DNA提取实验报告

1、生物学大实验二实验名称：质粒扩增、提取和鉴定实验实验目的通过对智力扩增、提取和鉴定试验的实验原理介绍和实际操作，加深对分子生物学基本技术的理解和掌握。实验仪器设备：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、不同型号移液枪假设干支、磁力搅拌器、恒温水浴锅、电炉、制冰机、琼脂糖凝胶电泳仪、超净工作台等。实验原理：质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，通过对细菌、放线菌和真菌的培养来实现对质粒的扩增。经过处理的线状dna在外界环境恢复正常的时候不能够复性而质粒dna可以复性，从而可以实现质粒dna和染色体dna的别离。限制性内切酶能特意地结合于一端被称为限制性酶识别系列的dna系列之内或其附近的特异

2、位点上，并切割dna。当对提取的质粒dna进行电泳时，同一质粒dna其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。实验步骤：一质粒扩增1普通lb固体培养基制备：制备lb培养基，倒入灭菌瓶中高压灭菌，待完全冷却后，保存备用。2将大肠杆菌接种于lb培养基中，37C振荡培养过夜（200转/分）二质粒dna的提取（碱法）1将菌液倒入的微量离心管中，12000rpm离心一分30秒，弃去上清液，以得到较多的细菌沉淀；2、将微量离心管开口倒置在卫生纸上，使离心管底部的液体流尽。3、加入1001用冰预冷的溶液i,剧烈振荡，将沉淀彻底悬浮，然后室温放置5分钟。4、加入2001现配的溶液ii,盖紧管口，轻

3、轻快速颠倒离心管不要振荡，以防止dna断裂，使混合物混匀，冰浴510分钟。5、加入150g预冷的溶液iii,盖紧管口，温和颠倒混匀，使粘稠地细菌裂解物均匀地分布于溶液iii中，冰浴5分钟。6、取上部水相，移入新的离心管，加入2倍体积预冷的无水乙醇也可同时加入1/10倍体积的醋酸钠，震荡混匀，室温放置10分钟沉淀双链dna,然后4C,12000rpm离心10min。7、弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使离心管底部的液体流尽后，加入预冷的1ml70%乙醇。8、弃去上清液，将离心管倒置于卫生纸上，使液体流尽，置dna干燥510分钟。9、吸除上清液，将管口倒置于卫生纸上使液体流尽，真空干燥10分钟

4、或室温干燥。10、将沉淀溶于34ulte缓冲液或灭菌水ph8.0中，储于-20C冰箱中三dna酶切反应1、将洁净干燥并经灭菌的eppendorf管最好0.5ml编号，用微量移液枪分别加入dnau1和相应的限制性内切酶反应10缓冲液2ul,将管内溶液混匀后加入酶液，用手指轻弹管壁使溶液混匀，也可以用微量离心机甩一下，使溶液集中在管底。此步操作是整个实验成败的关键，要防止错加，漏加。使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间，以免活性降低。2、混匀反应体系后，将eppendorf管置于适当的支持物上如插在泡沫塑料板上，37C水浴锅保温2-3小时，使酶切反应完全。3、每管加入2ul0.1mol/l

5、edtaph8.0,混匀，以停止反应，置于冰箱之保存备用。四dna的琼脂糖凝胶电泳1、取5Xtbe缓冲液100ml加蒸储水至1000ml,配成0.5xtbe稀释缓冲液，待用。2、胶液的制备：称取3g琼脂糖置于1000ml锥形瓶中，加入300ml0.5xtbe稀释缓冲液，加入微波炉里加热至琼脂糖全部融化，取出摇匀，此为1%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使其附于瓶盖上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水分蒸发。3、胶版的制备：想冷却至50-60C的琼脂糖胶液中加入漠化乙锭eb溶液使其终浓度为。倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀，速度也不可太快，否则溶液出现气泡，待胶完全凝固后

