临床和实验药理学和生理学

1、临床和实验药理学和生理学（2006） 33, 685 -689布莱克威尔出版亚洲原创文章 LPS对非索非那定配置Y通等人的影响。在大鼠非索非那定的配置变更 离体肝脏注射 细菌脂多糖Yen Tong 茹红章，苏翁 NT NGO 和 Andrew K Davey我院药学和医学科学，南澳大利亚大学学院市 东校区，阿德莱德、南澳大利亚、澳大利亚 总结1。本研究的目的是审查的影响 细菌脂多糖（LPS）的配置有机阴离子转运多肽和P-糖蛋白 在大鼠离体肝基质。2。雄性Sprague Dawley大鼠随机分为四组。 三组1,2.5或5毫克/公斤，腹腔注射,Escherichia 在无菌生理盐水colilps。

2、第四组获得了一个等 价物。无菌生理盐水腹腔注射治疗二十四小时后的体 积，大鼠麻醉后，肝脏隔离灌注在一个循环系统的2000纳克/毫升的浓度盐酸 非索非那定。灌流液和胆汁标本60分钟，肝脏是在灌注结束收集。采用高效液相色谱法测定盐酸非索非那定的浓 度。非索非那定的药代动力学参数，最终肝灌 流液（L P）和胆汁：肝脏（BL）测定浓度比。三.注射LPS改变非肝配置。最显着的变化，在 5 mg/kg LPS组。值得注意的是，从灌流液清除率（CL）和 成胆汁（CLB； 5.90.6 和 1.240.20 毫升/分钟， 分别），L： P （4411 ）和 B： L （172）均降低（P 0.05）在这组与对

3、照组相比（CL 101.1毫升/分钟； clb2.70.5 毫升/分钟；L： P 8714； B：我 30 4）。4。总之，CL和clbwere减少后处理 与LPS的方式下调一致 泪小管和正弦运输。关键词：非索非那定，离体肝、有机 阴离子转运多肽、糖蛋白、鼠。简介它是建立在一个创伤的细胞因子反应 或微生物的侮辱可以改变一系列的 drugmetabolising酶的表达，特别是细胞色素P450 （CYP450）家庭。在许多炎症反应为特征的疾病中，这些酶活性 的变化会影响血浆。药物浓度，可能导致严重的临床后果。转运蛋白转运的化合物如糖，胆固醇和胆盐，金属离子在内、外膜，这样，是正常的自我平衡机制的

4、关键。3除了其稳态的作用，一些转运控制各种物质进出细胞的运动。5-10因此，这取决于他们身体内的表达，转运蛋白可以调节底物的通道，包括治疗药物，在某些脆弱的器官（脑、睾丸、胎 盘）或提高其从体内消除（肾、肝、肠）。证据的关键药物转运蛋白可能受以类似的方式对细胞因子开始出现，与潜在的，这样的变化可能会对吸收的影响， 药物的分布与消除。肠细胞对比在表达的外排转运蛋白P-糖蛋白的变化（P-糖蛋白；在人类和mdr1a和mdr1b MDR1编码啮齿类动物），已经注意到在体内vitrofollowing 曝光细菌内毒素（LPS ）或细胞因子。11它已经表明，MDR1表达上调在Caco-2细胞暴 露促炎细胞

5、因子，十二而LPS处理的大鼠，多药耐药基因及其抑制。十一在大脑中，多药耐药基因及其表达下调在中枢 神经系统（CNS）炎症，有可能增加跨越血脑-底物的访问屏障。十三多个转运蛋白的转录是众所周知的 在急性炎症的肝脏中的变化。14 - 17转录mdrla通常是在急性炎症减轻，但Mdrlb 可以减少16或增加。 十四 转运以外P-gp已研究很少，但外排转运，包括多药耐药蛋白（MRP2、MRP3, MRP6） 和胆盐输出泵，以及摄取蛋白质，包括 有机阴离子转运多肽（OATP 1, 2和4）,钠/ 牛磺胆酸钠cotransporting多肽（NTCP），有机 阳离子转运蛋白（10月1日）和有机阴离子转运蛋

