[农学]植物生理实验指导

1、目 录实验一 植物细胞的观测4实验二 植物液泡的观察6实验三 用染色法测定原生质的等电点6实验四 原生质运动的观察8实验五 细胞质壁别离法测定植物组织渗透势9实验六 叶绿体色素及其理化性质10实验七 叶绿体色素的别离纸层析法12实验八 叶绿素的定量测定12实验九 植物光合强度的测定改进半叶法13实验十 植物呼吸强度的测定14实验十一 离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用15实验十二 植物呼吸酶的简易鉴定法17实验十三 植物组织水势的测定小液流法19实验十四 植物伤流液的成份分析20实验十五 植物根系对矿质元素的选择吸收22实验十六 单盐毒害与混合盐的拮抗作用23实验十七 植物的溶液培养与矿质元素缺

2、乏症23实验十八 硝酸复原酶活性的测定25实验十九 根系活力的测定TTC法26实验二十 种子生活力的快速测定27实验二十一 植物生长区域的测定29实验二十二 生长素类物质对根芽生长的影响31实验二十三 生长素的生理效应及生物鉴定法32实验二十四 用水稻幼苗法测定赤霉素类物质的浓度33实验二十五 赤霉素对淀粉酶的诱导形成35实验二十六 细胞分裂素的保绿与阻止衰老的作用36实验二十七 细胞分裂素对菜豆叶片生长和衰老的效应37实验二十八 用棉花幼苗外植体测定脱落酸的活性38实验二十九 用萝卜子叶增重法测定细胞分裂素类物质的浓度或效价39实验三十 乙烯的生物测定黄化豌豆幼苗的“三重反响 40实验三十一

3、乙烯的催熟作用和对性别分化的影响41实验三十二 生长素和乙烯对叶片脱落的效应43实验三十三 开花刺激物在短日植物中通过嫁接的传递44实验三十四 花粉管的生长及其向化性46实验三十五 不良环境对植物的伤害47实验三十六 植物体内游离脯氨酸的测定48实验三十七 根际pH的显色测定49实验三十八 钾离子对气孔开度的影响 49实验三十九 希尔反响的观察 50 实验四十 植物离体叶片失水表型观察及其失水率测定 51 植物生理学实验规那么植物生理学实验的目的在于配合课堂教学，验证理论内容，并在实验过程中学习有关作物的植物生理学方面的实验室技术操作及一些田间应用方法，从而能够初步熟悉科学研究方法，分析实验结

4、果并作出正确结论。因此，学生应以认真的态度，科学的精神从事本课程的实验。1学生在实验前，必须仔细阅读实验指导，以便了解每次实验的目的与要求以及主要的实验操作过程。教师得向学生查问，以了解学生的准备情况。2实验时，教师讲解当日实验的要点及操作中的考前须知，学生必须认真听讲。3学生两人一组进行实验。要求两人共同进行实验操作，如有必要分工，亦必须密切配合。4公用药品必须在原来放置的地方使用，公用仪器用毕后应立即送到达原处。仪器与药品应注意保护和节约，以免造成浪费或损失。所用仪器或玻璃器皿如有损坏应立即报告教师，酌情按价赔偿，贵重仪器使用时应由教师在旁指导。每次实验结束后，应将所用玻璃器皿洗净收好，并

5、将实验台整理清洁。5每个实验均应仔细观察、测定，将所得结果绘图，列表或将数据绘成曲线，仔细记录在报告本内，并将所得结果加以分析，写出结论。实验指导中所列问题均应在报告里答复，实验报告应按教师指定时间完成上交。 二00七年修改实验一植物细胞的观测一、植物细胞的活体染色及死活鉴定原理活体染色是介于活观察和固定、切片染色之间的一种方法，是选用某些无毒或毒性较小的染色剂，显示出细胞内某些构造的存在，而不影响细胞的生命活动也不产生任何物理、化学变化以致引起细胞死亡的方法。中性红是常用的活性染料之一，又是一种pH指示剂，变色范围在pH6.4-8.0之间由红变黄，在酸性条件下中性红的解离度很强，带色的阳离子

6、呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶解于水呈橙黄色的溶液。中性红的分子式为：生活的植物细胞，其含水分的纤维素细胞壁上往往有羟基，泡液呈酸性。如果用低于泡液pH的缓冲液配制的中性红溶液进行活染时，由于中性红在介质中已成解离态，其带色的阳离子易被吸附在细胞壁上使壁显红色，而生活原生质和液泡均无色；如果在中性或微碱性的液体环境中，中性红分子便有进入液泡并呈解离形式的趋势，当中性红分子进入偏酸的泡液处，解离出带色的阳离子而呈玫瑰红色，累积在液泡里，这时液泡显色而原生质和细胞壁不着色；如果是死细胞，原生质体凝固并丧失半透性，桔红色的中性红分子被吸附在原生质外表，表现为细胞核和细胞质着色，而液泡

7、不着色。可根据这些现象鉴定细胞死活。材料与设备洋葱鳞茎、大葱叶基局部、小麦叶片等显微镜一台、小培养皿一套、载玻片和盖玻片各2片、刀片1片、尖头镊子、粗滤纸和火柴以一组为单位药品0.03中性红溶液：中性红溶于1000ml蒸馏水中。实验步骤1取洋葱的内层幼嫩鳞片，用刀片在鳞片内侧纵横切割成2的小块，用尖头镊子将内表皮小块轻轻撕下，置于载玻片上，滴加清水后盖上盖玻片，在较暗的视野下进行镜检。仔细识别成熟细胞的各个局部：透明而界限清晰的细胞壁。有颗粒状结构的原生质。含有泡液的液泡。假设用小麦叶片为材料时，可采1片叶片，将叶反面朝上平铺在载玻片上，再将此载玻片放入盛有少量清水的培养皿内，用左手将叶片按平

8、，右手用刀片从一个方向轻轻刮去下表皮和叶肉局部，只留下透明的一层上表皮细胞，然后将其切成约1cm2的小块。2将制成的表皮小块放入盛有0.03中性红溶液的小培养皿中染色510分钟，然后取出浸入自来水中漂洗10分钟，选其中染色均匀的材料小块进行镜检，仔细观察经活体染色后的细胞各局部：液泡局部稍有收缩被中性红染成均匀的玫瑰红色。原生质及细胞壁仍为透明无色。这是由于自来水呈中偏碱性。3将用中性红染色后的材料小块取出用蒸馏水漂洗后，在显微镜下观察，由于蒸馏水偏酸性，当进行染色后的活细胞用蒸馏水漂洗时，解离的中性红带色阳离子便吸附在细胞壁的0H上，因此细胞壁呈现红色而原生质体和液泡均不着色。4在上述制片中

