DNA提取试剂的作用

1、DNA提取试剂的作用1.CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）：是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性在高离子强度的溶液中（0.7mol/LNaCl）,CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.注:CTAB溶液在低于15C时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15C.2Tris-HCl：提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;EDTA：螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCI：提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；B-

2、巯基乙醇：抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。PVP（聚乙烯吡咯烷酮）：酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚，减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合，有效去除多糖.氯仿：使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开8异戊醇的作用是消除抽提过程中出现的泡沫。氯仿是强蛋白质变性剂，抑制RNA酶的活性，除去蛋白质污染。9溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的卩-1,4糖苷键，10.:是离子型表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，解聚细胞中的核蛋白，使蛋白质变性而沉淀下来。3mol/LNaAc：有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS

3、-蛋白复合物凝聚而沉淀之。无水乙醇：乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合13.蛋白质的去除：酚/氯仿抽提；使用变性剂变性（SDS，异硫氰酸胍等）多糖的去除：高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5MNaCl，高盐可溶解多糖.多酚的去除：在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:B-巯基乙醇，抗坏血酸，半胱氨酸,二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂如PVP（聚乙烯吡咯酮）,PEG（聚乙二醇），它们与酚类有较强的亲和力,可防止酚类与DNA的结合盐离子的去除：70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸,4为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实

4、验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67左右。因而也可改用95乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵）。但是加95%的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙

5、醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置1530分钟即可。5.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.10.25mol/L?在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。6加核糖核酸酶降解

6、核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。7.为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH),可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，