6、白 （燕麦3），有被证明是下调的。14、17与此相反，MRP1，MRP3已显示出增加。十四尽管有证据表明，一些转运 受炎症，大部分的研究都集中在P-gp。可以推测，由于P-gp的活性变化 细胞因子转运以外P-gp的研究较少，但外排转运蛋白，包括多药耐药蛋白（MRP2、MRP3，MRP6） 和胆汁盐输出泵，以及摄取蛋白质，包括 有机阴离子转运多肽（OATP 1, 2和4）,钠/ 牛磺胆酸钠cotransporting多肽（NTCP），有机 阳离子转运蛋白（10月1日）和有机阴离子转运蛋白 （燕麦3）被证明是下调的。14、17与此相反，MRP1，MRP3已显示出增加。十四尽管有证据表明，一些转运

7、受炎症，大部分的研究都集中在P-gp。可以推测，由于P-gp的活性变化 细胞因子会导致其底物药物配置改变 十八和这已经在佐剂性关节炎大鼠肝脏表现。十九然而，需要记住的是，转运蛋白常常协同作用 于外排药物。例如，肝细胞膜，促进运动的正弦底物进入细胞，在那里他们被代谢或排泄 通过位于细胞膜外排转运到胆汁。20,21因此，很明显，该药物是一个基板对应：Andrew K Davey Sansom学院、药学院 科学和医学，南澳大利亚大学，市东校区，GPO 框2471，阿德莱德，SA 5000，澳大利亚。电子 由E件： HYPERLINK mailto:andrew.davey.au andrew.dav

8、ey.au2005年11月8日收到；2006年1月3日修订；1月17日接受2006。2006作者学报编辑2006布莱克威尔出版亚洲有限公司686 Y 等。2006作者学报编辑2006布莱克威尔出版亚洲有限公司 摄取和外排转运，减少药物清除率无论是抑制摄取转运，抑制外排转运，或两者 的组合。最近的在使用不同模型的体内研究表明，炎症 后者就是这种情况。22、23然而，炎症反应与许多系统的生理变化有关。 影响肝、肾清除率的潜在因素，无关转运活性。采用离体肝（IPL）系统、米尔恩等人。 表明，选择性抑制P-gp或OATP引起的 减少胆道清除（CLB）非索非那定。二十四使用该模型，值得注意的是，当P-g

9、p抑制，肝脏灌流液 浓度比（L，P）保持不变，而有一个 胆汁与肝脏浓度比值显著降低（b： L）。二十四相反，当Oatp被抑制，没有意义改变B： L,但L P明显减少。因此，通过 使用IPL,应该有可能阐明是否肝脏。一种药物，如非索非那定，由前降低 炎症的侮辱，如果是这样的话，无论是正弦或 小管转运机制主要是负责减少改变 在间隙。此外，因为它可以保持一个固定的 通过肝灌流液流量，得到的结果IPL不太可能被生理变化所迷惑。这是与内毒素血症。因此，本研究的目的是确定如何清除模型OATP / P-gp底物非索非那定的影响 大鼠注射不同剂量的IPL 24 h后从这一点，确定可能的机制间隙变化。方法化学制

10、品盐酸非索非那定是一个从Hoechst玛丽恩Roussel 礼品（Bridgewater,NJ,美国）。红细胞游离克雷布斯-亨氏碳酸氢 盐缓冲液，含葡萄糖（16.5 mmol/L ）和牛磺胆酸钠（8.33pmol/L）被用作灌注介质。制备的所有化学品灌注介质为分析级，用作商业供应。Acetonitrile（BDH, Poole，英国），磷酸二氢钾正磷酸盐 （AR级；Ajax的化学品，奥本，新南威尔士州， 澳大利亚）的需要水用于高效液相色谱。实验设计十六只雄性Sprague Dawley大鼠（250 - 350克） 从动物资源中心（吉尔斯平原，沙县，澳大利亚）。 动物饲养分别在受控环境下的塑料笼