9、寻找个别死细胞，可见原生质体被染成不均匀的橙黄色，另取制片放在载玻片上在酒精灯火焰上微微加热使细胞致死，在显微镜下观察可见死细胞内原生质体凝结成不均匀的凝胶状，它与细胞核均被染成桔红色。二、质壁别离及质壁别离复原原理21生活细胞的原生质体及质膜具有半透性，细胞内部还包含着一个大液泡，它具有一定的渗透势。当细胞与外界高渗溶液接触时，细胞内的水分外渗，原生质体随液泡一起收缩而脱离了细胞壁发生别离现象；当细胞与低渗溶液接触时，细胞吸水发生质壁别离复原。死细胞没有这种现象，因此，可利用质壁别离及质壁别离复原现象来鉴定细胞死活。植物细胞的质壁别离可有多种形式，如凸形、帽形等，如图1所示。图1不同形式的质

10、壁别离1凹形质壁别离2.凸形质壁别离3.帽形质壁别离：1细胞核；2膨胀的原生质；3液泡123质壁别离形式的不同往往与原生质的粘性有关，但凡原生质粘度大的，能维持较长时间的凹形，甚至成为痉挛形；原生质粘度小的，较快形成凸状质壁别离。Ca+能降低原生质胶体的水合度，即可增高原生质的粘性；而K+那么相反，它能提高原生质胶体的水合度，降低原生质的粘性。所以，经Ca+处理后，原生质发生凹形质壁别离，而经K+处理那么发生凸质壁别离。当用KNO3的高渗溶液进行长时间质壁别离时，由于原生质水合度大大增加，原生质层变，似帽状包围在收缩的液泡两端，称为帽状质壁别离。材料与设备3洋葱鳞茎、大葱叶基局部、小麦叶片等显

11、微镜一台、小培养皿一套、载玻片和盖玻片各2片、刀片1片、尖头镊子、粗滤纸和火柴以一组为单位药品：1M2溶液；0.03MKCI溶液。实验步骤1同上实验制取活染制片，在显微镜下确定活细胞的欲测视野后，在载玻片的一端轻轻滴加一滴1M蔗糖溶液，在载玻片的另一端用滤纸条吸引以使糖液引浸到全部制片上。处理的同时在镜下注意观 察生活细胞发生质壁别离时其内部的变化：整个细胞首先发生轻微均匀地收缩，随着胞壁松驰，原生质逐渐自细胞角隅处脱离壁发生“初始质壁别离现象。注意在原生质收缩的同时，有很多被撕扯的原生质丝称Hecht线仍将“质与“壁连系着，这说明生活原生质体本是紧贴着细胞壁的，由于细胞脱水，原生质也随着发生

12、不均匀的收缩，使原生质细丝残留下来。2在制片一端滴加清水，在另一端用滤纸将水吸引到全部制片上，细胞观察质壁别离复原现象。3取实验一制备活染制片，然后将制片分别浸入的CaCl2与的KCI溶液内，浸泡2024小时后，取出置于载玻片上，盖上盖片，再滴加1M的蔗糖溶液使之发生质壁别离，仔细观察质壁别离的不同形式。假设轻轻挤压已发生质壁别离的细胞，由于液泡破裂，有中性红着色的泡液流出，中性红遇K+或Ca+后立即形成暗红色小颗粒，布满整个细胞腔。生活无损的细胞那么无此现象。思考题1根据实验结果，说明活细胞与死细胞原生质性质有哪些不同？如何加以区别？2在用中性红活染时，用自来水pH7以上冲洗浸泡与用蒸馏水p

13、H7以下效果有何不同？为什么？3死细胞为什么不能发生质壁别离及质壁别离复原？实验二植物液泡的观察一、小麦幼根中液泡的形成材料和设备萌发的小麦胚根、显微镜、载片、盖片、镊子、滴管、刀片、0.03中性红溶液、小培养皿。实验步骤切取萌发小麦胚根尖端约距尖端1cm左右，浸入中性红溶液中进行活染1015分钟，然后取出用自来水冲洗510分钟，撕取表皮或作断根纵剖面于显微镜下进行镜检。可见：在分生区胚性细胞里有少量零星的小红点，表示液泡已开始形成；进入伸长期的细胞内有红色网状交错的液泡结构；在成熟段的细胞里，那么有一个很完整的大型液泡，一般位于细胞的中央。二、液泡的别离材料与设备紫洋葱、紫萝卜叶、蔗糖溶液、

14、小镊子实验步骤撕取紫色洋葱或萝卜叶片表皮，置于载玻片上，稍滴加清水后盖上盖玻片，于显微镜下观察制片中的细胞，假设细胞其中有一个完整无缺的、含花青素的玫瑰紫色液泡，那么用滤纸条吸引液体的方法连续滴加蔗糖溶液，使细胞发生强烈的质壁别离，随后用锋利刀片在细胞纵轴垂直的面上截断，在显微镜下选择已剖开但原生质未受损伤的细胞处，再滴加少许蔗溏液，用小镊子轻轻压盖玻片，可见原生质破裂或脱离，而含有花青素的液泡被完整地游离出来。思考题试述植物液泡的结构与功能。实验三用染色法测定原生质的等电点原理原生质的主要组成物质蛋白质为两性化合物，它在不同pH的介质中，其解离情况不同：1在酸性介质中：NH3 NH3+ RC

15、H +H+ RCH COO COOH2在碱性介质中： NH3 NH2 RCH +OH RCH+H2O COO COO当介质的pH值愈小时，此物质的解离就趋向于1式，反之那么趋向于2式，假设在某一pH值下，此物质的解离程度到达平衡，这些外界介质的pH即为此物的等电点。不同的植物组织，由于它们原生质不尽相同，所以具有不同的等电点。欲测植物细胞或组织的等电点，可采用染色法进行。一般采用酸碱性不同的染料作为指示剂，常用的酸性染料有苯胺红、曙红等，这些染料的有色局部为阴离子；碱性染料有亚甲兰，靛兰等，亚甲兰Methylene blue分子式为：它的有色局部为阳离子。将待测的植物组织放入苯胺红和亚甲兰的混

