活体组织氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒ROS说明书

1、Word文档 活体组织氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒ROS说明书主要用途 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测组织内活性氧族的生成和增加的较好而经典的技术方法。该技术由大师级科学家细心研制、胜利试验证明的。相宜于活体动物组织的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、年轻、代谢和养分学等的讨论。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。 技术背景 超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基

2、（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞年轻或凋亡。2,7-二氯荧光乙酰乙酸盐（

3、2,7-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生绿色荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。 产品内容 清理液（Reagent A） 300毫升 染色液（Reagent B） 1毫升 稀释液（Reagent C） 200毫升 说明书 1份 保存方式 保存染色液（Reagent B）在20冰箱里，严格避开光照；其余的保存在4冰箱里，有效保证12月 用户自备 50毫升锥形离心管：用于组织收集的容器 15毫升锥形离心管：用于工作液配制和组织处理的容器 1.5毫升离心管：用于工作

4、液配制的容器 6孔细胞培育板：用于组织染色的容器 培育箱或恒温水槽：用于染色孵育 荧光显微镜：用于观看荧光组织 荧光分光光度仪：用于组织荧光定量检测 试验步骤 方法一：新奇组织薄片定性检测 试验开头前，将20冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里溶化，稀释液（Reagent C）放进37恒温水槽里预热。然后移出25微升染色液（Reagent B）到新的15毫升锥形离心管，加入2.5毫升稀释液（Reagent C)，混匀后，将染色工作液置入暗室里。然后进行下列操作。 1 手术取出动物组织 2 放进预冷的50毫升锥形离心管 3 加入3毫升清理液（Reagent A）浸泡15秒 4

5、 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干 5 即刻用刀片切离组织为1cm X 1cm大小的片状组织 6 用镊子将组织薄片放进6孔培育板的一个孔 7 加入2.5毫升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液 8 放进37培育箱孵育20分钟，避开光照（留意：假如组织薄片较厚，可以增加孵育时间至60分钟） 9 当心抽去染色工作液 10加入3毫升清理液（Reagent A） 11用镊子将组织薄片放在载玻片上 12压片 13即刻在荧光显微镜下观看（定性检测）：激发波长490nm，散发波长520nm绿色荧光增加，表明活性氧族（ROS）含量高 方法二：组织匀浆定量检测 试验开头前，将

6、20冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里溶化，稀释液（Reagent C）放进37恒温水槽里预热。然后移出25微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入990微升稀释液（Reagent C)，混匀后，将染色工作液置入暗室里。然后进行下列操作。 1 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量 2 移取1克组织，放进预冷的50毫升锥形离心管 3 加入3毫升的清理液（Reagent A） 4 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干 5 即刻用刀片切碎组织 6 放进一个预冷的15毫升锥形离心管 7 加入5毫升预冷的稀释液（Reagent C） 8 涡旋震荡5秒，充分混匀 9

7、即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器 10在冰槽里用研磨棒匀化组织（留意：切莫过度匀化） 11将全部组织匀浆物移入15毫升锥形离心管 12置入冰槽里备用 13移取5微升组织匀浆物进行蛋白定量检测 14移取50微升组织匀浆物（样品）或50微升稀释液（Reagent C）（背景对比）到1毫升石英比色杯里 15加入950微升升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液 16上下倾倒混匀 17放进37恒温水槽孵育20分钟，避开光照 18即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长490nm，散发波长520nm（样品RFU-对 方法三：组织匀浆微量检测 试验开头前，将20冰箱里的试剂

8、盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里溶化，稀释液（Reagent C）放进37恒温水槽里预热。然后移出10微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入200微升稀释液（Reagent C)，混匀后，将染色工作液置入暗室里。然后进行下列操作。 1 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量 2 移取200毫克组织，放进预冷的15毫升锥形离心管 3 加入1毫升的清理液（Reagent A） 4 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干 5 即刻用刀片切碎组织 6 放进一个预冷的15毫升锥形离心管 7 加入1毫升预冷的稀释液（Reagent C） 8 涡旋震荡5秒，充分混匀 9 即刻放入预

9、冷的DOUNCE匀浆器 10在冰槽里用研磨棒匀化组织（留意：切莫过度匀化） 11将全部组织匀浆物移入15毫升锥形离心管 12置入冰槽里备用 13移取5微升组织匀浆物进行蛋白定量检测 14移取50微升组织匀浆物（样品）或50微升稀释液（Reagent C）（背景对比）到1毫升石英比色杯里 15加入200微升升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液 16上下倾倒混匀 17放进37恒温水槽孵育20分钟，避开光照 18即刻放进荧光酶标仪检测：激发波长490nm，散发波长520nm（样品RFU-对比RFU）实际RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高 留意事项 1 本产品为20次（1克组织）、100次（200毫克组织）、500次（200毫克组织，酶标板）或40次（组织薄片）操作 2 建议使用新奇组织，手术切除后1小时内的样品 3 操作时，须戴手套 4 孵育时，