11、子里；黑暗循环，温度范围20 - 22 C，免费获得食物 和水。在本研究中对老鼠的伦理认可是从医学与兽医科学研究所（IMVS）动物伦理 委员会（阿德莱德，沙县，澳大利亚）。大鼠随机分为三个处理组和1个对照组（n = 4 每组）。治疗大鼠给予5，2.5或1毫克/公斤， 腹腔注射大肠colilps （0127： B8；西格玛，圣 路易斯，穆村，美国）溶解无菌盐水。对照组注射等体积的无菌生理盐水（1毫升/千克）。注射LPS后二十四小时，大鼠麻醉60 mg/kg戊巴比妥钠（戊巴比妥钠；60毫克/ 毫升；勃林格殷格翰，北岸，新南威尔士州， 澳大利亚）和肝灌流描述以前。二十四简而言之，胆管、肝门静脉和下腔

12、静脉空心和肝脏灌流速度在30毫升/分钟的平衡时间为15分钟。空白液和胆汁收集流出液 在此期间确认的可行性肝脏。在灌注，灌注液保持在pH值范围 之间的7.35和7.45，获得源源不断的氧气通过 流入高（95% O2 / 5%2）。一旦肝脏平衡，灌注是一个单向灌流从切换到250毫升循环灌流介 质（PM）含有2000毫微克/毫升，非索非那定。 在此期间，下午添加牛磺胆酸钠（15pmol / h）。 肝脏的活力是全程监控每一个人 通过评估耗氧灌流实验，胆汁流量（ 5p升/分钟）和灌流液的pH值。肝脏允许 的条件活力和完整性：流入时氧消耗250 - 350% （18-24毫克/毫升）和7.35 -流入

13、时pH值7.45。流出下午离开肝脏需要具备80个- 120%氧饱和度（6-8毫克/毫升）和pH范围在7.20和7.35之 间。肝脏进行检查在灌注过程的最后和结束时，确保它们有一致 的粉红色-棕色。在色彩一致性的缺乏是一个迹 象氧气不足使肝脏和脑灌注不足通过肝脏。 任何不符合这些标准的肝脏被排除在研究之 外。灌流液样品（1毫升）的循环水库收集在 0, 1, 3，5, 10, 15，20, 25, 30，40, 50 和 60 分 钟胆汁标本在10分钟的时间间隔超过60分钟灌注期间。 在结束时灌注，肝收集和权衡。所有样品都存放在20 C直到分析。样品分析高效液相色谱法与紫外检测测量在灌流液和胆汁非

14、索非那定的浓度。高效液相 色谱系统包括一系列1100自动进样器,1100等度泵,1100 变波长检测器（休利特帕卡德,Boeblingen,德国）， 一个cr6a色谱仪组件集成（岛津，京都，日本）， 铂 EPS C18（100a5u,250毫米/ 4.6毫米，批号26 / 152 / 2）柱和 c18precolumn （该Deerfield、IL、美国的同事,）。检测器波长设置 为225纳米。，流动相为0.024 mol/L磷酸二氢钾正磷酸盐：在比58的乙腈：42； pH值调整到3.6，用0.1 mol/L正磷酸。在这些非索非那定的保留时间条件被认为是约12分钟的标准曲线，用100p 克/毫

