高中生物选修一生物技术实践知识点总结

1、高中生物选修一生物技术实践知识点总结专题一 传统发酵技术的应用课题一 果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵3、 酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖（ 主要 ） 分裂生殖孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H2Q+6Qf6CO+6HzO5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。QH2Qf2GHOH 2CO6、 20左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18 -25 7、 在葡萄酒自然发酵的过程中, 起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌. 在发酵

2、过程中 , 随着酒精浓度的提高, 红葡萄皮的色素也进入发酵液, 使葡萄酒呈现深红色. 在缺氧 呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。8、醋酸菌是单细胞细菌（ 原核生物）, 代谢类型是异养需氧型, 生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。2c2H50M 4Q-CHCOOH 6H2O10、控制发酵条件的作用醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为3035C,控制好发酵温度，使发酵时间缩短

3、，又减少杂菌污染的机会。有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒 精为底物的氧化。11、实验流程：挑选葡萄-冲洗-榨汁-酒精发酵-果酒（-醋酸发酵-果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2mL,再滴入物质的量浓度为 3mol/L的H2SO43 滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3 滴，振荡试管，观察颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下

4、的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。疑难解答（ 1 ）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。（ 2）你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。（3）制葡萄酒时，为什么要将温度控制在 1825 C?制葡萄醋时，为什么要将温度控制在 30 35？温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度

5、范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为3035C,因此要将温度控制在3035 C。专题二 微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养1 .培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行 微生物培养的物质基础。2 .培养基按照 物理性质 可分为液体培养基 半固体培养基 和固体培养基。在液体培养基中加入凝 固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培 养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断 是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常

6、用于观察微生物的运动及菌种保藏等。3 .按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质 配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。4 .按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中 加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类 别的微生物。划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观

7、察微生物的运动、 分类、鉴定固体培养基加凝固剂，如琼脂微生物分离、鉴定、活菌计数化学组成天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确（用化学成分已 知的化学物质配成）分类、鉴定目的用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以 抑制不需要的微生物的生长，促 进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养 基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物5.培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子 等。6.碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如C。、NaHC湾无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳

8、源。单质碳不能作为碳源。7 .氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH、NG-、NH+ （无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白陈（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用 N。8 .培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加 维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调 至中性或微碱性，培养厌氧型微生物 是则需要提供 无氧的条件9 .无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进

9、行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。10 .消毒与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽抱和抱子）。消毒方法常用 煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体） 还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽抱和抱子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸

10、汽灭菌比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽抱和抱子能否被消灭*较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯消毒与灭菌的区别比较项目灭菌条件使用较为温和的理化方法使用强烈的理化因素结果杀死物体表卸或内部一部分对人体有害的微生 物（不包括芽抱和抱子）杀死物体内外所有的微生物，包括 芽泡和抱子适用实验操作的空间、操作者的衣服和手微生物的培养器皿、接种用具和培至至7常用方

11、法煮沸消毒法（如在 100C,煮沸56 min）、巴 氏消毒法（如在80 C,煮15 min ）；使用酒精、 氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒灼烧火菌、干热火菌、局压蒸汽火 菌三种常用灭菌方法的比较灭菌方法灭菌条件火菌时间适用材料或用具灼烧火菌酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红接种环、接种针或其他金属工具干热火菌干热火菌箱内，160170c12 h玻璃器皿（吸管、培养皿） 和金属用具等局压蒸汽灭菌100kPa, 121c15 30 min11.制作牛肉膏蛋白豚固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶

12、，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约1020mD倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需 510min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿 底在上。12.倒平板操作的讨论（1）培养基灭菌后，需要冷却到 50c左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。（ 2）为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。（ 3）平板冷凝后，为什么要将

13、平板倒置？答： 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（ 4）在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。13纯化大肠杆菌（ 1 ）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和 稀释涂布平板法。（ 2） 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖

14、而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。（ 3） 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和 涂布平板操作两步。（ 4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的 是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。（ 5）平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。将试管口通过火焰。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。将试管通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内， 划三至五条平行线

15、，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从 第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。（ 6）涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒 精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810s。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。14平板划线操作的讨论（ 1 ） 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答： 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养

16、物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。（ 2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。（ 3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落

17、。15涂布平板操作的讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。16菌种的保存（ 1 ）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。临时保藏方法：将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将t管放入 4c的冰箱中保藏。以后每 36个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。 缺点 ：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（ 2）对于需要长期保存

18、的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在 20的冷冻箱中保存。疑难解答（ 1 ）生物的营养营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。（ 2）确定培养基制作是否合格的方法将未接种的培养基在恒温箱中保温12天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。课题二 土壤中分解尿素

19、的细菌的分离与计数1 尿素：是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶，尿素最初是从人的尿液中发现的2筛选菌株（ 1 ）实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH 等） ，同时抑制或阻止其他微生物生长。（ 2）选择性培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。（ 3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择

