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文档简介

1、医学免疫学实验二 流式细胞术 流式细胞仪的检测信号-散射光流式细胞仪的检测信号-荧光信号常用荧光染料光谱重叠补偿技术特点”“流式细胞仪的应用细胞表面抗原分子的测定细胞凋亡检测细胞因子测定（胞内，胞外）在肿瘤学方面的应用在血液学方面的应用细胞分选步骤：（团结友爱版）昆明小鼠拉颈处死，取出脾脏，放入PBS中，尽量去除筋膜，过筛网:将脾脏放在筛网上，用玻璃针筒的针芯碾压，注意要少碾多压，这样可以减少对细胞的损伤，用少量PBS冲洗，放入离心管中，终体积为5ml，3000转/分,10分钟。离心后弃上清。再次洗细胞1次。离心后弃上清，用细胞裂解液破红细胞，一般每只小鼠的脾脏用3ml置于4冰箱中，20分钟，

2、其间轻轻混匀2次。用PBS加到7ml,离心洗细胞2次。最后一次弃上清后，加入3mlBSA-PBS混匀，分装在1mlEP管中，成为3份。将1mlEP管中的细胞分装,体积为0.4ml，0.3ml，0.3ml，分别是空白管，阴性对照管和实验管。阴性对照管加入PE同型对照抗体2l，实验管加入PE-anti- CD19 2l，混匀4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS离心洗2次。最后一次用PBS洗3000转，2分钟。弃上清，加入固定液500l，筛网过滤，4避光存放。C6检测。步骤昆明小鼠拉颈处死，取出脾脏，放入PBS中，尽量去除筋膜，平均分成3份。过筛网:将脾脏1/3放在筛网上，用玻璃针筒的针芯

3、碾压，注意要少碾多压，这样可以减少对细胞的损伤，用少量PBS冲洗，放入离心管中，终体积为1ml，3000转/分,10分钟。离心后弃上清。再次洗细胞1次。筛网用后立即清水清洗。晾干。离心后弃上清，用细胞裂解液破红细胞，一般1/3小鼠的脾脏用1ml置于4冰箱中，20分钟，其间轻轻混匀2次。加1ml BSA-PBS,离心洗细胞3次。混匀，离心，弃上清。加入100l BSA-PBS混匀，平均分成3管，每管约50l 细胞悬液。空白管不加任何试剂，阴性对照管加入PE同型对照抗体2l，实验管加入PE-anti- CD19 2l，混匀4避光孵育45min。加入1mlBSA-PBS离心洗2次。最后一次用PBS洗

4、3000转，2分钟。弃上清，加入PBS 500l，筛网过滤，流式细胞仪检测。”“所用试剂PE anti-mouse CD 19 BioLegend 115507PE Mouse IgG2a，Isotype Control BD555574红细胞裂解液 Andy Bio P060017 ”“注意：荧光剂有毒，请在使用荧光剂时带乳胶手套！荧光剂应避光，否则易淬灭！自行分析流式结果，实验报告交付时间12月16日。关于流式细胞仪和实验报告电压不需调节可调节软件英文中英文都可1 打开仪器开关2 打开电脑开关3 打开流式分析软件4 点击细胞仪-开机流程（大约8分钟）EP管加DDW5 点击新建文件夹-选好图形，散点，直方图，直方图调染色剂6 运行，圈门。调电压用带字母G的小手图标调7 改门，用G图标

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