15、升稀释原液空白非索非那定了灌流液的浓度范围在0.02 - 2.5等分的p克/毫 升。标准曲线的浓度被存放在-20 C为使用在 分析过程。样品（标准曲线，灌流液和胆汁） 解冻，旋涡混合，离心1000 gbefore分析。注射量 100pL；灌流液样品稀释胆汁样品； 1用空白稀释灌注介质从每个IPL可获得500 程序。肝脏是在同等体积的水的均质化，0.70毫升 匀浆然后加入0.70 mL乙腈的混合物 然后离心30 min 1500加夫特被涡旋2分钟。 上清液通过0.45pM注射器过滤器然后100pL 滤波注射到高效液相色谱中。制备肝标准曲线 以肝与空白灌注介质灌注；浓度为标准曲线的范围从2到10p

16、克/毫升盐酸非索非 那定；质量控制制备浓度为3和6p克/毫升盐酸非索非那定。 内和日间的精度为97 - 107% （n = 6）和90 - 107% （n = 12），分别；资格限为 20 ng/ml。 药代动力学与统计分析对数据进行统计分析，使用的药代动力学和 WinNonLin （pharsight 公司，卡里，NC，美国）。 在60分钟的灌流液中盐酸非索非那定的浓度来 计算的间隙灌流液（CL），曲线下面积60 min灌注期间（AUC0-60），AUC0-g和消除速率常数（k）使用非房室静脉注 射模型。非索非那定的最终浓度在肝脏， 灌流液和胆汁用来计算B： L和L： P. Biliary过

17、 关被分泌到非索非那定的累积量确定 影响LPS对非索非那定的性格6872006作者学报编辑2006布莱克威尔出版亚洲有限公司 胆汁（AE）除以AUC0-60。三组各参数LPS处理与利用anovawith Tukey控制相比 事后测试。皮尔森相关系数测定的影响LPS对药物动力学参数的影响。PW0.05被认为 统计学意义。结果在灌注过程中，肝脏的活力通过监测氧的消耗 证实，胆汁流量和灌流液的pH值。值得注意的 是，15分钟的平衡期在LPS处理的动物胆汁流量趋于低开始上升 在这段时间内，5p升/分钟。肝脏60分钟以上 灌流与非索非那定，胆汁流量大于 5p升/分钟的所有动物均无显著差异1者之间的胆汁流

18、量，2.5和5 mg/kg LPS处理 对照组在这段时间内，与四的平均胆汁流动5.61 土组 0.59、5.390.47, 5.49 0.48 和 5.58 0.61 土土p升/分钟，分别。各组间无差异。 在任何其他肝活性参数。图1显示了非灌流液中的浓度 四组大鼠在IPL期间。很明显，肝脏是由 给予生理盐水以前最快的非索非那定大鼠 清除从灌流组LPS相比。虽然非索非那定-时间分布从1和2.5毫克/公 斤LPS组与对照组的差异较小，5毫克/公斤LPS组从明显不同对照组。这是图2中也很明显，在量的非索非那定 胆汁排泄到超过60分钟灌注最高控制 动物和显著低于5毫克/公斤LPS组， 与其他两个LPS

19、组显示减少非索非那定的排泄，没有显着不同的， 对照组。主要药动学参数列于表1。 从灌流液的清除率下降，导致较低的值K和AUC增加，LPS处理组。那里 在Ae和其他相应减少。两者：L和B： L 较低的LPS处理组比对照组。有一个LPS剂量和显著的相关性 在降低相关的所有的药代动力学参数变化 非索非那定的间隙。在5 mg / kg LPS组，所有 相关参数的改变非索非那定间隙明显 与控制值不同。然而，在1和2.5毫克/公斤 LPS组比较差异无统计学意义 与对照组相比（见表1）。讨论一种药物的清除是一系列的生理依赖性 因素.这些因素可能包括内在的酶和/或转运活 性，竞争性抑制剂的存在，血浆蛋白。不同