6、，拔出梳子注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入0.5uxtbe稀释缓冲液至页面恰好没过胶板上外表4、加样：取2001的酶解液与2ul10><样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中，每加完一个样品要更换tip头以防止互相污染，注意上样时要小心操做，防止损坏凝胶或将样品槽底部的凝胶刺穿5、电泳：加完样后合上电泳槽盖，立即接通电源，控制电压保持在60-80V,电流在40ma以上，当漠酚蓝条带移动到距凝胶前沿2cm时停止电泳6、观察和拍照五实验结果六实验结论通过本次试验加深了对分子生物学以及基因工程的深入了解，右上第三第四根亮柱是我的结果。结果显示，第三条中酶切效果良好，rna被降解的

7、很完全，第四根没有被酶切，质粒dna跟rna同时存在，出现了两条亮带，质粒dna跟rna别离效果较好。本实验需要细致认真的完成，所以特别在凝胶电泳中要十分注意以下事项：1取出梳子之前，一定要耐心等待琼脂糖凝胶的凝固，拔梳子是一定要手稳，而且要垂直拔出；2点样要细心，枪头不要碰到凝胶，以免点样枪刺破凝胶；3电泳时，电极一定要连接正确4染色剂漠化乙锭是强诱变剂，有致癌性和强毒性，使用时一定要带一次性手套，使用后废液不可不可随意丢弃。生物科学071班：刘欢学号：20073305篇二：dna的提取和电泳实验报告基因组dna的提取和电泳实验五实验报告一、实验目的了解dna提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分

8、析dna技术。二、器材和试剂1. 器材水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等2. 试剂1mol/ltris.cl(ph8.0)的配制：称取12.11g的tris,置于80ml的ddh20,加入浓盐酸约4.2ml,调节ph值至8.0,定容至100ml。0.5mol/ledta(ph8.0)的配制：18.61gna2edta-2h2o,加入80ml的ddh2o,用naoh颗粒调ph值至8.0约需2g，定容至100ml。1. 提取缓冲液的配制：100mmol/ltris.cl(ph8.0),20mmol/ledta,500mmol/lnacl,1. 5%sds2. 80/

9、4/16氯仿：异戊醇：乙醇6?loadingbuffer:0.15%漠酚蓝，0.15%二甲苯青ff,5mmol/ledta,50%甘油三、实验步骤1. 在15ml的离心管中加入5ml的提取缓冲液，60C水浴预热。2. 植物叶1-2g,剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状，60C水浴保温20min,其间不时缓慢摇动。3. 5000rpm离心5分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中，加入5ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀需带手套，防止皮肤损伤，室温下静置5-10分钟，使水相和有机相混匀。4. 室温下离心5000rpm离心5分钟。仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，

10、混匀，室温下放置片刻即出现絮状沉淀。5. 离心5000rpm,离心5min,弃去异丙醇，室温晾干。6. 视沉淀多少，加入1ml左右ddh2o溶解，可在60C水浴中放置15分钟以上助溶。取dna样品51,加入1l6?loadingbuffer,混匀，加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔中，电泳，检测dna的分子大小。4、实验结果和讨论实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的，我们组3人，实验过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。下面是实验过程中的注意点：1、研磨不能太久太用力，会导致dna片段断掉。2、实验室的某些试剂，如氯仿，有毒性，应带手套进行。电泳的时候不知

11、是时间的原因还是都做得不错，结果相差不是很远如上图，第五组和第六组是我们的，第六组是我自己加的。实验过程中要耐心细心，这样才能得到满意的结果。园艺101石颖20100107011篇三：浙大生化实验报告dna的提取实验报告课程名称：生化实验甲指导老师：成绩：实验名称：植物基因组dna的提取实验类型：生化定性实验同组学生：及纯度与含量的测定一、实验目的和要求必填二、实验内容和原理必填三、实验材料与试剂必填四、实验器材与仪器必填五、操作方法和实验步骤必填六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析必填八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习并掌握植物基因组dna的提取原理和方法；2、了解琼脂糖凝胶电泳检

12、测核酸的原理和操作；3、学习并掌握对电泳检测基因组dna结果的初步分析；4、学习紫外吸收法测定核酸基本原理和方法；5、学习并掌握紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量的方法。二、实验基本原理植物基因组dna的提取方法就其提取原理主要有二种：十六烷基三乙基漠化铉ctab）法、十二烷基硫酸钠（sds）法。十六烷基三甲基漠化铉和十二烷基硫酸钠等离子型外表活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使dna得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸（dna、rna）水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使dna沉淀，

