食品安全亚硝酸盐与硝酸盐的测定-

1、食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定.一、方法适用范围及原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺分光光度法测定，方法的检出限为1mg/kg,定量限为3mg/kg。硝酸盐采用镉柱复原法测定，方法的检出限为10mg/kg，定量限为30mg/kg 。.方法原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺巧合构成紫红色染料，与规范系列比较定量。采用镉柱将硝酸盐复原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。.二、实验预备一试剂配制二规范溶液的配制三主要仪器四镉柱.一试剂配制实验用水应为蒸馏水、纯真水或去离子水，不能用自来水。购买试剂时要留

2、意试剂称号和分子式能否与规范方法一致。例如：亚铁氰化钾K4Fe(CN)6.3H2O、乙酸锌Zn(CH3COO)2.2H2O、硼酸钠Na2B4O7.10H2O、对氨基苯磺酸C6H7NO3S、 盐酸萘乙二胺C12H14N2.2HCL . 氨缓冲溶液：量取 30mL 盐酸，加 100mL 水，混匀后加65mL 氨水，再加水稀释至 1000mL，混匀。调理 pH 至 9.69.7用PH计。氨缓冲液的稀释液：量取 50mL 氨缓冲溶液，加水稀释至 500mL，混匀。.二规范溶液配制购买固体规范的，应留意亚硝酸钠NaNO2、硝酸钠 NaNO3均应为优级纯GR，称量前，必需在硅胶枯燥器中枯燥24小时以上 。

3、购买液体规范溶液的，应留意其标示的浓度是以N计、以NO2-计 、以NO3-计，最后结果均应换算成 以NaNO2计 。.亚硝酸钠、硝酸钠规范贮藏溶液200g/mL，以NaNO2计应置棕色瓶中5 以下冷藏保管，有效期6个月。亚硝酸钠、硝酸钠规范运用液5.0g/mL 、以NaNO2计、必需临用前现配。 .三主要仪器小型绞肉机、粉碎机、匀浆机。天平：感量为0.1mg和1mg。分光光度计 ：2cm比色皿。镉柱 .四镉柱的制备投入足够的锌皮或锌棒于 500mL 硫酸镉溶液(200g/L)中，放置 3h4h。当镉全部被锌置换后，用玻璃棒悄然刮下，取出剩余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法多次洗涤10

4、次以上。移入组织捣碎机中，加 500mL 水，捣碎约 2s，用水将金属细粒洗至规范筛上，取 20 目40 目之间的部分颗粒大小约同食用盐。.四镉柱的装填先用水装满镉柱玻璃管，然后装入 2cm 高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出。在悄然敲击下参与海绵状镉至 8cm10cm 高，上面再用 1cm 高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗。.当镉柱填装好后，先用 25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次 25mL。镉柱不用时，必需用水封盖，随时都要坚持程度面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。如无上述镉柱玻璃管时，可以 25mL 酸式滴定管替代。.三、样品接纳收样人

5、应仔细检查样品的包装和形状，假设发现异常，应与送样人达成处置决议。送样量不能少于规定数量，至少不能少于测试用量的三倍。 样品应编号登记，加施独一性标识，保证不同检测形状和传送过程中样品不被混淆。 .四、样品的制备和保管一样品的制备二样品的保管.一样品的制备已粉碎的样品盐菜末等，应运用圆锥四分法堆成圆锥体压成扁平圆形划两条交叉直线分成四等份取对角部分进展缩分。未粉碎的样品腌咸菜、腌萝卜条等，应间隔一定的间隔取多份小块四分法进展缩分。 已切成片或块的禽肉类样品排骨、鸡爪等，先室温解冻 ，四分法缩分。整块的禽肉类样品腊肉、烤鸭等在不同部位切取小片或截取小段四分法缩分。.一样品的制备将缩分后的样品四分

6、法分成二份，一份作留样备用100g，另一份切细后用捣碎机捣碎混匀供分析(50g)。当送样量不能满足留样要求时，全部粉碎混匀，在保证分析样用量后，全部用作留样。.样品应冷藏储运，在送达实验室后要尽快测定 。蔬菜类样品运用食品塑料袋装好，在5 以下冰箱冷藏保管 。禽肉类样品运用食品塑料袋装好，在-18 以下的冰柜或冰箱冷冻保管 。二样品的保管.五、实验步骤一试样前处置。二试剂空白制备。三规范曲线制备。四测定。.一试样前处置硼砂饱和液作用：硼砂溶入水中，即被水解为等量的硼酸与硼酸二氢钠，起缓冲溶液作用。溶液pH约为9.18，即碱性。在碱性下处置样品有几方面作用： 1是锌盐沉淀蛋白质时，要求在碱性。