20、的脂多糖处理对大鼠非索非那定的药代动 力学参数的影响表1离体肝治疗K（/ min）-AUC0 60（pg.min / ml）氯（毫升/分钟）CLB（毫升/分钟）AE（pg） L P B L生理盐水 0.042 0.001 46 362 4872 10 1 2.7 土土 0.5 123 14 87 14 304脂多糖1 毫克/公斤 0.035 0.006 48 918 2385 8.9 0.8 2.2 0.5 106 24 8433 20 22.5 毫克 / 公斤 0.035 0.004 51 431 2596 8.60.7 2.1 0.3 109 14 6114 27 95 毫克/公斤 0.0

21、25 0.006X65 307 4439X5.9 土 0.6X1.2 0.2X8111 * 44 11 * 2 * 17 数据为平均数SD （n=4）。* P0.05与生理盐 水组相比（方差分析）。我：P,肝灌流液的浓度比；B： 1、胆肝浓度比； CL, CLB，从灌流液和胆汁清除，分别；AE,排泄到胆汁非索非那定的累积量；AUC0 60，曲线下面积为60 min灌注期。图1浓度时间曲线的非索非那定-在灌流液与 生理盐水组大鼠的离体肝脏灌注之前在（）1 （）, 2.5 （）或5毫克/公斤（脂多糖，i.p.） 图2累积量的分泌到胆汁中盐酸非索非那定 与生理盐水组大鼠肝脏灌注（以前）或1 （2.5

22、），（）或5毫克/公斤（脂多糖，i.p.）688 Y 等。2006作者学报编辑2006布莱克威尔出版亚洲有限公司 结合，血液流到结算的器官，如肾脏 清除药物、尿ph值和流速。疾病有能力的地方 改变一个或更多的这些生理变量，有 药物的清除可能导致改变的潜力，在疗效或药物毒性的变化。情况就是这样。 无论是药物是用来治疗疾病本身或合并症。严 重的炎症或免疫反应过程中，如通过注射内毒素引起的，有可能是重要的心血管变化影响血管 渗透，血压和血流量的结算机构， 以及在血浆蛋白的变化。二十五这些影响有可能影响药代动力学参数。沿着 这一点，它越来越成为公认的炎症可 影响药物转运蛋白的调节，这可能是一个 在改变

23、药物的药代动力学的重要机制 炎性疾病患者。事实上，众多的转运，以及药物代谢 酶，在炎症反应开始后下调，可能很难解释其 中的哪一种。机制是负责观察对药物的处置的任何改变。事 实上，有一个缺乏研究，实际上 试图与转运蛋白mRNA的变化改变药物 性情一个选项，可以用来尝试识别 运输是负责减少间隙管理非常特殊的转运蛋白的底物或抑制剂。使用此 的方法，Goralski等人。结论：肝功能下调 小管mdr1a而不是正弦Oatp2负责减少胆汁排泄地高辛vivofollowing炎症在中枢 神经系统。十三然而，这些作者没有确定的吸收转运下调的可 能性比其他膜可能在观察到的反应中起作用。最近的体内研究支持的建议，

24、炎症 侮辱可以在胆道间隙通过一个组合的影响 减少肝脏摄取和外排机制。22、23结果目前的研究证实，炎症损伤可导致 降低胆道清除转运底物。此外， IPL模型有许多优点，有助于阐明 这可能会受到各种因素的贡献作用。虽然 IPL比使用肝细胞模型研究转运蛋白活性变化 更具生理意义，它具有优势。在vivomodels，它是不太可能的因素的影响 降低血压和心率，这可能导致大大减少一些药物的清除率，特别是高提取率 的药物。同样，在血浆蛋白是典型的急性时相反应。 血浆蛋白水平的改变可以导致总的变化 这是高度结合的药物清除，甚至在没有任何 影响药物代谢酶和转运体。与IPL 技术，每个肝灌注在一个恒定的30毫升/