16、合溶液中，当介质的pH值低于组织的等电点时，带正电荷的原生质便吸附酸性染料的有色局部而显玫瑰红色；当介质的pH值高于组织的等电点时，带负电荷的原生质便吸附碱性染料的有色局部而呈兰色；当介质的pH值与组织的等电点相等时，原生质的着色反响为红与兰的混合色紫色。植物组织的等电点并不固定在一个数值上，而是具有一定范围，常把这个范围称为植物组织的“等电区。本实验那么是根据上述原理测定植物组织的等电点。材料与设备四季豆黄化幼苗，蚕豆幼苗5ml及1ml移液管、刀片、小培养皿、小烧杯、毛笔、镊子、粗滤纸柠檬酸溶液、 Na2HPO4溶液、0.1苯胺红溶液、0.1亚甲兰溶液实验步骤1依下表配制不同pH的缓冲液，用

17、不同pH的缓冲液按以下比例配制5ml 混合染料，4ml 缓冲液+0.5ml 0.1苯胺红+0.5ml 0.1亚甲兰溶液，分别盛在小培养皿中。pH2HPO4ml柠檬酸ml2取四季豆幼苗胚茎小段，作徒手切片36片用70酒精固定5分钟，然后分别取出6片放入各个缓冲液的混合染料中染色2030分钟。倾去染料，立即参加相应pH的缓冲液5ml，浸泡以浸没组织为限，一小时后，观察各个缓冲液中的制片颜色的变化。取在等电区附近的制片，在光镜下观察，精确地比拟植物组织的等电点。附本实验中的酸性染料亦可采用曙红，假设用曙红进行染色时，不必配制不同pH值的缓冲液的混合染料，可直接取染色液浓度有等量混合，进行染色2030

18、分钟，然后将切片取出分别浸入相应pH的缓冲液内浸泡，半小时后，便可以取出切片鉴别组织的等电区。思考题1用染色法测定原生质的等电点的根本依据是什么？2要获得比拟准确的结果，在实验中应注意哪些问题？实验四原生质运动的观察原理在生活细胞内，原生质的活泼运动现象统称为原生质运动。原生质运动是生活细胞的重要标志之一。原生质可以在细胞内流动，也可以通过胞间连丝穿流于细胞与组织之间，有时并非全部原生质都参与运动而仅限于局部细胞质，往往原生质外表的透明层Hyaloplasm处于静止状态。原生质运动在所有生活细胞中均可见，但往往在某些特定材料中表现得特别明显。有时由于在制片时对材料的机械损伤，也会引起原生质发生

19、强烈的运动。原生质运动是生活体消耗能量而做功的生理过程，它与植物体内的物质运输及分配以及多种酶促反响密切联系。原生质运动有各种形式，一般将原生质运动归为两类，凡并非因外界环境的改变而引起的原生质运动，称为自发性的原生质运动；由于某种外界原因而引起的原生质运动称为诱发性的原生质运动。本实验使用光学显微镜观察几种植物细胞原生质的运动现象；测定原生质运动的速度及观察呼吸抑制剂2，4二硝基酚DNP对原生质运动的影响。材料和设备黑藻、轮藻、小麦幼苗种子萌发23天根长12cm、紫鸭趾草正在开花的、洋葱鳞茎未萌发的紫皮鳞茎、南瓜叶片表皮毛或茎部表皮毛、粘菌的原生质团、显微镜、载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、剪

20、刀、纱布、擦镜纸、目镜测微尺、台尺、秒表、滤纸。5104M的2，4二硝基苯酚溶液实验步骤1观察几种植物细胞的原生质运动现象。黑藻叶片的观察：用镊子取下黑藻幼嫩叶片放于载玻片上，滴加清水并盖上盖玻片，在显微镜下观察，寻找沿叶片中脉的局部，细胞中叶绿体随原生质沿胞壁移动假设室温低于20或阴天看不见原生质运动现象时，可用强光照射1520分钟后再观察。注意整个叶片中哪些局部原生质流动得最快，相邻两细胞中流动方向有何不同。轮藻节间细胞的观察，取一株粘藻含有两个以上的节节间，用水洗净后置于载玻片上，加盖玻片于显微镜下观察，由于轮藻节间外面常有沉积物附着不易看清，因此可先在低倍物镜下移动载玻片，找到适宜的局

21、部后再换高倍物镜观察，细胞中排列整齐的叶绿体并不移动，而原生质透明局部夹带着大小颗粒一起流动，小心地调动细螺旋仔细观察。小麦根毛的观察：将小麦根剪下放在载玻片上，加盖玻片在低倍镜下找到根尖以上的根毛区，然后在高倍镜下进行镜检，可以看到透明原生质夹带一些颗粒沿根毛细胞壁流动，注意根毛尖端和基部原生质流动方向的变化。紫鸭跖草雄蕊毛的观察：将正在开放或即将要开的紫鸭跖草的花剥开，用镊子取下几根雄蕊毛，在显微镜下观察，可见细胞内的原生质以不固定的方向流动。洋葱鳞茎内表皮的观察：用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮，在显微镜下观察，可看到细胞中原生质的运动。轻轻取下南瓜叶片表皮或茎部表皮，置于载玻片上，滴上清水后盖

22、上盖玻片，于镜下进行镜检，可见原生质丝纵横交错地包在外表，原生质的运动可以其中小颗粒的位移作为指标。仔细观察原生质的运动方向及其通过胞间连丝穿流于细胞的情况。观察萌发的花粉管，可见原生质在花粉管中的环流现象。2测定原生质运动的速度可以原生质中某些颗粒的移动速度作指标来测定原生质的运动速度。但原生质颗粒大小不一，它的移动速度亦异，因此应尽量选用较小的颗粒，进行屡次测定，求出平均值。先将目镜测微尺装入目镜，将台尺一小格相当于即10m置于载物台上，求出目镜测微尺每格相当于多少毫米或微米，移去台尺。将植物材料放在显微镜下用同一物镜观察。转动目镜，使其中的测微尺与原生质的流动方向平行，用秒表求出每走假设

