP酶和Rho激酶的作用:细胞通过粘附位点与微环境间的相互作用会活化RhoGTP酶。活化的RhoGTP酶会与丝氨酸/苏氨酸激酶、Rho激酶、ROK及相关的p160ROCK等激酶结合

47、并提高它们的活性。活化的Rho-激酶会抑制肌球蛋白磷酸酶的活性，从而促使肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化。PLC、Ca2+和PKC的作用168:收缩过程始于磷脂酶C（PLC）活化，从而产生两种第二信使，甘油二酯（DG）和肌醇1,4,5-三磷酸（IP3）。IP3会导致Ca2+从肌质网中释放出来。Ca2+会以两种方式来诱导收缩：1）Ca2+与DG一起激活蛋白激酶C。PKC则通过使L型Ca2+通道和其它调控横桥周期的蛋白发生磷酸化来进一步促进收缩，2）Ca2+与钙调蛋白结合并活化肌球蛋白轻链激酶（MLCK）。现在用于研究细胞收缩途径的各种抑制剂和激活剂包括:抑制剂靶点机制作用特点及效果参考文献、来源及供应商溶于DMSO和甲醇。也抑制蛋抑制肌球蛋白1