25、分钟的 速度，这大大减少了 LPS或细胞因子诱导的心血管改 变对肝清除率的影响，而且没有蛋白质。在灌流液可能对间隙的影响。在 此外，分布容积（Vd）,因此，可以 由血管通透性变化的影响，流体的变化和改变 蛋白结合使用在vivomodel。使用IPL等因素 大大减少。肝外间隙的影响， 水合状态和炎症介质或其他水平 可能竞争转运蛋白的内源性物质 也避免与IPL。因此，使用IPL,肝外 条件是规范化治疗组和任何之间 在间隙的变化更可能是由于改建 在转运蛋白的活性，而不是其他生理因素。 进行IPL时，肝存活率的监测 通过各种手段很重要。特别是低胆汁流量（即V 5pL/mi n）可以是一些潜在的指示 的

26、问题，包括不充分的灌注，肝脏损害时 手术（如通过缺氧）或胆汁位置不正确 套管。然而，它也被称为内毒素血症可降低 胆汁流量，已被归因于胆盐的作用 转运蛋白。二十六这可能会导致问题使用IPL时 探讨胆道清除内毒素注射后，因为 低胆汁流量可能是LPS的管理结果 与程序相关的技术问题。如果是这样的话 观察到初始胆汁流速在肝脏从LPS处理 动物低（特别是在5毫克/公斤，LPS组）。 然而，当肝脏灌注15 min为允许 平衡期，胆汁流量增加5以上p升/分钟。 一个可能的解释就是老鼠，因此肝脏， 在手术前进行脱水，从而影响胆汁流量，但 一旦灌注开始肝能补充水分和， 因此，胆汁流量增加。这个假设是符合的。 观

27、察体重可达10%通常是出现在lpstreated鼠。 另外，在灌注液中的牛磺胆酸钠 可能刺激胆汁流动。无论什么机制，非索非那 定配置LPS和控制之间的差异 在当时没有得到动物的差异 组间胆汁流率。这表明减少 非索非那定的间隙是特异性下调的结果 转运蛋白而不是肝功能的一个更一般的还原。 再次，这提供了一个优势，在vivomodels，哪 里一个动物的一般健康状况有显著的潜力 影响氯，使其难以阐明的意义 转运蛋白表达下调。在L的减少：P和B：我比的测定 作为本研究的一部分建议的下调 泪小管和正弦运输是负责观察 间隙减小。l减少P与表面活性的抑制作用一致, 而减少了 B：我是一致的 降低P-gp的活

28、性二十四并与表达降低线 这些转运蛋白LPS管理报告 其他研究人员。14 - 17从上面的，很明显，内毒素血症可以减少肝非索非那定间隙由于减少在泪小管（即P-gp）和正弦（即OATP）运输。 Fexofenadine被选为模型药物，因为它是不代谢 在很大程度上，先前证明在肝胆管清除的研究 中是有用的。所获得的结果 目前的研究对任何药物或代谢产物，一个是相 关的Oatp和/或P-gp的底物，通过广泛 胆道途径。本研究描述了在24小时后在间隙变化 LPS注射。该领域的其他工作多，以上的讨论, 报告在转运蛋白或其在mRNA的变化 发炎性侮辱的24小时。它还需要确定如何 多久转运活动后恢复正常 最初的侮

29、辱。同样的，大部分的工作都集中在 肝脏。进一步的研究，探讨炎症的影响 对器官如小肠药物转运，肾脏和大脑 是必要的。影响LPS对非索非那定的性格6892006作者学报编辑2006布莱克威尔出版亚洲有限公司 结论注射LPS引起的非索非那定间隙减少中 注射后24小时IPL。本研究表明 两泪小管和正弦运输原因下调 减少非肝胆清除其他可能的OATP与P-gp底物。确认作者承认的大学提供资金南澳大利亚卫生科学研究资助计划师。引用1。摩根等在炎症和调节细胞色素P450 感染.药物代谢。rev.1997； 29： 1129 - 88。2。Davey AK。细胞因子诱导的变化在药物的临 床意义代谢。J.药学。实

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