国家药监局高级研修院 核酸专题班 人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂申报要求及常见问题解析申报要求及常见问题解析

1、人乳头瘤病毒（HPV）核酸检测试剂申报要求及常见问题解析2016.11苏州要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-2-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-3-人乳头瘤病毒， HPV 基因组：环状双链DNA，E区、L区、LCR； 传播：宿主特异性，组织特异性； 感染：一过性和持续性； 分型：低危型和高危型。-4- HPV检测的临床意义 持续性的高危型HPV感染是导致宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的主要原因。全球范围的研究结果显

2、示，在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在，其中HPV16型、18型、45型和31型感染占80%。低危型HPV一般与尖锐湿疣或低度鳞状上皮内病变相关，极少引起浸润癌。-5- HPV检测的临床意义 宫颈癌诊断与筛查策略 高危型HPV检测与宫颈癌筛查高危型HPV检测用于宫颈细胞学检查异常患者的分流及宫颈癌筛查（包括联合筛查和初筛），可有效地增加宫颈病变检出率，提高细胞学检查敏感性，并降低筛查频率。-6- HPV检测的临床意义 高危型HPV检测的其他用途：HPV核酸检测阳性结果的分流：HPV基因分型（16、18）疫苗效果评价流行病学调查-7- 预期用途 ASC-US分流 与宫颈

3、细胞学检查联合进行宫颈癌筛查 宫颈癌初筛 其他：病毒核酸检测-8- 预期用途限定性要求 高危型界定：HPV基因型1618 26 31 33 35 39 45 51 52 53 56 58 59 66 68 73 82 要求：13型高风险（+5型中度风险）其他型别：提供依据。-9- 预期用途限定性要求 基因分型的考虑 对HPV阳性结果的分流（如16、18型）验证临床意义 用于流行病学调查、疫苗评价、科学研究不建议盲目扩大分型范围-10- 预期用途方法学 PCR-荧光探针法 杂交捕获法 PCR-杂交法 其他：酶切信号放大法等。-11-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性

4、能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-12- 综述资料 有关临床适应症背景情况的描述 生物安全性 同类产品比较-13-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-14- 主要原材料研究资料 主要原材料 引物、探针、酶、dNTP、核酸分离/纯化组分 要求：筛选、来源、制备、质量标准-15- 主要原材料研究资料 企业参考品和对照品 原料选择和制备 参考品/对照品设置：阳性/阴性参考品检测限参考品精密度参考品阳性/阴性对照品 定值资料-16- 生产工艺&反应体系研究资料 生产工艺 反应原理

5、反应体系： 样本采集设备及保存液 核酸分离/纯化试剂（方法） 样本用量、试剂用量、反应条件、质控方法等-17-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-18- 分析性能评估核酸分离/纯化性能阳性/阴性参考品符合率最低检测限交叉反应干扰试验精密度-19- 分析性能评估核酸分离/纯化提取效率、提取核酸浓度等-20- 分析性能评估阳性检出能力针对每种适用的HPV基因型分别验证。-21- 分析性能评估最低检测限针对每种适用的HPV基因型分别验证最低可检测水平。-22- 分析性能评估交叉反应：原理评价：序列比对（被检测

6、靶序列与人基因组及可能存在于人类泌尿、生殖道的微生物基因组之间）；试验验证：其他HPV基因型；人类生殖道寄生微生物或可经性传播的其他病原体；其他常见病原体；人类基因组DNA。-23- 分析性能评估交叉反应： 样品来源 病原体鉴定 浓度水平（滴度确定） 病原体种类：-24- 分析性能评估其他HPV型别单纯疱疹病毒型梅毒螺旋体解脲支原体、人型支原体、生殖支原体（至少两种）淋病奈瑟菌（淋球菌）白色念珠菌阴道毛滴虫沙眼衣原体-25- 分析性能评估阴道棒状杆菌、短小棒状杆菌、鲍曼不动杆菌、耻垢分枝杆菌、脆弱类杆菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌；乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、

7、HIV、EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型。-26- 分析性能评估干扰试验： 潜在最差条件； 代表性HPV基因型，至少在HPV临界阳性水平； 干扰物质：血红蛋白、白细胞、宫颈粘液、阴道避孕药物、女性卫生用品、阴道用抗真菌药物、阴道润滑剂等。-27- 分析性能评估精密度 模拟样本：所有基因型 临床样本-28- 分析性能评估样本收集液：分别完成性能评估，如最低检测限、精密度等。-29- 稳定性 试剂稳定性：实时稳定性、开瓶稳定性、复溶稳定性、运输稳定性、冻融稳定性等。 样本稳定性：样本核酸提取液-30-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断

8、值 临床试验 产品技术要求&说明书-31- 阳性判断值 必须注意到：HPV感染在女性中是广泛存在的，且多为自限性，可自主清除。能够准确检测高危型HPV核酸够用于宫颈癌筛查-32- 阳性判断值需设定合理的阳性判断值，以尽可能地鉴别可导致CIN的HPV感染和一过性感染，从而科学地评价受试者罹患宫颈癌的风险，避免因大量假阳性带来的不必要的检查和处置。-33- 阳性判断值 样本入组标准 试验方案：ROC曲线-34-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-35- 临床试验 理想的宫颈癌筛查策略，关键在于鉴别宫颈癌相关