23、干格视植物材料而定所需的时间，测1020次求出平均值。3呼吸抑制剂DNP2，4二硝基酚对原生质运动的影响原生质运动需要消耗能量，这要靠呼吸作用来提供。DNP能抑制呼吸过程中磷酸化过程，因而也就抑制了原生质运动。反复将5104M的DNP滴加在载玻片的一端，在另一端用滤纸片吸引，1020分钟后，可见原生质流动减缓甚至停止。实验结果1绘制几种植物细胞原生质运动的简图，并做简要说明。2原生质运动速度的测定：目镜测微尺格与台尺上格等长。目镜测微尺每一格有微米。思考题1DNP对原生质运动有何影响？为什么？2原生质运动的动力是什么？3常见的原生质运动方式有哪些？试描述特点。实验五细胞质壁别离法测定植物组织的

24、渗透势原理将植物组织放入一系列浓度递增的蔗糖或甘露醇溶液中，经过一定的时间使到达渗透平衡后，细胞在其中发生临界质壁别离的溶液渗透势即等于细胞液的渗透势。此溶液称为等渗溶液，其浓度称为等渗浓度。实际测定时，根据引起临界质壁别离的溶液浓度与相邻的不引起质壁别离的溶液浓度的平均值，求出等渗浓度，并计算出此溶液的渗透势，即为细胞的渗透势。材料和设备一、植物材料：洋葱鳞茎，紫鸭趾草叶片。二、设备：显微镜、刀片、移液管、直径6cm培养皿、镊子。三、试剂：1.00mol蔗糖溶液或甘露醇溶液。实验步骤1、以1.00mol的蔗糖溶液为母液，用蒸馏水稀释成0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45

25、、0.50、0.55、0.60mol溶液，摇匀后备用。2、用刀片在洋葱鳞茎内表皮上划出边长为25mm的小方格，用镊子剥取表皮。注意撕下的表皮的厚度要适当。3、自高浓度的溶液开始，每隔一定时间如3min，依次向浓度递减的蔗糖溶液中放入45片表皮块表皮撕下立即投入溶液中，使表皮完全浸入溶液。15-20min后，从最高浓度的蔗糖溶液开始，按原来放入的顺序取出表皮；在载玻片上滴12滴相应浓度的蔗糖溶液，放显微镜下观察几个视野，记录并计算质壁别离的情况。找出引起50左右的细胞原生质刚刚从细胞壁的角隅处与细胞壁别离的蔗糖溶液浓度；以及缺乏50%的细胞发生质壁别离或不产生质壁别离的蔗糖的最高浓度。4、重新配

26、制上述结果的两种浓度的蔗糖溶液，用新的表皮重复实验12次，直到实验结果符合要求。这两种蔗糖溶液渗透势的平均值即为细胞液的渗透势。结果根据下式计算植物细胞的渗透势x = -i C R T式中，x为细胞的渗透势以MPaa1atm,1MPa=106Pa；i为溶液的等渗系数蔗糖溶液的i=1；C为与细胞液等渗的外液浓度，即上面算出的两溶液浓度的平均值应以重量克分子浓度为单位，但溶液较稀时，可认为容积克分子浓度与重量克分子浓度相等；T为绝对温度，T273+t,l/molK。思考题什么是植物细胞的渗透势，它在细胞与周围环境的水分平衡中起什么作用？实验六叶绿体色素及其理化性质叶绿体色素是参与光合作用的主要内在

27、条件，普遍存在于绿藻及高等植物的绿色细胞内，有数十种之多，包括三大类：叶绿素类、胡萝卜素类和藻色素类。一、叶绿体色素的提取原理叶绿素在叶绿体内以其亲水局部叶绿酸局部与蛋白质结合，亲脂局部叶绿醇局部与类脂结合，纯的有机溶剂不能打破色素与蛋白质的联系，所以必须用能与水混溶的有机溶剂并有少量水存在时，才能将叶绿体色素提取出来。常用的有机溶剂是酒精、丙酮等。材料与设备鲜菠菜、研钵、乙醇实验步骤称取5g鲜菠菜，放在研钵中参加5ml 95%酒精及少许CaCO3粉未及石英砂研碎，再参加15ml 95%酒精搅匀，将研磨液用粗滤纸过滤，滤液即为叶绿体色素粗提液，为深绿色，内含叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素

28、及其它脂溶性物质。保存此液备用。二、叶绿素的荧光现象原理物质具有不同的能态，物质中的某些电子吸收了光量子的能量后，物质从原来稳定状态的能级跳跃到一个较高的能级。这种稳定状态被称为基态；电子从基态跳跃到较高能级的现象称为激发；激发状态的电子称为激发态电子。叶绿体色素分子吸收光量子后，使其分子内的电子跃迁而变为激发态，由于激发能未被适当的接受体接受，被激发的电子便迅速回复到原来的能量水平，释放的能量除一局部转变为热能而损失，通常释放出比原来吸收光的波长更长的荧光或磷光，如以下图所示：因此我们看到反射光荧光为暗红色，这种现象就称为荧光现象。当光透过叶绿体色素溶液时，被色素吸收了红光，剩下互补色绿光，

29、所以透射光为绿色。材料与设备叶绿体色素提取液、光源阳光或灯光、试管数支实验步骤取叶绿体色素提取液少量，如果太浓可加少量95酒精进行稀释，观察；透射光为绿色，反射光为暗红色，说明叶绿素具荧光现象。三、叶绿素的皂化作用原理叶绿素是一种双羧酸的酯类物质，能与碱发生皂化反响而生成叶绿酸的碱性盐，其化学反响如下：形成盐后，叶绿素的亲水性大大加强，可溶于稀酒精中。材料与设备叶绿体色素提取液、试管、移液管；20KOH甲醇溶液、苯实验步骤取3ml叶绿体色素提取液，如提取液太浓，可先加少量酒精稀释。参加1ml 20%KOH甲醇溶液，充分摇匀。放置片刻后，参加3ml苯，混合后，慢慢参加1ml蒸馏水，得到三层溶液，

30、上层是苯溶液，其中溶有胡萝卜素及叶黄素；下层是酒精溶液，其中溶有已皂化的叶绿素a，b及少量叶黄素。试管底部同时出现白色沉淀现象，这是由细胞蛋白质产生的乳化现象。另取3ml叶绿体色素提取液，直接参加3ml苯和1ml蒸馏水，因叶绿素未经皂化，较易溶于上层的苯溶液层中；与皂化过的不同，在下层酒精溶液中，只溶有一局部叶黄素。四、叶绿素与类胡萝卜素的吸收光谱原理由于叶绿素与类胡萝卜素的分子结构不同，它们具有不同的吸收光谱。类胡萝卜素吸收蓝紫光，叶绿素吸收红光和蓝紫光。材料与设备叶绿素和类胡萝卜素提取液、分光镜、光源、有色铅笔。实验步骤首先调节分光镜，使能清晰地观察到光源的连续光谱，然后分别观察叶绿素和类

