DB15∕T 2602-2022 苜蓿中咪草烟残留量的测定 高效液相色谱法

1、 ICS 65.020.01CCS B 2515内蒙古自治区地方标准DB15/T 26022022苜蓿中咪草烟残留量的测定高效液相色谱法Determination ofImazethapyr residue in alfalfa-Highperformance liquidchromatography2022-06-24发布2022-07-24实施 DB15/T 26022022目次前言. II12345678910范围. 1规范性引用文件 . 1术语和定义 . 1原理. 1试剂和材料 . 1仪器和设备 . 2试样制备 . 2测定步骤 . 2结果计算和表示 . 3精密度 . 4附录A（资料性）

2、高效液相色谱法测定咪草烟标准溶液色谱法. 5I DB15/T 26022022前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。II DB15/T 26022022苜蓿中咪草烟残留量的测定高效液相色谱法1范围本文件规定了高效液相色谱法测定苜蓿中咪草烟残留量的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备、测定步骤、结果计算和表示、精密度。本文件适用于苜蓿中咪草烟残留量的测定。本文件的检出限为0.025 mg/kg。本文件的定量限为0.10 mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的内容

3、通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备34术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理试样中咪草烟残留物样品经过甲醇和碳酸钠提取液提取、离心、萃取、旋蒸，用离子交换型（SCX）固相萃取小柱净化，甲醇和氨水洗脱，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。5试剂和材料乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲醇（CH3OH）：色谱纯。磷酸（H3PO4）：优级纯。二氯甲烷（C

4、H2Cl2）。冰乙酸（CH3COOH）：优级纯。氨水（NH4OH）。无水硫酸钠（Na2SO4）：优级纯。碳酸钠（Na2CO3）：优级纯。碳酸钠溶液（0.1mol/L）：称取10.6 g碳酸钠，用水溶解，定容至1 L容量瓶中。1 DB15/T 26022022甲醇-碳酸钠溶液（1+1，v/v）：量取100 mL甲醇，加入100 mL碳酸钠溶液（5.9），混匀。磷酸溶液（1+9，v/v）：量取10 mL磷酸，用水稀释定容至100 mL。氨水-甲醇（1+9，v/v）：量取10 mL氨水，加入90 mL甲醇，混匀。水+甲醇（1+9，v/v）：量取10 mL水，加入90 mL甲醇，混匀。乙酸溶液（5+9

5、5，v/v）：量取5 mL冰乙酸，用水稀释定容至100 mL。标准品：咪草烟（C15H19N3O3）：纯度不小于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准储备液(1.00 mg/mL)：准确称取适量的咪草烟标准物质，用甲醇溶解并配制成(1.00 mg/mL)的标准储备液，保存于-18冰箱内，可使用6个月。标准使用液：准确吸取0.10 mL咪草烟的标准储备液(5.16)至10 mL容量瓶内，用甲醇稀释定容至刻度，配制成10.0g/mL的标准溶液，于-18冰箱内避光保存，可使用1个月。标准系列工作液：分别吸取浓度为10.0g/mL咪草烟标准液 0.25 mL、0.50 mL、1.00

6、mL、1.50 mL、2.00 mL于10.00 mL容量瓶，用水+甲醇(5.13)定容至刻度，该标准系列咪草烟浓度分别为0.25g/mL、0.50g/mL、1.00g/mL、1.50g/mL、2.00g/mL。固相萃取柱：SCX，60 mg/3mL。微孔过滤膜（尼龙）：13 mm0.22 m。注：除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682所规定的一级水。6仪器和设备高效液相色谱仪：配有紫外检测器（或二极管阵列检测器）。电子天平：感量0.01 mg和0.01 g。离心机：转速大于等于4000 r/min。超声波水浴。旋转蒸发仪。涡旋混合器。氮吹仪。组织粉碎机。样品筛：筛

7、孔尺寸1.0 mm。7试样制备按照GB/T 14699.1中有关规定采集样品，去杂质后充分混匀，按照GB/T 20195制备试样，利用四分法取样后，充分研磨，过1.0 mm筛，新鲜样品利用四分法取样后，充分破碎作为分析样品备用，将处理好的试样放置-18冰箱保存。8测定步骤提取准确称取苜蓿新鲜样品5 g（精确至0.01g）或草粉2 g（精确至0.01g）于50 mL的塑料离心管中，加入30 mL的甲醇-碳酸钠溶液（5.10），混匀，超声提取30 min，用磷酸溶液（5.11）调至pH=2.5，于4000 r/min离心10 min，收集上清液于分液漏斗中，用50 mL二氯甲烷（5.4）萃取两次（

8、25 mL+25 mL），2 DB15/T 26022022有机相加适量无水硫酸钠（5.7）除水后收集于旋转蒸发瓶中，于45减压蒸至近干，加适量甲醇（5.2）溶解。净化强阳离子交换固相萃取柱SCX（5.19）净化，用1 mL水、1 mL甲醇（5.2）活化固相萃取柱，试样全部过柱，用1 mL水、1 mL甲醇（5.2）淋洗固相萃取柱，再用6 mL氨水-甲醇（5.12）洗脱，收集流出液于10 mL比色管中，整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。洗脱液于50条件下氮吹至近干，用2.00mL水-甲醇（5.13）溶解、涡旋混匀，过0.22m微孔过滤膜（5.20），待测。测定8.3.1相液色谱测定参考

9、条件液相色谱法测定参考条件如下：a)b)c)d)e)f)色谱柱：C18型柱，长150 mm，内径3.9 mm，粒径5m，或等效的色谱柱；流动相：A:乙酸（5.14）+B:乙腈（5.1）= 60+40（v/v）；流速：1.0 mL/min；进样量：10.00L；柱温：40；检测波长：258 nm。8.3.2标准曲线的制作按照8.3.1测定条件，将标准工作液（5.18）注入高效液相色谱仪中进行测试。测定相应的峰面积，以标准工作液（5.18）的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。8.3.3试样溶液的测定按照8.3.1测定条件，将待测样品溶液注入高效液相色谱仪中进行测试。待测样品溶液中目标物

10、质的响应值应在仪器线性范围内，否则应适当稀释。标准工作液与待测样品溶液等体积进样。根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积，对试样溶液的色谱峰根据保留时间进行定性，外标法定量。咪草烟标准溶液色谱图见附录A中图A.1。平行实验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。空白实验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。9结果计算和表示试样中咪草烟含量X按式（1）计算：（C-C0）VX=(1)m式中：X试样中咪草烟的含量，mg/kg；3 DB15/T 26022022C待测液中咪草烟的浓度，g/mL；C0试剂空白；V试样溶液定容体积，mL；m试样的称样量，g。注：测定结果用算术平均值表示，保留两位有效数字。10精密度在实验室内重复性条件下获得的2次独立测定