罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用课件

1、罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用广州军区武汉总医院心内科丁世芳 曹选超 卢青 研究背景经皮冠状动脉腔内成形术（percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA）SMC过度增殖迁移血管内皮损伤血管负性重塑炎症细胞激活血管弹性回缩血栓形成、机化再狭窄 影响PTCA术后再狭窄重要因素血管内皮损伤平滑肌细胞的过度增殖、迁移脂肪组织：内分泌器官？分泌多种物质，如纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、瘦素、肿瘤坏死因子-a、抵抗素及脂联素(adiponectin，APN)等改善胰岛素抵抗、调节脂肪代谢、防止动脉粥样硬化等方面有着重要作用脂

2、联素也被称为apM1、Acrp30或AdipoQ，是一种脂肪细胞特异的细胞因子脂联素(adiponectin APN) 生物学作用抗AS抗炎抗氧化胰岛素增敏噻唑烷二酮类(TZDs)药物是高选择性过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）激动剂，是治疗2型糖尿病的一类新药该类药物与体内受体结合后激活，从而改善2型糖尿病患者的胰岛素抵抗、高胰岛素血症和高糖血症代谢紊乱 罗格列酮就是其中有代表性的一种实验设计罗格列酮对髂动脉球囊损伤兔血管内皮的保护作用随机分组模型制备血清学指标病理形态学研究内容1. 实验动物及分组手术对照组1仅行右侧股动脉结扎术，普通饮食喂养2高脂饮食喂养8周后，行右侧髂动脉球囊内膜剥

3、脱术模型组3高脂饮食8周+右侧髂动脉球囊内膜剥脱术+术前3天罗格列酮（2mg 1/日）罗格列酮组2. 兔腹-髂动脉血管内膜损伤模型制作 麻醉速麻安肌肉注射 右侧膝上大腿内侧股动脉搏动最明显处纵行切开皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉 3. 血生化标本的采集和测定 于实验初和术后1、4周末采测血糖（FPG）、总胆固醇(TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)、 低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)和超敏C反应蛋白（hs-CRP）的含量 ELISA法测定血浆中脂联素的表达水平4. 病理形态学观察 术后1、4周末处死各组动物，游离腹主动脉并逆行分离至髂总动脉和股动脉，以左、右髂动脉分叉

4、点为参照，依次留取病理标本各12 cm，固定切片，分组编号 HE染色及弹力纤维染色观察受损血管组织形态学改变，利用图像分析软件，进行新生内膜面积、中膜面积及内膜增殖指数等分析5. 免疫组化及细胞凋亡检测免疫组化（ SABC法）烤片，脱蜡，水化 封闭内源性过氧化物酶 热修复抗原 BSA封闭 滴加一抗 滴加二抗 滴加SABC DAB显色 苏木素复染脱水，透明，封固阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（400倍），染色完成后在光镜下观察结果，以细胞浆内棕黄色粗大颗粒为阳性。HPAIS 1000高清晰度彩色病理图像分析系统采集图像， Image-Pro Plus version 6.0软件对图像

5、进行分析。细胞凋亡检测（TUNEL法）19烤片，脱蜡，水化 封闭内源性过氧化物酶 蛋白酶消化 标记缓冲液 滴加生物素化地高辛抗体 滴加SABC DAB显色 苏木素复染脱水，透明，封固阳性表达分析：每份标本分别选取5个高倍视野（400倍），染色完成后在光镜下观察结果，细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞。计算细胞凋亡的阳性率=（阳性细胞数/观察细胞总数）100%组别时间FPGTCTG HDL-CLDL-C正常对照组08.440.401.430.090.730.130.910.140.710.0818.290.341.370.630.690.130.860.160.680.3448.260.451.4

6、10.290.740.140.880.130.740.09模型组08.410.461.380.070.810.200.920.150.690.0918.330.4228.711.72b1.080.25b0.870.1418.320.92b48.310.1927.624.83b1.210.17b0.900.1419.271.26b罗格列酮组08.560.431.420.100.780.110.850.120.730.1018.410.1719.751.66bd0.890.14ac0.830.098.340.58bd48.370.2618.522.13bd0.840.06d0.870.127.58

7、0.71bd1. 罗格列酮对血脂、血糖及APN表达的影响实验结果 各组不同时间点APN水平的比较 （ug/ml）手术对照组模型组罗格列酮组2.292.322.352.371.441.622.351.171.85 各组不同时间点hs-CRP水平的比较 (mg/l)手术对照组模型组罗格列酮组1.721.691.741.754.874.321.676.393.272. 病理形态学改变HE染色结果（术后4周末）对照组 100模型组 100罗格列酮 100弹力纤维染色结果（术后4周末）3. 免疫组化染色结果 对照组400 模型组400 罗格列酮400 PCNA免疫组化结果（术后1周末） 手术对照组模型组罗格列酮组各组髂动脉标本细胞凋亡检测结果1.3621.8436.251.4018.6424.79结论1. 高胆固醇饮食加髂动脉球囊内膜损伤的方法可以较好的模拟血管再狭窄的病理生理过程2. 高脂饮食加球囊损伤后血浆APN水平明显减低， 且与内膜增殖程度呈明显负相关；罗格列酮干预后APN水平明显升高，血管管腔狭窄程度亦相应减轻3. 罗格列酮可有效抑制血管损伤后内膜平滑肌细胞的增殖并