20、培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。3统计菌落数目（ 1 ）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和 显微镜直接计数。（ 2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数， 并取平均值。统计的菌落 数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。(3)采用此方法的注意事项：1. 一般选取菌

21、落数在 30300之间的平板进行计数 2.为了防止菌 落蔓延，影响计数，可在培养基中加入TTC 3.本法仅限于形成菌落的微生物4 .设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照试验组，排除 任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。5 .实验设计实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。(1) 土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含

22、有机物、潮湿、pH 7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约 38cm的土壤层取样。(2)样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 30300之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104 1 0 5 1 06测定放线菌的数量，一般选用103 10 4 105测定真菌的数量，一般选用 102 10 3 104(3)微生物的培养与观察不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌3037c 12天，放线菌2528c 57天霉菌2528c 34天。每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳

23、定 时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一 定的培养条件下(相同的培养基、唯独及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色疑难解答(1)如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数 =(C/V) *M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml), M代表稀释倍数专题三植物的组织培养技术 课题一菊花的组织培养 1.植物组织培养的基本过程(1)细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、结

24、构和生理功能上出现稳定性差异的过 程。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组 织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的 植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。脱分化产 生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分 化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。(2)植物细胞工程具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的能力，即每个生物 细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时IW

25、空间条件下,通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。(3)植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖：培育脱毒作物：制作人工种子:培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。(4)细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。(5)比较根尖分生组织和愈伤组织的异同组织类型细胞来源细胞形态细胞结构细胞排列细胞去向根尖 分生组织受精卵止方形无液泡紧密分化成多种 细胞组织愈伤组织高度分化细胞高度液泡化疏松一再分化成新个体相同点都通过有丝分裂进行细胞增殖2 .影响植物组织培养的条件材料：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大

26、。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。营养：离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常用的培养基是 MSI养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是Fe、Mn日Zn、Clk Mq I、Co,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。激素：植物激素中 生长素和细胞分裂素 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关

27、键性激素。在生 长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂 素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素， 后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高生长素/细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时促芽分化，抑根形成比值适中促进愈伤组织生长环境条件：PH温度、光等环境条件。不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在左右，温度控制在1822C,并且每日用日光灯照射 12h.3 .操作流程(1)配制MS固体培养基：配制各种母液：

28、将各种成分按配方比例配制成的浓缩液(培养基母液)。 使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸储水稀释。 配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液， 并用蒸储水定容到 1000毫升。 在菊花组织培养中，可以不添加植物激素。原因是菊花茎段组织培养比较容易。 灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 MS培养基中各种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比，MS养基有哪些特点？大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨 酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特 殊营养需求。微生物培养基以

29、 有机营养为主，MS养基则需提供大量 无机营养。(2)外植体的消毒 外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%勺酒精中摇动23次，持续67s,立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为 %勺氯化汞溶液中12min。取出后，在无菌水中至少清洗 3次, 漂洗消毒液。注意：对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。(3)接种：接种过程中插入外植体时形态

30、学上端朝上，每个锥形瓶接种78个外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作。(4)培养：应该放在无菌箱中进行， 并定期进行消毒，保持适宜的温度(1822C)和光照(12h)(5)移栽：栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进 行露天栽培。(6)栽培外植体在培养过程中可能会被污染，原因有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。专题四酶的研究与应用课题1果胶酶在果汁生产中的作用1 .基础知识活动1:阅读“果胶酶的作用”，讨论并回答下列

31、问题：1.1 果胶是植物细胞壁和胞间层的主要组成成分之一。1. 2在果汁加工中，果胶的存在易导致果汁出汁率低，果汁浑浊。1. 3果胶酶分解果胶的作用是：瓦解植物的细胞壁及胞间层，使榨取果汁更容易，把果胶分解为可溶性的半乳糖醛酸，使浑浊的果汁变得澄清，因此可以解决果汁加工中出现的问题。1. 4果胶酶是一类酶的总称，包括：多聚半乳糖醛酸 酶、 果胶分解 酶和 果胶酯 酶。思考13在植物细胞工程中果胶酶的作用是与纤维素酶一起除去植物细胞的细胞壁。活动2:阅读“酶的活性与影响酶活性的因素”，讨论并回答下列问题：1. 5酶的活性是指：酶催化一定化学反应的能力。1. 6酶的活性高低可用一定条件下的酶促反应

32、速度 来表示,即单位时间、单位体积内 反应物消耗量 或产物生成量 来表示。2. 7影响酶活性的因素有：温度 、PH 、 激活剂 和 抑制剂 等。活动3:阅读“果胶酶的用量”，讨论并回答下列问题：食品工业生产中最常用的果胶酶是通过霉菌发酵产生。根据影响酶活性的因素，在实际生产中我们如何获得果胶酶的最高活性？确定果胶酶的最适温度、最适PH等条件。2.实验设计活动4:阅读“资料一：探究温度和 PH对酶的活性的影响”，思考下列问题并尝试写出实验 过程：3. 1实验目的：定量测定温度或 pH对果胶酶活性的影响。R思考21该实验与必修I中探究“影响酶活性的条件”实验有何不同？ 前者属于是定量分析实验，后者