31、胡萝卜素提取液的吸收光谱。将观察所得到结果用有色铅笔绘图表示，并说明这两类色素在光谱中吸收区域有何不同。五、氢和铜对叶绿素中镁的代替作用原理叶绿素分子具有卟啉环，它的镁离子位于卟啉环的中央，叶绿素分子较不稳定，遇酸后，中央的镁易被氢取代，在有其它重金属离子存在时，氢又易被其它重金属元素所取代。材料和设备叶绿体色素提取液、试管、烧杯、酒精灯、浓盐酸、醋酸铜结晶实验步骤取5ml叶绿素提取液，参加一滴浓盐酸，搅动后可见溶液渐渐由绿色变为褐色，此时盐酸中的氢已经代替了叶绿素中的镁，形成了去镁叶绿素。取一半去镁叶绿素溶液，参加少许醋酸铜结晶，徐徐加热，此时去镁叶绿素中的氢又被铜所取代，变为翠绿色。思考题

32、1在用新鲜叶片提取叶绿体色素时，为什么要参加一定量的CaCO3?2新鲜的植物叶片是否能够用不含水的有机溶剂提取？为什么？3对着光源和背着光源观察时，叶绿素提取液的颜色为何不同？实验七叶绿体色素的别离纸层析法原理叶绿体色素中的各种色素化学结构不同，因而它们的物理化学性质如极性、吸收光谱、溶解度等也不同。叶绿素和类胡萝卜素是酯类化合物，不溶于水仅溶于已烷、石油醚等非极性溶剂中，可利用不同色素在各种有机溶剂中的分配系数以及在吸附剂上被吸附程度的不同而将叶绿体色素别离开。材料与设备色层分析用滤纸、10cm直径的培养皿底和盖的直径要求相同；直径1cm的短玻管长、汽油、苯浓叶绿体色素提取液提取方法同前实验

33、实验步骤取一张色层分析滤纸，剪成方形，其边长略大于培养皿的直径，在其中心打一小圆孔。另取1小长条分析滤纸，将浓叶绿体色素提取液涂在滤纸条的一条长边上，并使所涂的色带尽量窄，使之风干；连续涂四、五次，待风干后将滤纸条搓成二公分的纸捻，并将点样端插入方形滤纸的中心，作为“灯心。取大型培养皿一个，其中放一短玻管，管内盛有少量汽油约占玻管容积的1/2至2/3，参加一、二滴苯。将上法制备的“灯心插入小玻管中，把培养皿盖好，放在弱光下或暗处。用滤纸制成的“灯心借毛细管作用吸收溶剂，溶于溶剂中的色素随之向四周扩散，1020分钟后可得到不同颜色的色素同心环：叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素呈鲜黄色，

34、胡萝卜素那么为橙黄色。在做好的色环滤纸片上注明色素种类名称，附在实验报告内。思考题1指出纸层析上色素环各是什么色素？并说明为什么会出现这样的顺序。实验八叶绿素的定量测定原理根据叶绿素对可见光的吸收光谱，利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度，而后用公式计算出叶绿素含量，此法精确度高，且能在未经别离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯比尔定律，某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比，即：DkCL式中k为比例常数，当溶液浓度以重量百分浓度为单位，液层厚度为1厘米时，k称为该物质的比吸收系数。如果溶液中有数种吸光物质，那么此溶液在某一波长下的总光密度等于各组分在相应波长下光密度

35、的总和，这就是光密度的加和性。叶绿素a、b在红光区的最大吸收峰分别位于663nm和645nm，在波长663nm下，叶绿素a、b的80丙酮溶液的比吸收系数分别为82.04和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.6，可据此列出以下关系式：D663ab 1D645ab 2解方程式1、2得：Ca6636453Cb645663 4式中的D663和D645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的消光度，Ca和Cb分别为叶绿素a和b的浓度，以毫克/升为单位。将Ca与Cb相加，即得叶绿素总量CT。CTmg/lCa+Cb645663 5另外，由于叶绿素a、b在652nm处有相同的比吸收系数均为

36、34.5，也可在此波长下测定一次消光度D652而求出叶绿素a、b的总量： CTmg/l= 6材料与设备菠菜叶或其它新鲜叶片、丙酮、研钵、漏斗、天平、剪刀、烧杯、滤纸、量筒、分光光度计。实验步骤称取新鲜叶片，剪碎置研钵中，加少量碳酸钙和石英砂，并参加2-3ml 80丙酮，研成匀浆，再参加10ml 80丙酮，继续研磨充分，用一层加丙酮湿润过的滤纸过滤，再用少量丙酮将滤纸和研钵上的色素冲洗干净，定容至25ml容量瓶中，摇匀。吸取叶绿素丙酮提取液2ml，加80%丙酮2ml稀释后，倒入1cm比色杯中，用分光光度计分别在波长645nm、663nm和652nm下测定光密度，以80丙酮为空白对照。按公式3、4

37、、6分别计算叶绿素a、b浓度及总浓度毫克/升按下式计算叶绿素在叶片中的含量：叶绿素含量mg/克鲜重思考题1叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析？为什么？实验九植物光合强度的测定改进半叶法原理根据叶中脉两侧结构及生理功能的相似性，可以先剪下半叶置于暗中，剩下的半叶待进行一定时间的光合作用后，有干物质积累，在隔断光合产物往外运输的情况下即杀死韧皮部又不损伤木质部使水分等供给正常进行，再测定半叶的干重，二者之差为被测叶片在该时间内光合作用产物的积累量。材料与设备棉花、大豆剪刀、打孔器、烧杯、天平、脱脂棉、纸牌、玻棒、称量瓶铝盒药品5三氯乙酸实验步骤1选材：在

38、田间选取生长状况较一致的棉花植株，在每株上选取部位对称性良好，厚薄均匀的无病虫害的功能叶片，依次编号挂牌。2处理：在选定的叶片基部进行处理，以破坏韧皮部而保存木质部，使叶片依靠木质部得到足够的水分，同时光合产物又运不出去。1环剥法：用刀片将叶柄的外皮环剥半厘米左右适于韧皮部较厚且易剥离的植物。2抑制法：用棉球浸上5三氯乙酸在叶柄基部涂一圈。3烫伤法：用棉花球在90以上的开水中浸一浸，然后在叶柄基部烫一分钟，如果有明显的水浸状表示烫伤完全。对于韧皮部较薄，木质部不坚硬的植物用烫伤法好。但烫伤程度不易掌握，因此以蛋白沉淀剂三氯乙酸处理为宜。为了不改变叶片角度还可以用锡纸或塑料管包围之。3剪取样品：