13、沉淀dna溶于te溶液中，即得植物基因组dna溶液。由于植物中的次生代谢产物一遂酚类化合物可介导dna降解，而多糖的污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题，这些多糖能抑制限制酶、连接酶及dna聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。传统的ctab-dna提取法步骤多，较烦琐，dna产率低，而且由于酚很难完全去除，容易影响以后的酶切等工作的效率。sds法操作简单，温和，也可提取到较高分子量dna,但所得产物含糖类杂质较多，这将直接影响dna的限制性核酸内切酶酶切效果。由于植物细胞匀浆含有多种酶类（尤其是氧化酶类）对dna的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强复原剂（如疏基乙醇）以降低这些

14、酶类的活性。本实验采用十二烷基硫酸钠（sds）法提取植物基因组dna,基因组dna提取后，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组dna分子量大小、纯度；用紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量。dna的琼脂糖凝胶电泳鉴定：dna分子在琼脂糖凝胶中有电荷效应和分子筛效应。dna分子在高于等电点的溶液中带负电荷，它在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，dna分子的迁移速度取决于分子筛效应，即具有不同的相对分子量的dna片段泳动速度不同。dna片断在凝胶中当用低浓度的荧光嵌入染料漠化乙锭eb染色后，在紫外光下可见橙红色带，并可确定dna片断在凝胶中的位置。紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量核酸一na和rna

15、所含碱基的苯环结构喋吟环和嚅嚏环的共轴双键具有紫外吸收的性质，它们在260nm处有最大的吸收峰。因此，可以用260nm波长进行核酸含量的测定。波长为260nm时，dna或rna的光密度的大小不仅与总含量有关，也与它们的不同构型而有差异。对标准样品来说，浓度为1g/ml时，dna钠盐的。当od260=1时，双链dna含量约为50g/ml单链dna含量约为37g/mlrna含量约为40g/ml寡核昔酸含量约为30g/ml由于底物不同有差异1、核酸样品dna、rna含量的测定：如用1cm光径石英比色皿，用h2o稀释dna或rna样品n倍并以h2o为空白对照，根据此时读出的od260值即可计算出样品稀

16、释前dna的含量：dnag/=50xod260读数xdna样品稀释倍数/1000rnag/D=40xod260读数xrna样品稀释倍数/1000假设样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用漠化乙锭法或其他方法进行估算。当dna样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响dna吸光度的准确测定由于dna在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。所以，一般情况下同时检测同一样品的od260、od280和od230,计算它们的比值来判断核酸样品的纯度。2、核酸样品纯度判断的一般标准：dna纯度：od260/od2

17、801.8表示为纯的dna;od260/od280>1.9,表示有rna污染；od260/od280v1.6,表示有蛋白质、酚等污染。rna纯度：1.7vod260/od280v2.0,表示为纯的rna;时，表示有蛋白质或酚污染；时，表示可能有异硫割酸残存。od230/od260的比值应在之间，假设比值较高说明有残余的盐和小分子如核昔酸氨基酸、酚等的存在。假设样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量；同时也会影响酶切和pcr的效果。三、实验材料与试剂1、实验材料：植物幼嫩叶子2、实验试剂1基因组dna提取缓冲液2氯仿：异戊醇：乙醇抽提液3te缓冲液4平衡酚：5rna酶

18、a6酚/氯仿7氯仿/异戊醇8异丙醇、无水乙醇、70%乙醇。93mol/lnaac105xtbe缓冲液116x电泳上样缓冲液121.0%琼脂糖凝胶13eb14dna分子量markers:125,564,2027,2322,4361,6557,9416,23130bp.15ddh2o;四、实验器材与仪器1、研体2、离心机、离心管7ml、5ml及离心管架；3、微量移液器10ul、200ul、1000ul及枪头；4、恒温水浴箱65C5、制冰机；6、冰箱；7、恒温水浴箱37C;8、微波炉；9、电泳仪及电泳槽；10、紫外检测仪。11、紫外分光光度计；12、石英比色皿光径或1cm光径的微量石英比色皿50ul

