生物制品无菌试验规程

1、生物制品无菌试验规程生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、 本毒。在制造过程中应由制造部门按各 制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。各种生物制品的无菌试验除有专门规定者 外，均应按照本规程的规定进行。1抽样原液及半成品原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为 0.1%,但不得少于1.0ml。大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。成品每亚批均应进行无菌试验， 样品应随机抽取，应具有代表性 （包括分装过程的前、中、后样品）。分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于 5支，

2、101, 500支（瓶）者抽检不少于 10支（瓶），50110000支（瓶） 者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干 200 瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。620ml抽检量 加倍。5ml和5ml以下者按1.2.1项抽检。凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批 进行检查，成品可不再做。2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的 培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌

3、时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。检查霉菌和腐生菌应采用改良马丁培养基。检查混浊制品可采用不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基。检查活菌苗时可加大琼脂含量，做成斜面。检查支原体应采用猪胃消化液半固体或牛心消化液半 固体培养基。生物制品无菌试验用培养基亦可用经检定合格的干燥 培养基配制无菌试验培养基的灵敏度，乙型溶血性链球菌（32210株）应达到10-8,短芬胞杆菌（7316株）和生抱子梭状芬胞杆 菌（64941株）应达到10-7,白色念珠菌（ATCc 10231）和腊 叶芬枝霉应达到10-6 o生物制品无菌试验培养基由质量检定部门与培养基制 造部门会同进行灵敏度试验。每当更换主要原材料时， 应进行灵敏度试

4、验，合格后方可应用（灵敏度试验法见附录2、3）。各生产单位的质量检定部门应定期抽检无菌试验培养 基的灵敏度，检定所应定期抽检各所的无菌试验培养基。3无菌试验方法无菌试验取样、移种等全部操作，应在无菌操作室内 或无菌条件下进行，无菌操作室应经常保持清洁，在每次操作前， 应彻底消毒。菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品及粘稠不易过滤 的血液制品应用直接接种法进行无菌试验。人白蛋白及人丙种球蛋白（包括各种剂型及应用途径的制品）应用薄膜过滤法进行无菌试验，其他血液制品亦可用薄膜过滤法或直接接种法进行。直接接种法菌苗、疫苗、类毒素、抗毒素类制品每安甑装量5.0ml以上者（不含5.0ml）取样不 应少于1.0

5、ml ,装量在5.0ml以下者（含5.0ml）取样不得少于 0.5ml ,装量不足0.5ml者，全部吸取。含防腐剂的制品，接种量与培养基的比例：用苯酚或氯仿作防腐剂者至少为 1:20,用汞作防腐剂者或制品内含 有甲醛、抗生素者至少为 1:50o先按此比例接种于硫乙醇酸盐 培养基内增菌，于2025c培育34天后移种至硫乙醇酸盐培 养基、适宜的琼脂斜面、改良马丁培养基各 2管，每管0.5ml。 将硫乙醇酸盐培养基、适宜的琼脂斜面各1管置3035c培育,其余各管置2025c培育，培育时间除有专门规定者外共为8天。不含防腐剂制品，装量在 5.0ml以下者（包括5.0ml ）每10支安甑混合，装量在5.

6、0ml以上者每7支安甑混合, 将混合后的样品直接接种一组培养基，分别置2025C、3035c培育，培育时间共为 8天。支原体培养基临用时将半固体煮沸1015分钟后，冷却到56c左右，加入未灭能马血清或灭能小牛血清和酯 母浸液（培养基、血清、酯母浸液之比为7:2:1 ）,并可酌情加入适量青霉素或醋酸铃，充分摇匀，等冷至3537 c时种入待检样品0.51.0ml ,共接种2支培养基，置3537c培育14天混浊和接种后不能判定结果的制品，可取规定量的样品接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基（ 200ml）内进行增 菌培养，34天后移种。培养基种类和支数、培育温度同3.3.1.2 项，共培育8天后判定结果

7、。血液制品取规定抽样数，按下列规定，从每瓶抽取样品，并全部接种完。样品每瓶装量不足1.0ml者，抽取全量，120ml以下者（不 含20ml）,抽取1.0ml以上，每支装量为15ml的培养基，接种 1.0ml。样品每瓶装量以下者（不含）抽取 5.0ml以上,100ml及以 上者按15%由样，每支装量为40ml的培养基，接种5.0ml。应接种的培养基支数依取样的总量而定。接种硫乙醇酸盐培养基与改良马丁培养基支数之比为2:1 o接种后将硫乙醇酸盐培养基总支数的 1/2置3035c培育， 其余置2025c培育，改良马丁培养基置 2025c培育，培育 时间不少于14天。薄膜过滤法滤膜孔径为0.220.3

8、取规定抽检样品数，每瓶装量100ml及100ml以下者取全量， 100ml以上者取半量加入灭菌薄膜过滤器内，加压或减压过滤。 如为含汞防腐剂者，在样品过滤后，应用灭菌生理盐水或其他适 宜溶剂冲洗滤膜3次，每次100ml。过滤后，无菌取出滤膜，分 别放入硫乙醇酸盐培养基 2支及改良马丁培养基1支（每支装量 不少于40ml,高度不得低于7cm）。如果使用一个过滤装置，则 将该膜剪成三等分，分别放入规定培养基中o 将滤膜放入培养基 后，一支硫乙醇酸盐培养基置 3035 c培育，其余各支培养基 置2025c培育。培育时间不少于 7天。最好采用全封闭式一次性微孔过滤集菌器，要求每支培养器 培养装量为10

9、0ml。检查厌氧性杂菌用培养基需加热驱氧者，必须冷却到 45c以下再行接种。冻干制品按使用说明书或瓶签规定的稀释量稀释后进 行无菌试验。4判定无杂菌生长判为合格（有专门规定者除外）无菌试验发现杂菌生长，可复试。该制品量应加倍。若复试仍有同样杂菌生长， 该制品判为不合格。如为不同杂菌生 长，可第二次复试，复试样品为第一次复试量的 2倍，若仍有杂 菌生长该制品判为不合格。 支原体阳性者不复试，该批制品判为 不合格。成品无菌试验不合格的亚批数占整批的 30%Z上时， 由质量检定部门会同有关部门根据具体情况，全部或部分废弃。附录1无菌试验培养基处方1硫乙醇酸盐培养基胰酪蛋白陈（或酪素胰酶消化液，以总1

10、5g 氮计2000m。 TOC o 1-5 h z 酯母浸出粉（或酯母透析液 200ml）5g葡萄糖5g氯化钠2.5gL-胱氨酸（或半胱氨酸盐酸盐）0.5g硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸 0.6ml ）0.5g0.65琼脂0.75g新鲜配制的0.1%刃天青溶液（或0.2%美 1.0m蓝溶液0.5ml ）l加至去离子水（或蒸储水）1000ml最后 pH7.10.22硫乙醇酸盐培养基（不含琼脂）胰酪蛋白陈（或酪素胰酶消化液，以总15g 氮计2000mg TOC o 1-5 h z 酯母浸出粉（或酯母透析液 200ml）5g葡萄糖5g氯化钠2.5gL-胱氨酸（或半胱氨酸盐酸盐）0.5g硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸 0.6ml）0.5g加至 去离子水（或蒸储水）1000ml最后 pH7.10.23改良马丁培养基 TOC o 1-5