39、叶片基部处理完毕后，即可剪取样品，记录时间，按顺序依次剪下半叶主脉不剪下，按编号顺序夹于湿润的纱布中，贮于暗处。过四、五小时后，再依次剪下另半叶，同样按编号夹于湿润纱布中，两次剪叶的顺序一致，使各叶片经历相等的照光时数。4称重比拟：将各同位叶片的两半对应部位迭在一起，在无粗叶脉处放入面积的模板，用刀片沿边切下两个叶块，分别置于照光及暗中的两个称量瓶中，或用打孔器直径，在叶片上钻取2040片园片尽量少带叶脉，分别于照光和暗中的两个称量盒中，在105下烘10分钟以杀死细胞，然后降到7080烘34小时，至恒重为止。拿出铝盒在枯燥器中冷却后，方可称重。准确到1mg。结果设上午取的暗中的叶片重a毫克，经

40、历光合作用后为b毫克，取样面积为Acm2，照光时间为t，那么总光合速率为：。思考题1你认为哪一种处理叶片的方法较好？2分析本法的优缺点。实验十植物呼吸强度的测定一、小篮子法原理呼吸强度可用单位重量的植物材料在单位时间内所释放的CO2mg数来表示。呼吸放出的CO2被BaOH2吸收生成BaCO3沉淀，用草酸滴定剩余的BaOH2，并与空白滴定相比，根据草酸实际用量之差即可求出被测物的呼吸强度。材料与设备萌发的小麦、玉米、绿豆芽广口瓶1000ml、温度计、酸式滴定管、枯燥管、尼龙网制成的小蓝。药品0.7%的BaOH2用开水配后，让其静置数小时。1/44M草酸溶液：称取H2C2O42H2O2.8652溶

41、于蒸馏水中，定容至1000ml1酚酞试剂：称取1g酚酞溶于100ml95乙醇溶液中。实验步骤1取1000ml广口瓶一个，装配一只二孔橡皮塞。一孔插入盛碱石灰的枯燥管以吸收空气中的CO2，保证进入呼吸瓶的空气中无CO2；另一孔直径约1cm供滴定用，滴定前用橡皮塞塞紧。瓶塞下面挂一尼龙窗纱制作的小蓝，用以盛实验材料，整个装置如下图。2称取萌发的小麦种子或玉米种子10g，装于尼龙网小篮内，将小篮挂在广口瓶内，同时参加含有酚酞试剂的0.7的Ba(OH)2溶液20ml于广口瓶内，立即塞紧瓶塞。每十分钟轻轻摇动广口瓶，破坏溶液外表的BaCO3薄膜以利对CO2的充分吸收，半小时后，小心打开瓶塞，迅速取出小篮

42、，立即重新塞紧瓶塞，然后拔出小橡皮塞，用1/44M的草酸滴定，直到红色变为白色为止，记录滴定所用草酸的量。3另取1000ml广口瓶一只，按上步骤进行不加种子，作为对照。结果呼吸强度式中：V0空白，滴定用草酸ml数；V1植物样品滴定用草酸ml数；M为草酸的摩尔浓度；思考题应用小篮子法测定呼吸强度应注意哪些事项？并指出此法适宜测哪一类材料的呼吸强度？实验十一 离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用原理当供给植物组织充足的氧气时，植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时，最后生成CO2，吸收的O2被复原成水，并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP：C5H12O6+6O2+38ADP+3

43、8Pi6CO2+6H2O+38ATP其中大局部ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的，这也是细胞内形成可利用能量的主要过程，现在可以肯定三羧酸循环及其与之相偶联的氧化磷酸化作用是在线粒体中进行的。在线粒体中进行这些反响的速度可用耗氧量来表示，也可用形成ATP的量来表示。本实验用黑暗中萌发的绿豆子叶或黑暗催芽的马铃薯块茎制备离体的线粒体，以琥珀酸为底物定性测定O2的消耗和产生的ATP，并应用丙二酸抑制呼吸作用观察耗氧量的变化。仪器药品 测氧仪 紫外分析仪 冷冻高速离心机 血色素吸管 玻璃管620cm 层析用玻璃缸 移液管 反响瓶 研钵 DEAE纤维素PE221提取液：磷酸缓冲液蔗糖， EDTA2H

44、PO412H22PO4+0.186gEDTA+蔗糖用蒸馏水定容为100ml。2反响液：12蔗糖溶液蔗糖用蒸馏水定容为50ml。3ADP腺二磷50mg/ml50mgADP溶于1ml水中。4CytC细胞色素C1mg/ml1mgCytC溶于1ml水中。5NAD氧化辅酶3.3mg/ml3.3mgNAD溶于0.5ml水，用NaOH调至pH7.0，再定容为1ml。6CoA辅酶A每支50单位，250单位相当于1mg。7TPP焦磷酸硫胺素50mg/ml3.3mgNAD溶于0.5ml水，用NaOH调至pH7.0，再定容为1ml。226H2O定容于为50ml)。9葡萄糖10.9葡萄糖加水定容为50ml。10琥珀酸

45、琥珀酸溶于5ml水，用NaOH调至pH7.0，再定容为10ml。图2测氧仪装置示意图反响瓶主室体积5cm3图2 测氧仪装置示意图3丙二酸pH7.0丙二酸溶于1ml水中，用NaOH调至pH7.0，再定容为2ml。40.025N HCl实验步骤1线粒体悬浮液的制备125下暗处萌发34天的绿豆芽，摘取子叶，去掉下胚轴、根和芽。2取30g子叶、40ml提取液和少量石英砂，在研钵中研钵置于冰盐浴中快速研磨成匀浆，双层纱布过滤。 3滤液于0下，3000rpm离心10分钟，弃去沉淀。4上清液于0下，12000rpm离心20分钟，弃去上清液。沉淀悬浮于18ml提取液中。5上述悬浮液在0，12000rpm下离心

