检出限和定量限的建立与验证EP17-A

1、检出限和定量限的建立与验证前 言NCCLS制订的标准文件EP17-AProtocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation;Approved Guideline内 容四. 结果报告二. 空白限和检出限的建立与验证三. 定量限的确认与验证一. 名词解释 五. 小结一. 名词解释 空白限（limit of blank, LoB）：（一定概率下）空白样本可能被检测得到最高测量结果。并非被测物的实际浓度；是确保阳性信号在实际浓度处成为检出限；检出限（limit of detection, LoD）：检测

2、系统或方法所能检测出的分析物的最低浓度。分析灵敏度；检测底限；最小检出浓度定量限（limit of quantitation, LoQ）:一定实验条件下，在精密度和正确度可接受的情况下检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度。 三者关系： LoB LoB（或者计算 LoB（或者计算85%验证通过。三. 定量限的建立与验证3.1 定量限的简介（ LoQ ）定量限（limit of quantitation, LoQ）:一定实验条件下，检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度，其总误差符合实验室预期要求（临床可接受）。 LoB LoD LoQ若低浓度样本的测量不确定度（uncertainty）或总

3、误差（total error）能够确定，也可以不建立LoQ，直接提供低浓度样本的不确定度，由用户来决定测定值是否可用。总误差（total error，TE）的计算方法可参考文件EP21。样本要求：已准确定值。1）低浓度的标准物质或有证参考物质；2）在线性范围内稀释。厂家或方法开发者完成。三. 定量限的建立与验证3.2 定量限的建立（ LoQ ）总误差规定目标。样本数：建立，至少40次检测；验证，至少25次（建议多个样本多天、多次测定）根据LoD的测定结果的偏倚和不精密度，计算TE。计算SDS，若多个样本，按照下面公式计算：计算偏倚Bias=每个样本测定的均值-参考值总误差TE= Bias +2

4、 SDS。 若LoD的总误差 目标总误差，则LoQ = LoD。 不满足则提高分析物浓度，按照上述步骤检测，重新计算TE，直至TE目标总误差。三. 定量限的建立与验证3.3 验证定量限（ LoQ ）采用被测物量=LoQ的样本，至少进行25次检测（建议多个样本、多天进行）。计算每个测定结果与参考值的偏差，比较是否偏差目标总误差（TE）计算小于TE的检测结果所占比例是否符合要求（默认 =5%），即95%。 *若检测结果满足表2中的最低限，也被认为 符合95%的要求。符合要求，验证通过。不符合要求，则联系厂家或单独建立LoQ。 三. 定量限的建立与验证3.4 举例EP17-A：建立LoQ数据采用建立

5、LoD时，非正态分布的数据，SDS=0.108 。假设1：无偏倚（Bias）假设2：浓度0.5 g/L以下，目标TE=0.250 g/L计算：TE= Bias +2 SDS=2x0.108=0.216 g/L0.250 g/L则LoQ= LoD.三. 定量限的建立与验证3.4 举例总误差目标20%。计算：0.500 g/LTE= Bias +2 CV=（0.5-0.493）*100/0.5+2x9.3331=20.062%则LoQ= 0.500 g/L.谭丽娜. 酶联免疫法检测血清HBsAg的空白限、检出限及定量限的建立与评价D.2013四. 结果报告 报告具体详细报告相对简单四. 结果报告 图5. 空白样本、低浓度样本（LoD）和定量限处（LoQ）重复测定结果的分布