9、的HPV感染，避免一过性HPV感染的检出，从而避免过多的阴道镜检查带来的额外伤害。 临床试验重点关注：HPV检测对于宫颈癌发生风险的评价能力。-36- 参考文献-宫颈癌筛查指南-37- 临床试验临床试验除应包括HPV病原体检测准确性的评价外，还需完成前瞻性临床试验。-38- 临床试验 HPV核酸检测准确性验证 针对具体预期用途的临床有效性验证 ASC-US分流 与宫颈细胞学检查联合进行宫颈癌筛查 宫颈癌初筛-39- 临床试验 HPV核酸检测准确性验证比较研究试验-40- 临床试验对比方法：同类产品和/或核酸序列测定方法病例选择：各种临床表现的人群（NILM、ASC-US、CIN、宫颈浸润癌等）

10、受试者年龄：30、3039、40岁以上-41- 临床试验样本例数：总例数不少于500例。（基因分型试剂）每种HPV基因型均应具有一定的阳性例数。不同的样本采集方式：同源样本的比较研究试验，2家以上（含两家）临床试验机构，样本例数不少于100例。-42- 临床试验统计学分析对比方法/测序阳性 阴性拟申报产品总计阳性可检测到阴性不可检测到总计基因分型检测试剂：不同基因型分别统计-43- 临床试验 针对具体预期用途的临床有效性验证-44- 临床试验ASC-US人群分流用途ASC-US人群 HPV检测 阴道镜检查（必要时结合病理）-45- 临床试验ASC-US人群分流用途 临床试验终点病理学检查结果C

11、IN2的例数应不少于60例。 针对CIN2、CIN3分别进行临床性能评价。-46- 临床试验ASC-US人群分流用途在ASC-US人群中HPV核酸检测结果与疾病状态相关性HPV检测结果组织病理学结果正常 CIN1 CIN2合计阴道镜阴性（无病理检查）CIN3HPV阳性A1A2 A3A4A5A1+A2+A3+A4+A5HPV阴性 B1 B2 B3 B4 B5合计 A1+B1 A2+B2 A3+B3 A4+B4 A5+B5B1+B2+B3+B4+B5N-47- 临床试验ASC-US人群分流用途 评价指标：临床灵敏度临床特异性阳性/阴性预期值阳性/阴性似然比发病率（阳性率）-48- 临床试验宫颈癌联

12、合筛查用途CIN2CIN2HPV16/18+ 阴道镜/病理NILM ASC-US随访/年HPV+HPV-随访终点细胞学正常随访/3年&终点-49- 临床试验 宫颈癌联合筛查用途 CIN2为判定标准，终点阳性例数不少于60例。 随访时间建议至少持续三年。-50- 临床试验 宫颈癌联合筛查用途 评价指标：相对风险值: HPV+ vs. HPV-分型HPV+ vs. 其他HPV+分型HPV+ vs. HPV-其他HPV+ vs. HPV-绝对风险值: HPV-51- 临床试验 宫颈癌初筛用途 入组人群：常规筛查人群 基础检查：HPV&细胞学检查-52- 临床试验 宫颈癌初筛用途 随访方案：HPV16

13、/18+，HPV+&ASCUS 阴道镜/病理其他 HPV+ASCUSHPV-&细胞学阴性随访/年随访/年随访/3年&终点随访-53- 临床试验 宫颈癌初筛用途 随访时间：至少持续三年 30岁以下人群需单独统计 评价指标（增加）：相对风险值：NILM vs. HPV-54-要点 适用范围 综述资料 主要原材料&生产工艺、反应体系 分析性能评估&稳定性评价 阳性判断值 临床试验 产品技术要求&说明书-55- 产品技术要求与注册检验 参考品设置（关注国家参考品更新） 行业标准YY/T 1226-2014-56- 产品说明书【预期用途】该产品用于体外定性检测女性宫颈样本（如宫颈脱落上皮细胞或分泌物等）

14、中高危型人乳头瘤病毒（HPV）（列出具体能够检测的基因型）核酸（明确检测靶物质，如DNA、RNA）。明确该产品是否能够鉴别HPV基因型。-57- 产品说明书【预期用途】筛查宫颈细胞学检查为ASC-US（意义未确定的非典型鳞状上皮细胞）结果的患者，以确定是否需要进行阴道镜检查；-58- 产品说明书【预期用途】对于30岁及以上的女性，通过检测是否有高危型HPV感染，与宫颈细胞学检查联合进行宫颈癌筛查，此检测结合细胞学病史和其他风险因素的评估、以及临床诊疗和筛查指南的要求，用于指导患者的管理；-59- 产品说明书【预期用途】对于某年龄段（根据临床试验结果而定）女性，通过检测是否有高危型HPV感染，进

15、行宫颈癌筛查，此检测结合细胞学病史和其他风险因素的评估、以及临床诊疗和筛查指南的要求，用于指导患者的管理。-60- 产品说明书【预期用途】未做相关临床试验的产品应在此项下声明：由于未做相关验证，本产品不能用于相关临床预期用途（按照如上项目描述）。由于未完成相关临床试验，本产品不得用于宫颈癌筛查相关的临床用途。-61- 产品说明书【预期用途】强调：1）联合筛查：此检测不能独立或优先于宫颈细胞学检查应用，不推荐在任何年龄段的人群中单独使用本检测进行宫颈癌筛查；此方法不能代替宫颈细胞学检查。-62- 产品说明书【预期用途】强调：2）年龄30岁的女性中，HPV感染率很高，同时自主清除率也很高，因此对这部分人群，如宫颈细胞学检查正常则不应再采用HPV检测进行联合筛查，建议仅采用宫颈细胞学方法进行筛查，或参照上述宫颈癌初筛用HPV试剂进行筛查。-63- 产品说明书【预期用途】强调：3）本试剂检测结果应结合宫颈细胞学检查及其他相关医学检查结果进行综合分析，不得单独作为患者管理的依据。4） HPV核酸