核医学课件：第六章 体外分析技术

1、1第六章 体外分析技术全国高等学校教材 李少林 王荣福主编 核医学第8版p432第一节 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA放射免疫分析法是Yalow和Berson于1960年在研究胰岛素的时候创立的一种体外放射分析技术。结合了放射性核素的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。Dr. Yalow 3一、基本原理竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（Ag）与定量的标记抗原（*Ag）对限量的特异性抗体（Ab）的竞争抑制结合反应。4基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag AbAg+*Ag-Ab + *Ag(B)(F) *Ag与Ag 免疫活性相同*AgAg

2、 AbAg= * Ag , AgAb=*AgAbAg *Ag , *AgAb (B) *Ag(F)Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)5剂量反应曲线：标准曲线标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。 6标准曲线的绘制方法用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F；分别测量B和F的放射性；用反应变量（如B/F）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准

3、抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。 7B%标 准 曲 线8二、基本试剂（一） 抗体1、抗体的亲和力2、抗体的特异性3、抗体的滴度（二）标记抗原1、比活度2、放射化学纯度3、免疫活性（三）标准抗原（标准品）（四）分离方法1、双抗体法2、沉淀法3、双抗体法+沉淀法4、吸附分离法5、固相分离法（五）放射性测量仪器9三、RIA的质量控制一个理想的、没有误差的“完美”测定，应该是标本样品的分析物无论是在一次测定中的任何位置，无论是重复测定几次，甚至在不同实验室所测得的结果都是一样的，而且所测值就是这个样品的真值。 但是，在实际工作中，这种理想的测定是

4、不可能达到的。 任何一种分析方法都会产生误差。10误差的分类和来源：根据来源不同的误差，可以把实验中产生的误差分为两类：系统误差随机误差111. 系统误差： 是由于试剂、仪器或操作方法上一个固定的缺陷而造成整批结果倾向性的偏差，影响了结果的正确性。系统误差引起的测定结果的偏差是固定的偏大或偏小。系统误差是可以避免的。122. 随机误差：是由于实验过程中各种偶然因素造成同一样品多次测定的结果不一致。误差的出现是随机的，与真实值的偏离是双向性的，可大可小。 随机误差无法避免。13（二）质量控制 质量控制就是使用合适的方法以检查、表示和消除来自试剂药盒和测量体系的误差，并使这种误差降低到某一允许水平

5、。具体作用有：1检查误差的程度，决定测定结果的取舍。2识别误差的来源并消除其原因。3改进测定方法的设计以提高质量。 14RIA质量控制指标包括实验室内部质量控制和实验室间的质量控制。实验室内部的质量控制侧重于对检测质量的控制，保证从样品收集到发出结果报告的整个过程中能及时发现各种误差，并分析原因，找出纠正的方法。质量控制的指标包括： 精密度、准确度、灵敏度、特异性、稳定性15第二节 免疫放射分析immunoradiometric assay, IRMA16*Ab+Ag-*Ab + *AbAg（B）（F）在体外条件下, 利用Ag与过量的*Ab的非竞争性结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出A

6、g 量的一种超微量分析技术。一、基本原理17免疫放射分析是一种非竞争性的抗原抗体反应，是用过量的放射性标记抗体来测定样品中的抗原，其中标记抗体是过量的，抗原全部是非标记的。将放射性核素标记在抗体上，用过量的抗体与抗原结合，反应平衡后，用分离方法除去多余的抗体，测量抗原-标记抗体复合物的放射性。利用抗原-标记抗体复合物的放射性活度与抗原剂量之间的函数关系来测定待测抗原的量。 18二、实验方法1、双抗夹心法（最常用） 2、标记第三抗体法3、双标记抗体法19IRMA和RIA的区别 1. 反应机制不同： RIA是竞争性反应；IRMA是非竞争性反应2. 反应试剂： RIA主要试剂有三种，标记的是抗原； IRMA主要试剂只有两种，标记的是抗体。 3. 分离方法不同： IRMA需要2个或2个以上的抗原决定簇； RIA只需要一个抗原决定簇。4. 剂量关系： 待测抗原复合物的放射性在RIA中于待测抗原的量