蛋白酶抑制剂

1、蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶 抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了 5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因 此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋 白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。常用抑制剂PMSF PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。分子式为C7H7FO2S

2、，分子量为174.19，纯度99%。常用生化试剂，用于抑制蛋白酶.【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml (10mmol/L)，分装成小份贮存于-20C。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液 (100mmol/L)。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大 量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶 液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25C的失活速率高于4C。pH值为8.0时，20 u m

3、mol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min， 这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH8.6)并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。蛋白水解酶抑制剂啊实验室常用的啊主要用于组织匀浆时用!！抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)；10mg/ml溶于异丙醇中；在室温下可保存一年；工作浓度:17174ug/ml(0.11.0mmol/L);在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。EDTA抑制金属蛋白水解酶；0.5mol/L 水溶液，pH89;溶液在4C稳定六个月以上；工作浓度:0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/

4、ml);加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶；1mg/ml溶于甲醇中；3储存液在4C一周内稳定，-20C稳定6个月；1 作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)在水中不溶解。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B;lOmg/ml 溶于水；储存液4C稳定一周，-20C稳定6个月；工作浓度0.5mg/ml。胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶；lOmg/ml 溶于水，p

5、H783储存液4C稳定一周，-20C稳定6个月；工作浓度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);避免反复冻融：在pH12.8时失活。蛋白酶抑制剂混合使用35ug/ml PMSF丝氨酸蛋白酶抑制剂0.3mg/ml EDTA金属蛋白酶抑制剂0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)酸性蛋白酶抑制剂0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)广谱蛋白酶抑制剂亮抑酶肽(Leupeptin) Molecular Formula C20H38N6O4 , 1/2H2SO4storage temp.-20CProduct DescriptionSpecificity: In

6、hibits serine and thiol proteases such as trypsin, plasmin, proteinase K, kallikrein, papain, thrombin, and cathepsinA and B. Not affected are a-, 0-, Y-, and 8-chymotrypsins, pepsin, cathepsin D, elastase, renin, and thermolysin.Suggested working concentration: 0.5 -10 gg/ml (1 - 20 gM)Solubility/S

7、tability: Highly soluble in water (1 mg/ml). Stable for at least 1 week at +2 to +8 C and 6 months frozen in aliquots at -15 to -25C.Quality Function test: Performance-controlled with trypsinPepstatin A (抑肽素)，又称培普他丁，胃酶抑素，抑胃肽。分子式C34H63N5O9,分子量685,91 g/mol,一种酸性蛋白酶抑制剂。由链霉菌Streptomyces testaceus产生的，能抑制胃

8、蛋白酶、胃亚蛋白酶、组织蛋白酶D、各种天门冬氨酸蛋白酶，例如组织蛋白酶D、肾素、胃 蛋白酶、细菌天门冬氨酸蛋白酶和HIV蛋白酶和血管紧张素释放酶.熔点228229C。旋光度a D27-90 (0.288%,甲醇)。 对Rydon-Smith、高锰酸钾呈阳性反应，对坂口和埃利氏呈阴性反应。易溶于甲醇、乙醇、乙酸，不溶于乙酸乙酯、醚、 苯、氯仿等有机溶剂。紫外光谱为末端吸收，有13个组分。Aprotinin蛋白酶抑制剂(抑肽酶)Synonym Trypsin inhibitor (basic)Molecular Formula C284H432N84O79S7Molecular Weight 65

9、11.44ApplicationProtection of proteins and enzymes during isolation/purification.Purification of urokinase, trypsin, and chymotrypsin on immobilized aprotinin.Quantification of kallikrein activity in mixtures of esterases and proteases.Guarantee the controlled degradation of substrates by avoiding n

10、onspecific proteolysis in clinical chemical tests.Inhibition of protease activity, which increases the lifetime of cells in cell and tissue culture studies.Aprotinin as a model protein in protein-folding studies.Molecular weight marker in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.Product DescriptionTry

11、psin inhibitor, pancreas type (BPTI)Activity: approx. 630 U/mg (25C, Chromozym TRY as the substrate) = approx. 200 U/mg (trypsin inhibitor units, 25C, BAEE as the substrate)Specificity: Serine protease inhibitor not acting on thrombin or factor X. Inhibits plasmin, kallikrein, trypsin, and chymotryp

12、sin with high activity.Working concentration: 0.06 to 2 gg/ml (0.01 - 0.3 gM)Solubility/Stability: Freely soluble in water (10 mg/ml) or aqueous buffer solution (e.g., Tris, 0.1 M, pH 8.0). A solution adjusted to pH 7-8 is stable for approximately 1 week at +2 to +8C. Aliquots stored at -15 to -25C

13、are stable for approximately 6 months.Note: Avoid repeated freezing and thawing and exposure to strongly alkaline solutions (inactive at pH 12.8).Contents LyophilizateQuality Purity: Electrophoretically homogeneous离心力Centrifugal force (F)离心力作为真实的力根本就不存在，在非惯性系中为计算方便假想的一个力。请看下面的说明： 向心力使物体受到指向一个中心点的吸引、

14、或推斥或任何倾向于该点的作用。笛卡儿把离心力解释为物体保持其“限定 量”的一种趋势。它们的区别就是，向心力是惯性参考系下的，而离心力是非惯性系中的力。我们处理物理题时都是在 惯性系下(此时牛顿定律才成立)，所以一般不用离心力这个概念。由于根本不是一个情况下的概念，我们无法对他们的 方向和大小进行比较。F=m2r3：旋转角速度(弧度/秒)r:旋转体离旋转轴的距离(cm) m :颗粒质量相对离心力 Relative centrifugal force (RCF)RCF就是实际离心力转化为重力加速度的倍数g为重力加速度(9.80665m/s2)同为转于旋转一周等于2 n弧度，因此转子的角速度以每分钟旋转的次数(每分钟转数n或r/min)表示：一般情况下，低 速离心时常以r/ min来表示。3、分离因素计算公式：RCF=F 离心力/ F 重力=m3 ?2r/mg= 3 ?2r/g= (2* n *r/r*rpm) ?2*r/g 注：rpm 应折换成 转/秒