46、20分钟，弃去上清液，沉淀悬浮于2ml提取液中，即为线粒体悬浮液。保存在冰箱中。2仪器安装及耗O2量的测定 反响瓶主室中按下表参加反响液： 试 剂加 入 量ml正 常抑 制蔗糖APPCytCNADTPPCoA MgCl2葡萄糖琥珀酸丙二酸蒸馏水25单位03020201010125单位01010303总体积2020如图，安装好测氧仪、氧电极、记录仪。检查仪器是否正常。在侧臂中参加0.5ml线粒体悬浮液，插入氧电极，密闭反响瓶，待测氧仪稳定后，将侧臂内线粒体悬浮液轻轻倒入反响室，在磁力搅拌器上搅拌或不断地轻轻摇动反响瓶。20下反响10分钟。记录氧分压的变化，由记录曲线比拟正常的线粒体和加抑制剂的线

47、粒体耗O2的变化。3测定ATP的形成1DEAE纤维素的再生：使用以后的纤维素先用0.5N NaOH溶液浸泡30分钟1小时，然后用布氏漏斗滤去NaOH溶液，再用0.5NHCl溶液浸泡30分钟1小时，用蒸馏水冲洗至中性，备用。已处理好备用的DEAE纤维素DE22，倾倒去过多的水，将纤维素搅拌后均匀地铺在干净的玻璃板上，然后轻轻振动玻璃板，使纤维素分布均匀、外表光滑。放于60处烘干备用。2点样：用血色素吸管吸取标准APP10mm3，反响液20mm3，线粒体悬液20mm3，反响10分钟后的样品20mm3分别在DEAE纤维素薄层上点样，用冷风吹干。3展层：层析缸中倒入0.025N HCl，将纤维素薄层平

48、放入内，使液面低于点样线，盖好盖子，待前沿走到离薄层上端1cm时立即取出，用热风吹干。4风干后的薄层板在紫外分析灯下观察形成的ATP。2实验记录及报告日期材料反响温度反响时间反响液ml线粒体悬液ml抑制剂ml结果氧消耗ATP生成底物不加1 2抑制剂 3底物加12抑制剂3思考题1试比拟正常的线粒体和加抑制剂的线粒体的耗氧曲线及ATP层析谱有何不同，为什么？从实验结果思考下面的问题。2为什么参加丙二酸能起抑制作用，丙二酸是什么类型的抑制剂？3线粒体中有哪些代谢的酶系统？葡萄糖是否能在线粒体中氧化成丙酮酸？4ATP在酶促反响的什么部位生成？有氧化作用是否一定有磷酸化作用？附：测氧仪的使用一氧电极：是

49、由直径10的铂金丝为 阴极，封闭于玻璃管内，露出一截面。以银氯化银为阳极，外用四氟塑料套管及1520的聚乙烯薄膜套上。在电极与套管薄膜之间放有0.5NKCl溶液。阳极与阴极上施加0.7V极化电压。二测定原理：铂电极紧贴薄膜，通过薄膜而扩散进来的O2溶于电极附近的溶液中，在一定的极化电压下溶解的氧分子被复原：O2+2H+2e-H2O2并以阴极铂丝为中心形成扩散层，这种扩散电流与待测样品中的氧分压成线性关系。在铂电极上电解产生的氧电流讯号，经过晶体管放大器放大后，由记录仪记录样品中氧分压的变化。三使用方法1安装电极：翻开电极套管螺塞，在电极套管内参加0.5NKCl溶液。再拧紧电极套管螺塞，擦干净外

50、面的溶液。将电极插头插入测氧仪的“输入插座；把记录仪的插头插入测氧仪的“输出插座，并接通记录仪电源如图。2开启电源：将波段开关K拨至“电池电压档，电池电压应指示为0.7V。3将开关K拨至“极化电压档，检查加于电极两端的电压是否为0.7V表头满量程为1V，偏低或偏高可调节“极化微调电位器。4开关K拨至“零位调整档，调节放大器的零点，电表指针应在“0”点，如有偏差，可调“零位电位器。5开关K拨至1/1档，电极在空气中时，表头应指示21%,如有偏差可调“灵敏度电位器。6电极插入反响瓶中进行测定。实验十二 植物呼吸酶的简易鉴定法呼吸作用可以认为是一系列的氧化和复原作用，其中间步骤是靠各种氧化和复原酶类

51、促进的，根据它们的氧化复原特性，选用特殊的底物或受氢体，反响后能产生特殊的颜色，从而区分呼吸酶的存在。一、去氢酶原理去氢酶是呼吸链中参加电子和氢传递的重要酶之一，包括烟酰胺脱氢酶和黄素脱氢酶。复原型的黄素脱氢酶可被某些试剂氧化，例如甲烯兰与黄素酶作用可发生以下变化： EFADH2 + 甲烯蓝 EFAD + 甲烯白 黄素酶 蓝色 (无色)材料与设备马铃薯块茎温箱、试管、刀片、20ml刻度试管2支、电炉药品0.025%甲烯蓝溶液、石腊油实验步骤1取马铃薯块茎去皮，切成20块5mm见方的小块，分成两组，分别放入两个试管中，其中一个试管煮沸20分钟，然后每个试管中各参加0.025%的甲烯蓝溶液，使液面

52、高度超过组织块2cm左右，并在液面上各加一薄层石腊油，以阻止空气接触甲烯蓝。2将试管移入25的温箱中，一天后观察溶液及马铃薯块茎的变化，未经煮沸的试管内溶液会变为无色，而另一管仍为蓝色。然后将试管内液面上的石腊油吸去，取出管内的马铃薯小块，放在纸上暴露于空气中，再观察颜色的变化，并说明变化的原因。二、氧化酶原理氧化酶能从代谢物上脱氢，并使其与氧直接结合，生成水或双氧水。如细胞色素氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。材料与设备马铃薯块茎、豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜等，20ml刻度试管2支、电炉药品1.5%邻苯二酚酒精溶液：邻苯二酚溶于足够的95%酒精溶液，定容至100ml。实验步骤1取去皮的新鲜

53、马铃薯少量，切碎。 2取2支试管，分别参加适量马铃薯碎块，其中一个先煮沸数分钟，然后各参加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚酒精溶液，观察有何现象，如溶液产生褐色，表示邻苯二酚被氧化，氧化程度不同，表现不同的颜色。另用豌豆叶、洋葱、甘薯及黄瓜重复上述实验，如果其中有不能立刻使邻苯二酚溶液氧化的材料，那么做下面的实验。三、过氧化物酶原理过氧化物酶是卟啉环中含有铁的金属蛋白质。过氧化物酶与过氧化氢形成一种化合物，在这种化合物中的过氧化氢被活化，从而能氧化酚类化合物，其作用如同氢的受体一样。材料与设备上面实验中不能使邻苯二酚氧化的植物材料试管药品1.5%邻苯二酚酒精溶液。3%H2O2：取30%的H2O