19、、100ul。二琼脂糖凝胶电泳检测基因组dna1、制胶1%琼脂糖凝胶此步骤由实验室老师准备在胶模上架好梳子。称取01g琼脂糖，置于250ml锥形瓶中，加100ml0.5xtbe电泳缓冲液，加热熔化至无颗粒状琼脂糖，待其冷却至5060C后，加入eb,使其终浓度为0.5mg/l,摇匀后立即倒入准备好的胶模中，待胶凝固后，放入电泳槽中，倒入适量0.5xtbe刚好淹过胶面，拔去梳子备用。注：eb为诱变剂、致癌物，接触凝胶必须戴手套操作2、加样取5ul纯化的dna原溶液样品，与1ul6x电泳加样缓冲液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中注：勿划破或戳穿加样孔，勿带入气泡。假设dna含量偏低，则可依上述比例

20、增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要换枪头以防互相污染。注意上样时要小心操作，防止损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。3、电泳加完样后，盖上电泳槽盖，立即接通电源，使电压调到100v，恒压电泳。当漠酚蓝条带移动到距凝胶前缘约2cm时，停止电泳约需3060min。4、观察和拍照取出胶块置于紫外灯下观察，dna存在处可显示出肉眼可辨的橘红色荧光带，再用成像仪进行拍照，以便于分析。注：紫外光对眼睛有害，观察时戴上防护镜或眼镜，或隔着玻璃或有机玻璃观察。紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量将提取的植物基因组dna样品吸取20ul,加到新的5ml离心管中，再加一定量的ddh2o或te缓冲

21、液ph8.0稀释100倍，用光径石英比色皿约需样品溶液或微量石英比色皿在紫外分光光度计上测定230nm、260nm、280nm处的吸光度。计算植物基因组dna样品溶液的dna的含量以及dna样品的纯度。六、结果与分析这是电泳后得到的照片，其中从右往左数第七条带为我所做样品的基因组二紫外吸收法测定基因组dna纯度与含量1、植物基因组dna样品溶液的dna的含量：2、植物基因组dna样品溶液的dna的纯度：3、样品纯度判断：od260/od2801.8表示为纯的dna:表示有rna污染；表示有蛋白质、酚等污染。迁移率的因素有od260/od2801.9,od260/od280v1.6,由可知，样品

22、含有rna杂质。七、讨论、心得注意事项：影响dna泳动速率dna分子质量的影响：双链dna分子迁移的速率与dna分子量对数成反比。分子量越大，迁移率越小。dna构型的影响：超螺旋dna线状dna开环dna胶浓度的影响：浓度越低，相同核酸分子迁移越快，一般常用的凝胶浓度为1%2%;电场强度的影响：电场强度愈大，带点颗粒的泳动越快。但凝胶的有效别离范围随着电压增大而减小，所以电泳时一般采用低电压，一般5v/cm电场强度。而对于大片段电泳，甚至用电泳过夜。进行高压电泳时，只能使用聚丙烯酰胺凝胶eb的影响：漠化乙锭eb插入双链dna造成其负电荷减少、刚性和长度增加电泳缓冲液的影响：核酸电泳常采用tae

23、、tbe、tpe三种缓冲系统，但它们各有利弊。tae价格低廉，但缓冲能力低，必须进行两极缓冲液的循环。tpe在进行dna回收时，会使dna污染磷酸盐，影响后续反应。所以多采用tbe缓冲液。在缓冲液中加入edta,可以鳌合二价离子，抑制dnase,保护dna。缓冲液ph常偏碱性或中性，此时核酸分子带负电，向正极移动。碱基组成与电泳温度的影响：一般影响不大在dna提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：1dna的二级结构和双链易受多种因素如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等的影响引起双链解开，即变性”，因此抽提时防止使用变性的条件。2抑制内外源dnase的活力。dnase就象一把

24、刀，它能把大分子的dna切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节ph,使偏碱ph8.0；c、抽提液中加外表活性剂；d、加螯合剂edta除去酶的铺助因子mg2+，使酶活性丧失。3防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使dna降解，一般综合考虑，取左右为宜。4防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，dna分子特别大，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使dna断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。5植物的次生代谢物主要是胞质内的多酚类或色素类化合物对核酸提取有干扰作用。因此

