5检查方法与消毒灭菌

1、第十一章 细菌的检查方法第一页，共三十一页。 一、细菌形态检查法一不染色标本检查法活菌轮廓动 力第二页，共三十一页。 单染色法 复染色法 鉴别染色法 革兰染色 抗酸染色 荚膜染色 鞭毛染色 芽胞染色特殊染色法二染色标本检查法第三页，共三十一页。原 理：细胞壁结构学说等电点学说化学结构学说 革兰染色法Gram Stain由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。第四页，共三十一页。涂 片干 燥固 定染 色水洗、吸干镜 检一、制备涂片标本步 骤第五页，共三十一页。二、染 色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定第六页，共三十一页。紫色革兰阳性G+菌红色革兰阴性G-菌1鉴

2、别细菌2选择药物3与致病性有关意 义结 果第七页，共三十一页。 细菌学诊断二、病原菌的检查原则标本的采集和运送防止杂菌污染运送注意保存不同期不同标本抗菌素使用前采集病变明显部位标本必须新鲜第八页，共三十一页。病原菌的检查程序药物敏感试验标本直接涂片镜检别离培养生化试验血清学鉴定动物试验明确诊断初步诊断分子生物学技术其他检测技术观察菌落形态染色镜检第九页，共三十一页。原理 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义结果判断血清学的诊断 - 能看出抗原检测未知抗体 - 效价上下 - 动态观察第十页，共三十一页。种 类凝集试验 - 肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等

3、中和试验 -梅毒VDRL、RPR试验等沉淀试验 - 抗“O试验等补体结合试验 - Q热柯克斯体抗体检测等第十一页，共三十一页。杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 第十二章 消毒与灭菌消毒disinfection灭菌sterilization无菌asepsis防腐antisepsis防止或抑制体外细菌生长繁殖不含活菌杀死物体上的所有微生物无菌操作第十二页，共三十一页。抹布上的细菌 菜板上的细菌 第十三页，共三十一页。热力灭菌法 一、物理消毒灭菌法燃烧-最彻底的灭菌方法烧灼-直接用火焰灭菌方法干烤-加热160-180 2小时干热(dry heat)灭菌法杀菌机理：

4、高温使菌体蛋白凝固变性红外线-热效应只在照射外表产生微波-热效应具有一定的穿透性第十四页，共三十一页。湿热(moist heat)灭菌法加压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法121煮沸消毒法水煮1005分钟(繁殖体)-2小时(芽胞) 流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100 15-30分钟(繁殖体)反复屡次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度6130分钟杀灭致病菌20-30分钟第十五页，共三十一页。湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热比干热灭菌效果好原因1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2、湿热的穿透力比干热大3、湿热的蒸汽有潜热第十六页，共三十一页。辐射杀菌法 紫外线杀菌机理：波长200-300

5、nm的紫外线具有杀菌作用干扰DNA的复制与转录紫外线穿透力较弱特点：应用范围：空气及不耐热物品的外表消毒光复活作用及光复活酶第十七页，共三十一页。杀菌机理：应用范围：电离辐射包括高速电子、X射线和 射线产生游离基,破坏DNA。一次性医用塑料制品的消毒食品的消毒不破坏其营养成分 第十八页，共三十一页。超声波杀菌法 超声波杀菌机理：频率高于20kHz/s而不被人耳感觉到的声波过水时的空化作用空穴效应特点：应用范围：粉碎细胞，提取细胞组分革兰阴性菌较为敏感第十九页，共三十一页。滤过除菌法用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌滤菌器 含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过, 而大于孔径的细菌等颗粒

6、不能通过 适用范围血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 第二十页，共三十一页。滤菌过程第二十一页，共三十一页。低温与枯燥在低温状态下真空抽去水分用途：保存菌种冷冻真空枯燥法：第二十二页，共三十一页。二、化学消毒灭菌法杀菌机理使菌体蛋白凝固变性使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含 物逸出第二十三页，共三十一页。按杀菌能力分类可杀死包括芽胞在内的所有微生物 1、高效消毒剂适用于不耐热力，但要进入体内的物品包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂 醛类消毒剂、环氧乙烷等第二十四页，共三十一页。2、中效消毒剂适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等不能杀死包括

7、芽胞，可杀死繁殖体包 括结核分枝杆菌、真菌、多数病毒第二十五页，共三十一页。可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、 结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒3、低效消毒剂适用于皮肤、粘膜、物体外表和地面等包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高锰酸 钾等第二十六页，共三十一页。龙胆紫干扰氧化、抑制繁殖染料新洁而灭蛋白变性，细胞膜损伤表面活性剂过氧乙酸、碘酒氧化、蛋白沉淀氧化剂红汞、硫柳汞氧化、蛋白酶变性重金属盐高锰酸甲氧化、蛋白沉淀氧化剂乙醇蛋白变性醇类石炭酸蛋白变性，细胞膜损伤酚类常用种类作用机制类别常用消毒剂种类第二十七页，共三十一页。各种消毒剂的应用消毒剂常用浓度 适用范围含氯消毒剂有效氯量4g/L饮

8、水过氧乙酸0.2%-1%皮肤、物体表面、空气戊二醛2%医疗器械碘酒2.5%皮肤、黏膜、物体表面碘伏2%皮肤、黏膜、物体表面乙醇75%医疗器械、皮肤新洁尔灭0.4%-1.6%皮肤、黏膜、物体表面高锰酸钾1-10g/L皮肤、黏膜、食具、蔬菜等第二十八页，共三十一页。影响消毒剂作用的因素消毒剂细菌 环境种类浓度作用时间菌龄种类有机物温度酸硷度第二十九页，共三十一页。1、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围2、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素3、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义4、据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微 生物学的诊断方案？预习：微生物的遗传与变异思考题第三十页，共三十一页。内容总结第十一章 细菌的检查方法。第十一章 细菌的检查方法。复染色法 鉴别染色法 革兰染色。由丹麦医生Hans Christian Gram于1