54、210ml，用蒸馏水稀释至100ml，溶液的有效期为35天。实验步骤取上面实验中不能使邻苯二酚氧化的植物材料，切碎，加到两个试管中，其中一个先煮沸数分钟，然后各参加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚酒精溶液和5ml 3%H2O2溶液，如有褐色发生，即表示过氧化物酶的存在。另取一支试管，只加H2O2及邻苯二酚酒精溶液，观察有何结果。四、过氧化氢酶原理过氧化氢酶属血红蛋白类，其组成中含有铁，能催化过氧化氢分解为水和分子氧。在此过程中，辅基中的铁原子进行氧化和复原的交替变化。材料与设备马铃薯块茎试管药品3% H2O21.5 邻苯二酚酒精溶液实验步骤取新鲜马铃薯去皮，切成5mm见方的小块，分为两组，分别

55、放在2支试管中，其中一组煮沸20分钟，然后分别参加5ml 3% H2O2溶液，观察有什么变化，并加以说明。几分钟后，在未经煮沸的试管中，加10滴新鲜的邻苯二酚酒精溶液，观察有什么变化，并加以解释。思考题1过氧化物酶与氧化酶的作用有何不同；为什么在过氧化物酶中必须加H2O2才能使邻苯二酚氧化？2过氧化氢酶与过氧化物酶的作用有何不同？以方程式表示过氧化氢酶对H2O2的作用。实验十三 植物组织水势的测定小液流法原理植物组织的水分状况可用水势来表示。植物组织水势的大小在一定程度上能反映出植物对水分的需求状况。一般来说，当植物组织水势低时，那么是需水的反映，因此在农业生产中，可利用测定植物组织水势的变化

56、作为灌溉的参考指标。当植物组织浸入各种浓度的溶液中时，由于细胞和溶液间的水分交换，溶液浓度发生改变，浓度的改变引起比重的改变，因此，当把浸过植物组织的溶液滴回原来相应的溶液中时，液滴分别发生上浮，下沉或不动情况，液滴不动表示溶液浸过组织后浓度未变，此溶液的溶质势即等于组织的水势。材料与设备小麦、玉米、甘蓝、棉花叶片或马铃薯块茎、甜菜块根每组：10ml指形试管7支、10具塞刻度试管7支、5ml移液管1支、10ml移液管1支、1ml移液管1支。毛细滴管7支试管架、解剖针药品1MCaCl2溶液、亚甲蓝粉末实验步骤1将14支试管放成两排，按所需体积在其中一排中分别参加1MCaCl2溶液，使其稀释至10

57、ml而浓度范围依次为，这一组为对照组，然后分别用移液管从对照管取1ml加到另一组试管中，低浓度向高浓度配，这一组称为试验组。2取10株小麦，摘取每株小麦的等位叶片各1片、每5片头尾相叠，取中间部位切成7段，每段长，分别放入试验组的7支试管中，块茎根也可，30分钟内摇动试管34次。30分钟后用解剖针挑取微量亚甲蓝粉末，投入各试管中摇匀使之完全溶解，呈蓝色。用毛细管吸取少量蓝色CaCl2溶液，轻轻插入到对照组对应的试管中央部位，缓慢滴出一滴蓝色溶液，仔细观察液滴是上升，下降还是不动。在短时间内，蓝色液滴不动的这个溶液渗透势或者是两个溶液一个缓慢上升和相邻一个缓慢下降的溶液的渗透势平均值即为植物组织

58、的水势。实验结果及计算溶液浓度1MCaCl水ml液滴移动方向43216789以表示上浮，表示下降 表示不动植物组织水势iCRT其中为水势，以大气压表示R气体常数0.082atml/molkT绝对温度273+tC液滴不动的溶液浓度I范托夫校正系数CaCl2 i思考题1测定植物水势有何实际意义？2植物组织水势除用外液浓度比重变化作指标外，还可用什么指标？实验十四 植物伤流液的成分分析原理植物根系不仅是吸收水分和矿质元素的重要器官，而且还是重要的合成器官，植物吸收的无机盐，有一局部即在根中进行初级同化，转变为有机物并向地上部运输。当植物地上部被切去时，从伤口处就会有液体流出，这种现象称为伤流，所流出

59、的汁液称为伤流液。伤流反映了根系的活动情况，测定伤流液中各种营养成份的种类和数量，可以评价根的吸收能力和合成能力。本实验通过点滴分析鉴定伤流液的几个成份。材料与设备玉米苗或丝瓜苗弯曲玻璃管内径34mm、弯曲角度45、乳胶管、刀片、烧杯、白瓷板、滴管药品二苯胺试剂：二苯胺溶于5.4ml浓硫酸中。0.5%联苯胺：联苯胺溶于100ml50%的乙醇中。注：联苯胺先用少量酯酸溶解。5%钼酸铵溶液：5g钼酸铵溶在100ml蒸馏水中。0.1%茚三酮试剂：茚三酮溶于100ml95%乙醇中。0.1%蒽酮试剂：蒽酮溶在100ml浓硫酸中。饱和醋酸钠溶液：固体亚硝酸钴钠实验步骤1收集伤流液1将乳胶管的一端紧套在玻璃

60、管的短头，以防漏水。玻璃管的另一端接一试管用于收集伤流液。2挑选健壮待测植株，在距地面3cm处切去地上局部，将乳胶管的另一端套在植物的断茎上，以防漏气。将试管位置放得稍低于地面，在植物根际浇足水，第二天伤流液自动流入试管中。就可收取伤流液。2点滴分析1硝态氮在NO3存在时，二苯胺被硝酸氧化而显深蓝色取一滴伤流液在瓷板上，加一滴二苯胺试剂，呈蓝色。2无机磷钼酸铵NH42 MoO4遇磷酸盐生成磷钼酸铵NH43PO412MoO32H2O，它的氧化能力极强，可氧化自由钼酸或钼酸盐难以氧化的联苯胺生成联苯胺蓝和钼蓝两种物质。取一滴伤流液于白瓷板上，加一滴钼酸铵溶液，加热枯燥后再加一滴联苯胺溶液和一滴醋酸