25、，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取dna的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，dna含量高，且易于破碎，植物材料最好是新鲜的。由结果可知，在加入rna酶的时候可适当多加一点，以免造成得到的dna样品含较多rna杂质。篇四：dna提取实验报告注：1、报告内的项目或内容设置，可根据实际情况加以调整和补充。2、学生提交实验报告时间为实验后10日内。篇五：dna提取及pcr扩增实验报告pcr扩增及dna琼脂糖凝胶电泳刘琳1131428环境科学一、实验目的1 .学习并掌握pcr扩增的基本原理与实验技术。2 .对扩增后的dna进行琼脂糖凝胶电泳试验，并分析相应结果。二、实验原理1. p

26、cr扩增多聚酶链反应pcr技术的原理类似于dna的天然复制过程。在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板dna、四种脱氧核昔酸dntp、耐热taq聚合酶及两个合成dna的引物，而后加热使模板dna在高温下94C变性，双链解链，这是所谓变性阶段。降低溶液温度，使合成引物在低温55C与模板dna互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。溶液反应温度升至中温72C，在tap酶作用下，用四种dntp为原料，引物为复制起点，模板dna的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。如此反复，在同一反应体系中可重复高温变性、低温退火和dna合成这一循环，使产物dna重复合成，并在重复过程中，前一循

27、环的产物dna可作为后一循环的模板dna而参与dna的合成，使产物dna的量按指数方式扩增。经过3040个循环，dna扩增即可完成。2. dna琼脂糖凝胶电泳实验dna分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，dna分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。dna分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的dna分子的迁移速度不同。该电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用dna分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，到达别离混合物的目的。三、实验材料仪器：pcr扩增仪、薄壁管、离心管、移液枪、枪头、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、制胶版、紫外

28、透射仪。试剂：tapdna聚合酶、dntp、buffer、两种引物、16s全长dna样本、无菌ddh2o、模板dna、tbe、琼脂糖、eb、显色剂。四、实验步骤1. pcr扩增本次试验选择细菌16srdnav3区片段进行扩增。根据计算，首先取离心管按照2.5ul10xbuffer、1uldntp、0.5ul341gc、0.5ul534、0.125ultaq、19.375uddh2o的比例配置足量的pcr反应体系。分别向9个薄壁管中分别加入24ul的反应体系，并分别添加8种不同的模版，并于第9个薄壁管中加入无菌ddh2o作为阴性对照。将薄壁管放入pcr扩增仪中，按照预定程序进行pcr扩增。其中循

29、环过程需要到达3040次。程序如下：预变性：94C3min循环：94C变性30s55C退火30s72C延伸30s末次延伸:72C5min1.1. pcr扩增完成后，将样品取出并保存于15C环境中。2. dna琼脂糖凝胶电泳实验1称取琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，加入适量的0.5xtbe电泳缓冲液。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。摇匀，待冷却至60C左右，在胶液内加入适量的eb。取有机玻璃制胶板槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60C左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。2.2 待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入0.5xtbe电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面

30、。取11缓冲液和51待测dna样品混合后，用移液枪滴加至凝胶的加样孔中。接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高不超过5v/cm,开始电泳。点样端放阴极端。根据经验调节电压使分带清晰。观察漠酚兰的带蓝色的移动。当其移动至距胶板前沿约1cm处，可停止电泳。在紫外透视仪的样品台上重新铺上一张保鲜膜，赶去气泡平铺，然后把凝胶放在上面。关上样品室外门，打开紫外灯，通过观察孔进行观察。五、实验结果与讨论如下图：从左至右，分别是模版1-8号，第9列为阴性对照。前8列均有明显的条带出现，而阴性对照无显示，说明扩增整体效果很好。图中有上下两条线，上面一条线所覆盖的条带基本可以代表扩增的产生的片段位置，参照图可以看出扩增片段在200bp左右。在第9个阴性对照的第二条线处可以看到较为模糊的条带，并非是出现假阴性，而是由于二聚物而产生的条带。通过该条带与最右侧的marker比照可知该片段出现在100bp左右，并非由于实验操作等问题而产生的污染。实验的照片显示实验结果有拖尾现象，但是并不影响后续实验。在实验过程中由于有些试剂加到了管壁上面，并没有完全加入，可能会出现一些误差。另外在第1列条带中出现了其他的亮带，可能是由于在前期