人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用其分子机制

1、人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用及其分子系统人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用及其分子系统4/4人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用及其分子系统人参皂苷Rk1抗乳腺癌作用及其分子系统乳腺癌是女性最常被诊疗出的恶性肿瘤之一,也是癌症死亡的重要原由。乳腺癌在全部女性癌症病例中约占30%,在全部癌症死亡比率中占14%。与很多国家同样,乳腺癌已成为中国女性中最广泛的癌症,中国新发乳腺癌和死亡病例占世界总数的12.2%和9.6%。当前,手术治疗,放疗和化疗是乳腺癌的主要治疗方法,但有着各样严重的副作用,包含呕吐,恶心,脱发,骨髓控制和血栓等。所以,有必需为乳腺癌患者开发拥有较低副作用的新式抗癌药。人参属植物,作为传统的药用植物

2、,已经遇到了广大研究者的关注。人参皂苷是人参属植物的主要有效成分,有着多种生物学功能,如免疫调理、抗菌、抗疲备、抗肿瘤等功能。人参皂苷Rk1是人参经过办理后生成的一种成分,拥有抗胰岛素抵挡,抗炎和抗癌活性。但是,对于人参皂苷Rk1的抗乳腺癌作用的报导却极少。所以,本课题经过一系列的体内外实验来研究人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞的抗增殖作用及其分子机制。经过单要素和响应面实验提升了二醇组人参总皂苷中人参皂苷20（S）-Rg3,Rk1和Rg5含量,响应面优化后最正确工艺条件为乙醇浓度91.16%,溶解时间42.31min,积淀3次,此时人参皂苷含量为86.842.20%,并经过制备型HPLC制备出了人

3、参皂苷Rk1。采纳CCK-8细胞毒性实验,从人肝癌细胞株SMMC-7221;人肺腺癌细胞株A549;人结肠癌细胞株Caco-2;人胃癌细胞株SGC-7901;人乳腺癌细胞株MCF-7和人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中优选出人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞控制作用最显然。经过120M人参皂苷Rk1办理48h后,MCF-7乳腺癌细胞活力降为16.783.26%,MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞活力降为17.412.94%,而MCF-10A正常乳腺上皮细胞活力为86.152.39%,人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞有着很强的细胞毒性而对正常乳腺上皮细胞基本没有毒性。与此同时,人参皂苷Rk1还可以剂

4、量依靠的促使乳腺癌细胞LDH的开释,120M人参皂苷Rk1办理后使得MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞LDH的开释分别为比较组的6.95倍和6.18倍。其余,120M人参皂苷Rk1办理后MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞克隆形成率分别为2.020.67%和2.270.70%。在体内实验中,人参皂苷Rk1不会惹起荷瘤裸鼠体重的降落。人参皂苷Rk1对荷瘤裸鼠有着显然的抑瘤作用,20mg/kgRk1对MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠抑瘤率为68.31%,对MDA-MB-231三阴性乳腺癌荷瘤裸鼠抑瘤率为66.40%。H&E染色结果表示人参皂苷Rk1能显然控制乳腺癌细胞的生长而且与溶剂比较组比

5、较较,对乳腺癌荷瘤裸鼠的心、肝、脾、肺和肾没有显然伤害。其余,人参皂苷Rk1组与比较组之间谷草转氨酶,谷丙转氨酶和肌酐水平无显着差别,表示荷瘤裸鼠肝肾功能未受伤害。2.经过细胞周期散布检测、Hoechst33342荧光染色、AnnexinV/PI双染、线粒体膜电位检测、qRT-PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化等实验来研究人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞的周期散布以及细胞凋亡的影响。实验结果表示,人参皂苷Rk1能阻滞MCF-7乳腺癌细胞于S期,120M人参皂苷Rk1办理后S期细胞比率为60.441.88%。人参皂苷Rk1能阻滞MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞于G0/G1期,120M人参皂苷Rk1处理

6、后G0/G1期细胞比率为70.921.12%。在MCF-7乳腺癌细胞中,人参皂苷Rk1经过增添p21和p53蛋白水平,减少cyclinA和CDK2表达水平来对MCF-7乳腺癌细胞S期周期阻滞进行调控。在MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞中,人参皂苷Rk1经过上浮p21和p53蛋白水平,下调cyclinD1和CDK4蛋白表达来对MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞G0/G1期周期阻滞进行调控。在细胞凋亡实验中,120M人参皂苷Rk1办理后MCF-7乳腺癌细胞凋亡率为50.274.33%,是比较组的11.88倍,MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞凋亡率为54.873.96%,是比较组的8.95

7、倍。其余人参皂苷Rk1降低线粒体膜电位,上浮Bax水平,下调Bcl-2表达,促使细胞色素c的开释,激活caspases从而引诱MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡。在乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤组织中,人参皂苷Rk1也有着近似的功能,引诱肿瘤细胞凋亡,从而控制瘤块的生长。凋亡控制剂Z-VAD-FMK的使用,更为证了然人参皂苷Rk1是经过caspases的活化来引诱细胞凋亡。3.经过DCFH-DA染色、蛋白免疫印迹和免疫组化等实验来研究人参皂苷Rk1对乳腺癌细胞ROS/PI3K/Akt信号通路的影响。实验结果表示,人参皂苷Rk1能诱导MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中大批产生ROS。蛋

8、白免疫印迹表示人参皂苷Rk1对MCF-7和MA-MB-231乳腺癌细胞总的PI3K、Akt和mTOR表达没有影响,而控制PI3K、Akt和mTOR的磷酸化。在乳腺癌荷瘤裸鼠体内动物实验中,人参皂苷Rk1也能控制p-PI3K、p-Akt以及p-mTOR的表达,有着与体外实验一致的结果。PI3K/Akt信号通路控制剂LY294002使用表示人参皂苷Rk1有着与LY294002近似的作用,PI3K/Akt信号通路激活剂胰岛素的使用更为证了然人参皂苷Rk1能经过控制PI3K/Akt信号通路来引诱MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞死亡。ROS除掉剂NAC的使用表示人参皂苷Rk1能经过ROS/PI3K/Akt信号通路引诱乳腺癌细胞死亡。其余,人参皂苷Rk1能控制MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞葡萄糖的摄入,乳酸的产生以及ATP的形成,控制乳腺