7、2是碱性下处置肉制品，脂肪被皂化，减少样品被脂肪包裹，使亚硝基根更易提取到水溶液中。 3是溶液在碱性下亚硝基根以离子存在，易溶且稳定，如溶液偏酸性，那么构成亚硝酸，在加热下容易挥发，也易分解，呵斥损失。.二试剂空白制备于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，以70左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。然后一面转动，一面参与5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再参与5mL乙酸锌溶液。加水至刻度，摇匀，放置0.5h，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。 .三规范曲线制备1曲线至少作5个点不包括空白。2线性范围内相关系数应大于0.9990

8、。3测试溶液中被测组分浓度必需在校准曲线的线性范围内。 .四测定亚硝酸盐测定1盐酸萘乙二胺溶液易蜕变，最好临用时新配。2用2cm比色杯，以零管调理零点，于波长538nm处测吸光度。 .四测定硝酸盐的测定1镉柱复原效率的测定2样品滤液经镉柱复原3亚硝酸钠总量的测定.1镉柱复原效率的测定先用 25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗2次，每次 25mL,流速控制在3mL/min5mL/min(1-2滴/秒)。汲取 20mL 硝酸钠规范运用液，参与 5mL 氨缓冲液的稀释液，混匀后注入贮液漏斗，使流经镉柱复原，以原烧杯搜集流出液。当贮液漏斗中的样液流完后，再加 5mL 水置换柱内留存的样液。

9、.1镉柱复原效率的测定将全部搜集液如前再经镉柱复原一次，第二次流出液搜集于100 mL容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次20 mL，洗液一并搜集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。得到复原后溶液为100mL。.1镉柱复原效率的测定取10.0mL 复原后的溶液相当 10g 亚硝酸钠于 50mL 比色管中，参与 2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置 3min5min 后各参与 1mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置 15min，用 2cm 比色杯，以空白管调理零点，于波长538nm 处测吸光度，代入规范曲线计算含量。.1镉柱复原效率的测定复原效率计算： X=A100/10X复原效率，%A

10、由规范曲线计算测得的亚硝酸钠的含量，单位为微克g10测定用溶液中亚硝酸钠的含量，单位为微克g.1镉柱复原效率的测定复原效率大于 98%为符合要求。 假设不符合要求，那么继续用25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次 25mL。实验过程中，随时坚持镉柱在程度面以下，加液时沿贮液漏斗管壁匀速参与，防止镉柱内产生气泡。多次洗涤后，复原效率还不符合要求，应该重新制备装填镉柱。.2样品滤液经镉柱复原先以 25mL 氨缓冲液的稀释液冲洗镉柱，流速控制在 3mL/min5mL/min约1-2滴/秒。 汲取 20mL 滤液于 50mL 烧杯中，加 5mL 氨缓冲溶液，混合后注入贮液漏斗，使流

11、经镉柱复原，以原烧杯搜集流出液。当贮液漏斗中的样液流完后，再加 5mL 水置换柱内留存的样液。随时都要坚持程度面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。将全部搜集液如前再经镉柱复原一次，第二次流出液搜集于 100mL 容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次 20mL，洗液一并搜集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。.3亚硝酸钠总量的测定汲取 20mL 复原后的样液于 50mL 比色管中，分别参与 2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置 3min5min 后各参与 1mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置 15min，用 2cm 比色杯，以空白管调理零点，于波长538nm 处测吸光度。代入规范曲线计算

12、。.六、结果计算试剂空白不为零时应扣除。样品溶液有颜色时，应先不加显色剂测定吸光度，再从加显色剂后测得的吸光度中扣除。亚硝酸盐含量结果应换算成以NaNO2计，并保管两位有效数字。在反复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超越算术平均值的10%。.六、结果计算硝酸盐含量的计算以NaNO3计 X2=(X-X1) 1.232X2试样中硝酸钠的含量，毫克每千克mg/kg；X经镉柱复原后测得总亚硝酸钠的含量，毫克每千克 mg/kg。X1计算出的试样中亚硝酸钠的含量，毫克每千克 mg/kg。1.232亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数；.七、玻璃量器洗涤和枯燥先用机械方法除去量器上的污染物，如用毛刷刷，或用水摇动(必要时可参与滤纸碎片)。油或油类物质可选用适当的溶剂去除