33、属于定性分析实验。2. 2实验原理：果胶酶瓦解细胞壁和胞间层增大果汁产量；果胶酶催化分解果胶增大果汁 澄清度。3. 3变量设计与控制:你确定的温度梯度（或 pH梯度）为10 C或5c （或、）。实验的自变量是 温度（或pH），控制自变量的方法是利用恒温水浴锅（或滴加酸碱等）实验的因变量是酶的活性 ，检测因变量的方法是测定果汁的产出量或澄清度一R思考33果汁与果胶酶在混合之前，分装在不同试管中用同一恒温处理的目的是什么？保证果汁与果胶酶混合前后的温度相同，避免因混合导致温度变化而影响果胶酶活性。R思考43该实验中是否设置了对照？若设置，那么它是如何设置的？若没有，则如何进行设置？已经设置了对照。

34、不同的温度设置之间可以相互对照。R思考53怎样排除PH和其他因素对实验结果的干扰？目的是什么 ？控制PH和其他因素相同，保证只有温度一个变量对果胶酶的活性产生影响。R思考63教材中A、B两个同学的实验设计有何不同？测定的因变量不同（A测定果汁产量，B测定果汁澄清度）。4. 操作提示活动6:阅读“操作提示”，回答下列问题3. 1制备果泥：用 榨汁机 榨制果泥。在榨制橙子汁时应怎样处理橙皮？不必去橙皮3. 2在探究不同PH对果胶酶活性的影响时，可以用%的NaOH液和盐酸 调节pH。3 . 3在果胶酶处理果泥时，为了是果胶酶能充分地催化反应，如何操作？用玻璃棒不时搅拌。4 .结果分析与评价将以下某同

35、学极魁麻族眼睚图的方法以自变量为横坐标、 以因变量为纵坐标建立直角坐标系。注明坐标轴名的名称、单位、坐标原点以及曲线名称。每个坐标轴上的取值单位要相等。将实验数据标在坐标系中，并用各种线型连接起来。T 一 （也雕堂总结、点加01520253035404550果汁量/ml124654321,制备水果泥专题五DNA和蛋白质技术课题六 血红蛋白的提取和分离一、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。1.凝胶色谱法(分配色谱法)：(1)原理：分子量 大的分子通过 多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子 穿过多孔凝

36、胶颗粒内部，路程长，流动慢 。(2)凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。(3)分离过程：混合物上柱一洗脱一大分子流动快、小分子流动慢一收集大分子一收集小分子*洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。(4)作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。2 .缓冲溶液(1)原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成(如HfeCONaHCQ NaH2PO4/NaHPO等)，调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。(2) 缓冲液作用： 抵制外界酸、碱对溶液 pH的干扰而保持 pH稳定。3 .凝胶电泳法：(1)原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同,在电

37、场中受到的作用力大小、 方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。(2)分离方法： 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。(3)分离过程：在一定 pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS形成“蛋白质-SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。二、实验步骤1 .样品处理红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是 去除杂蛋白，采集的血样要及时采用 低速短时间 离心分离红细胞，然 后用胶头吸管吸出上层透明的 黄色血浆，将下层暗红色的 红细胞液体 倒入烧杯,再加入 五 倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min,低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至 上清液 中没有黄色，

38、表明红细胞已洗涤干净。血红蛋白的释放在蒸储水和甲苯作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白。注：加入蒸储水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有 利于血红蛋白的释放和分离。2 .粗分离分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的 甲苯层，第2层为白色薄层固体，是 脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是 血红蛋白的水溶 巡，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层， 于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。透析取1mL的血红蛋白溶液装入 透析袋中,将透析袋放入盛有 300mL的物质的量的浓度

39、为 20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中 分子量较小 的杂质,或用于更换 样品的缓冲液。3纯化调节缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝J胶面平齐，关闭出口。加入蛋白质样品：用吸管将透析后的样品沿管壁环绕移动加到色谱柱的顶端。加样后，I打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全渗入凝胶层后，J关闭出口。调节缓冲液面：加入20mmol/L 的磷酸缓冲液到适当高度洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱。收集分装蛋白质：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集。4.纯度鉴定-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）三、注意事项1. 电泳技

40、术电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。2. 红细胞的洗涤如果 分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。3如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。4为什么凝胶的装填要紧密、均匀？如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。5沸水浴处理加入洗脱液的湿凝胶的目的不但 节约时间，还能 除去凝胶中可能带有的微生物和 排除凝胶内的空气。6 G-75“G代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得