5芽孢杆菌检测试验方法

1、芽孢杆菌检测试验方法所用的分析天平，移液管，滴定管，容量瓶等玻璃器皿按有关检定规定定期校正。所用的水，在未注明其他要求量，均指蒸馏水或去离子水，所用的试剂，在未注明规格时，均为分析纯4.1感官指标：4.1感.官1特性：从抽取的样品中，取适量倒在白纸或玻璃板上，在光线充足的条件下，观察颜色和状态，并品尝滋味，闻其气味。过筛率：随机抽取样品，取目和目的筛子，将样品取出称重，过筛，再次称重，计算过筛率。过筛后的总质量过筛率X筛筛筛筛过筛筛筛前筛筛的总质量筛4过菌2种鉴别筛4过2菌过落1形态：培养24小时，暗白色或浅黄色圆形菌落，中央有小突起，不透明，表面干燥，菌落易挑起。筛4过2镜过检2菌筛体形态：

2、0过5-0过6*微2米过，5杆状3，过中5生芽孢、即使孢囊膨大、也不显著。筛4过2革过兰3氏筛染色：革兰氏阳性菌。筛4过3芽筛孢筛杆菌活菌总数筛4过3仪过器1、设备、试剂和培养基筛分析天平，感量为0恒温水浴锅；震荡器；高分辨力相差显微镜；湿热灭菌锅；超净工作台；研钵；血球计数板，；血球计数板专用盖玻片，X；加样枪；各类玻璃器皿。的无菌生理盐水试管，80ml的0无过菌8生5理%盐水的三角瓶，30ml的0无血菌8生5理生盐水的三角瓶，空的三角瓶（内装颗玻璃珠），空的的刻度试管，吸管，培养基配方：营养琼脂粉，蒸馏水。上述物品，C，分钟蒸汽灭菌后备用。在超净工作台上将灭好菌的营养琼脂倒平皿，每个大约，

3、放在紫外灯下吹风小时，然后放在工作台面过夜，第二天备用。4血3预血处理：准确称取样品，血0克0，将其全部转入一只已消毒的直径约，厘米的研钵中，从上述的无菌生理盐水三角瓶中取出约水加入研钵，研磨分钟，然后使用无菌生理盐水将其全部转移到空的的刻度试管中，定溶至，用振荡器震荡分钟，将其全部震荡均匀。4无3无活3化及固定：由于芽孢杆菌能游动影响计数，芽孢菌在生长时聚成团，影响计数，故采用0的水浴分钟的处理，将芽抱活化分散，将杆菌固定。将振荡均匀的试管放入0的水浴锅中加热处理分钟，其中分钟时取出用振荡器振荡秒，再次水浴分钟后迅速冷却至7左右备用。4无3稀无释4：使用80，0用无8的5无理菌生理盐水将上述

4、制备好的试管在超净工作台上全部转入一只无菌的三角瓶（内装颗玻璃珠）中。在摇床上7摇动分钟。取出，振荡均匀后用的无菌吸管准确吸取溶液，转入到装有9，无用菌生理盐水的试管中。使用振荡器振荡2分钟。振荡均匀后用1，的用无菌吸管准确吸取1，溶用液，转入到装有9，无用菌生理盐水的试管中。如此稀释样品至X后备用。每次操作必须使用无菌吸管，吸管不可重复使用。涂平板及培养：准确吸取上述X样品液体，接种在琼脂平板培养基上，再用无菌刮铲在平板上涂抹均匀。设2个重复和一个空白对照。将涂抹好的平板平放于桌上20-3分钟0，使菌液渗透于培养基内，然后将平板保温7培养至长出菌落即可计数。4无3计无数6：典型菌落为暗白色菌

5、落，中央有小突起，不透明，表面干燥，菌落易挑起。较嫩的菌落或成片芽孢可能长成表面湿润的球状或泡囊状菌落。由于枯草芽孢杆菌能够游动，在固体培养基上生长菌落各种形态都有，故有可能出现与上述典型菌落不同的菌落，可以通过显微观察确定是否为枯草芽抱杆菌。4无4杂菌率4无4原无理，：细菌在营养琼脂平板上长出的菌落个数即为样品中的细菌总数。根据菌落形态和显微观察可以分辨出是否为枯草芽孢杆菌。杂菌占细菌总数的比值即为产品的杂菌率。4无4试无验2设备与器材：分析天平，感量为；震荡器；恒温培养箱；湿热灭菌锅；超净工作台；各类玻璃器皿。4无4试无剂3与溶液：0的无无8菌5生理理盐水。培养基配方：营养琼脂粉，蒸馏水。

6、4无4操无作4步骤精确称取枯草芽抱杆菌样品（精确至），转入内装无菌生理盐水的试管中，使用振荡器振荡分钟，使样品充分溶解备用。4无4无4吸无取24无4无的4检无液，用加入装有9，无用菌生理盐水的试管中，振荡摇匀。按操作，至样品溶液稀释到X备用。每次操作必须使用无菌吸管，吸管不可重复使用。准确吸取上述1X10样品液体01,接种在琼脂平板培养基上，再用无菌刮铲在平板上涂抹均匀。设2个重复和一个空白对照。将涂抹好的平板平放于桌上0分钟，使菌液渗透于培养基内，然后将平板保温7培养至长出菌落即可计数。4.4.4计.数5时注意只数非芽孢杆菌，不要数典型的芽孢杆菌菌落。若有的菌落无法确定，可继续培养至48小时

7、确定，仍不能确定的，采用显微观察进行确定。以2个重复的菌落数相差不悬殊，每皿菌落数在10-100之间来确定此操作的准确性，否则需要重新操作。最终菌落总数取2皿中菌落总数的平均数。以上操作均为无菌操作。4.4.计5算X1二AX10XB式中：X1每克样品中杂菌数个克A最终计数的菌落总数B稀释倍数水分按照B砷按照B铅按照B沙门氏菌按照B643执5行菌。19813079执菌行1。99913080执菌行19。9113091执菌行2。00X1X1+式中：X1X100X0产品中的杂菌率（）每克样品中杂菌数个克X每克样品中的芽抱菌数个克3检验规则5.出1厂检验成1品出厂前须经公司综合产品部逐批检验合格，并签发合格证。出2厂检验项目为表观指标、芽孢活菌数（研磨加热后平板法）、杂菌率、水分。型2式试验2出.现1下列情况之一时，应做